PRACTICA No.

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ACTIVACIÓN MITOGÉNICA
DE LINFOCITOS T
Cuando se activa un linfocito T, una de las respuesta es la mitosis, es decir, que existan MAS CLONAS CON TCR
IGUAL, para producir citocinas e IL-2 para activar la RESPUESTA ADAPTATIVA
 METODO ANTIGUA:

INTRODUCCIÓN MEDIR LA
LINFOPROLIFERACIO
N IN VITRO

• INMUNODEFICIENCIA: Incapacidad del sistema inmune

MUTACIONpara generar una reacción frente a un agente agresor

• Se clasifican en dos grupos replica en CD4 y la toxicidad genera inmunodeficiencia;

DE NOVO Se adquiere despues de nacer, generados por virus, se
(NO
HERADADA) tratamiento contra cancer o radiación; tumores malignos;
O cirrosis (ahogado en matiz de colageno); edad; mal nutricion
( A, D Y C)
(ALELO DE Inmunodeficiencias primarias Inmunodeficiencias secundarias
HEREDADA

LA MADRE
Y/O DEL
PADRE, LO
QUE
PRODUCE
ACTIVIDAD
DEFICIENTE
EN LA
PROTEINA
PRODUCIEN
DO
DEFICIENCIA LINFOCITO B, T, DESARROLLO DE ESTOS, COMPLEJAS: AMBAS, CONBINADAS
SEVERAS: DOS LINAJES QUE FALLAN
• Características generales:

• La principal característica
de la inmunodeficiencia es
una mayor propensión a la
infección

• Los pacientes con

inmunodeficiencias también
son proclives a ciertos tipos
de cáncer
CANCER ASOCIADO A VIRUS; desarrollo de la
infeccion cronica genera cancer.
 Inmunodeficiencias primarias

• La inmunodeficiencia
puede deberse a gamma Deficiencias
defectos en el globulinemi combinadas
desarrollo o activación a: no hay ni B ni T (no linaje)
del linfocito o a
IGg

defectos en los
mecanismos efectores Deficiencias
fagocíticas
de las inmunidades se estancan ahi
innatas y adaptativas granulatosa, no
enfermedad
los B, no generan
Ig
destruye lo
OTRA OPCION fagocitado
• Ciertas Deficiencias
inmunodeficiencias se de células
asocian, Deficiencias deficiencia de Ig reguladoras
humorales
paradójicamente, a
una mayor incidencia a
autoinmunidad No produccion de
algunas Ig
Si recae en deficiencia de Linfocito T regulador, se da una
respuesta exagerada
• Inmunodeficiencia Combinada Severa ligada a X
• Desorden genético que ocurre casi exclusivamente
en hombres
• Mutaciones en el gen IL2Rc causan SCID ligada a X
• Esta proteína es necesaria para el crecimiento y ESTA INCOMPLETO,
maduración de linfocitos FALTA LA ALFA

FALTA LA CADENA GAMMA COMUN,

SE LLAMA ASI PORQUE NO ES
EXCLUSIVA PARA LA IL-2
NIÑOS BURBUJA
 Inmunodeficiencias secundarias
• Desnutrición
• Vitamina A: actúa a través del ácido retinoico, impulsa la respuesta
de Ab, mejora la integridad del epitelio intestinal pues reduce TNF-
 e IL-6
ATRAVIES A LA
CELULAS DENTRITAS
TOLEROGENICAS:
AMBIENTES
ANTIINFLAMATORIO

Mejora integridad de
epitelios e induce IL-
10 PRODUCE
CITOCINAS DE
RECUBRIMIENTO QUE EVITA
ENTRADA DE BACTERIAS
AMBIENTE
REGULACION
Incrementa quimioatracción Mejora protección y
de células T y B disminuye inflamación
Inmunodeficiencias secundarias AFINIDAD A TCD4, AFINIDAD A CD4

• Virus de la Inmunodeficiencia Humana (HIV)

• Infección inicial: HIV replica en macrófagos y DC en tracto genital, migra a
tejido linfoide e infecta células T en centro germinales

CONFORME INICIA LA INFECCIÓN DEL

HIV SE REDUCE LOS TCD4
FASE
CRONICA Y
QUISENTE
LA
REPLICACI
ON

ANTICUERPOS QUE NO FUNCIONAN

BIEN USUALMENTE
 ¿Cómo diagnosticar Inmunodeficiencias Primarias?

El ensayo de proliferación de linfocitos (linfoproliferación) es una

prueba in vitro que evalúa la calidad y carácter de la respuesta inmune
celular (linfocitos T)

Este ensayo es usado para determinar deficiencias congénitas

inmunes, estados inmunocomprometidos temporales, y más
recientemente, progresión de la inmunodeficiencia por la infección del
HIV
MITOGENOS: IL-2,
ANTIGENOS DE
CANDIDA,
FITOHEMATUGLUTINA
 Linfocito T
Las células que realizan MITOGENOS
Concanavalina A, Linfocito T
CD8+
proliferación incrementan su fitohemaglutinina o CD4+
velocidad de producción de antígenos de Candida

proteínas y de DNA.
3H-timidina

El incremento de la síntesis
de DNA puede ser medido al
Proliferación
incorporar [3H]-timidina, un
nucleótido marcado con
radioisótopo, al medio de 3H-timidina

cultivo
La cantidad de tritio [3H]
tomado por las células en
división se correlaciona con
el nivel de proliferación
celular.
Proliferación
PROLIFERICACION: DUPLICAN
CROMOSOMAS, SINTESIS DE
ADN, SE AGREGA TRITIO-
H-TIMIDINA, INCREMENTO EN
LA RADIACION ES MAYOR
PROLIFERACION
Estimulo 3H-timidina
Citoplasma

Núcleo

Cromosoma

Proliferación

Durante la mitosis del linfocito, en la fase S se inicia la replicación de cada

cromosoma. En este proceso nucleótidos serán empleados como bloques de
construcción de los cromosomas que serán segregados a las células hijas. Dentro
de los nucleótidos incorporados, la [3H]-timidina (radioactiva) estará formando
parte de los nuevos cromosomas en las células hijas
 Las células que proliferan también son metabólicamente muy activas e incrementan su nivel celular
de glucosa-6-fosfato deshidrogenasa (G6PDH) y sus productos NADH y NADPH.
CAPACIDAD DE OXIDACION Y REDUCCION, ENTRE MAS CAPACIDAD MAS PROLIFERACION
Los niveles de NADH y NADPH pueden ser medidos por su capacidad de reducir el compuesto de
color amarillo MTT (bromuro de 3-(4,5-dimetiltiazolil-2)-2, 5-difeniltetrazolio) a un compuesto de
color purpura llamado formazan.

El producto purpura resultante puede ser solubilizado y cuantificado por medios

espectrofotométricos.

Absorbancia Proliferación
a 590 nm celular
OTRO METODO DE PROLIFERACIÓN