TRIPANOSOMIASIS

AMERICANA
DIAGNÓSTICO DE LABORATORIO

Dra. Claudia L. Valera M.

INSECTOS HEMÍPTEROS
•Subfamilia Triatominae
• Triatoma infestans

Conocidos popularmente como vinchucas, chinches,

chinchorros y chirimachas, barbeiro.

Infectado por un PROTOZOO

•Trypanosoma cruzi

•Por transfusiones de sangre.

•Por transplantes de órgano.
•De la madre al hijo, durante el
embarazo.
•Alimentos contaminados por los
insectos vectores (excremento, orina).
•El Chagas es casi 100% curable si se trata en
sus etapas iniciales con los medicamentos:
Benznidazol y Nifurtimox.

•La enfermedad de Chagas es endémica en 21

países de las Américas y afecta a un estimado de
6 millones de personas.
 TRIPANOSOMIASIS AMERICANA:

Tres etapas clínicas: Aguda, indeterminada y crónica.

Período ventana (prepatente), cuando T.cruzi ingresa al
organismo, abarca entre 7 a 15 días, después del cual recién se
pueden detectar parásitos circulantes y posteriormente anticuerpos.

Tres aspectos:
Cuándo realizar un análisis,
Qué análisis realizar,
Cuáles son los objetivos del análisis, para evitar la realización de
estudios parasitológicos y/o serológicos en un momento
inadecuado.

La consecuencia posibles falsos resultados negativos.

 MÉTODOS DIAGNÓSTICOS

Pruebas directas e indirectas

La elección del examen a realizar
Depende de cada paciente.
El método de transmisión.
La fase de la enfermedad.

Métodos directos
La presencia del parásito es detectada mediante observación directa,
indicados en fase aguda, detección del tripanosoma en fresco,
métodos de concentración.
Detectan el parásito en la sangre del paciente, suelen denominarse
métodos parasitológicos, y la mayoría están basados en la
microscopía.
 METODOS DIAGNÓSTICOS
 Métodos Indirectos Parasitológicos
 Xenodiagnóstico y el Hemocultivo
Poca utilidad en la práctica en fase aguda
La serología positiva es suficiente criterio para la confirmación
diagnóstica en la fase crónica.
La negatividad en la fase crónica se debe a la presencia intermitente
del parásito en sangre.
 Métodos Serológicos
Son la esencia del diagnóstico de la infección en la fase crónica.
En una etapa inicial de la infección, los anticuerpos contra el T. cruzi
son de la clase IgM, siendo reemplazados gradualmente por IgG
XENODIAGNÓSTICO
 DIAGNÓSTICO SEROLÓGICO

La Organización Mundial de la Salud (OMS) recomienda dos pruebas

basadas en diferentes principios y antígenos.
En caso de discordancia se realiza una tercera prueba para confirmar la
infección.
Detección de anticuerpos IgG
 Técnicas indirectas más empleadas son: Inmunofluorescencia indirecta
(IFI), Hemoaglutinación indirecta (HAI) y el Enzimoinmunoanálisis
(ELISA).
 Estas pruebas de detección de anticuerpos son muy sensibles, pero su
especificidad está limitada por su reactividad cruzada con anticuerpos
de pacientes con otras parasitosis como Leishmaniasis (enfermedad
con la misma distribución geográfica que la enfermedad de Chagas).
 Hemaglutinación indirecta (HAI)
Se sensibilizan glóbulos rojos con antígeno del parásito.
Basada en la propiedad que tienen las proteínas de adsorberse sobre la
superficie de los glóbulos rojos de carnero o ave modificada químicamente.
Si en el suero del paciente existen anticuerpos contra los antígenos del
parásito, los glóbulos rojos se aglutinan.
Se puede observar:
 Ensayo inmunoenzimático (ELISA)
Permite observar la presencia de anticuerpos antiinmunoglobulinas
ligados a una enzima que en presencia de su sustrato forma un
producto colorido.
Por la alta sensibilidad se recomienda como la primera prueba a
realizar en el proceso de confirmación diagnóstica.
 PASOS GENERALES
ELISA INDIRECTO
1. Tapizado del pocillo con el Ag o Ac
2. Adición de la muestra problema con la
mezcla de Ags o Acs
3. Unión del Ag o Ac especifico al Ag o Ac
tapizado en el pocillo
4. Lavado del pocillo para eliminar el exceso
de Ag o Ac no unido
5. Adición del Ac secundario marcado con la
enzima
6. Unión del Ac secundario al Ag o Ac
7. Lavado del pocillo para eliminar el exceso
de enzima no unida
8. Adición del sustrato
9. Unión del sustrato a la enzima
10. Coloración
 INMUNOFLUORESCENCIA
 TIPOS:
 Inmunofluorescencia directa ID
Usa un Ac marcado con el fluorocromo: Ac
Primario (Ac 1°), el Ac marcado se une al Ag de
membrana y se observa su fluorescencia al
microscopio de luz UV.
Se utiliza para la detección de antígenos en los
microorganismos o los tejidos utilizando el
anticuerpo primario marcado.
La muestra problema donde se quiere
determinar el microorganismo, bacteria o tejido
se extiende en un porta, se añade el Ac
marcado y tras lavado, se observa al
microscopio de fluorescencia (un solo paso).
 INMUNOFLUORESENCIA
INDIRECTA IFI

Usa un Ac primario sin marcar que

reacciona con el Ag de interés, luego un Ac
secundario (Ac 2°) marcado se une al Ac1°
y puede ser detectado por fluorescencia.
Se usa para la detección de anticuerpos en
suero
La detección tiene mayor sensibilidad (que
la directa) por presentar una mayor
amplificación de señal debida a la unión de
dos o mas Ac 2° por cada Ac 1°.
 INMUNOFLUORESCENCIA INDIRECTA
 La técnica de IFI , emplea
como Ag sobre la Epimastigotes
de t. cruzi obtenidos de cultivo y
fijados en laminas
 Que se realiza la reacción Ag-
Ac. La formación de este
complejo es evidenciada por una
antiglobulina humana
 Marcada con fluoresceína.
RESULTADO DE UNA IFI POSITIVA
MUCHAS GRACIAS