EJERCICOS

CALCULO DE LA Km y Vmax

1. Explicar la manera de resolver los cálculos de Km y Vmáx a través del siguiente

ejercicio. Datos para la enzima fosfatasa ácida. (DESARROLADO EN CLASE).

[S] mM Absorbancia
0,50 0,075
0,75 0,090
2,00 0,152
4,00 0,196
6,00 0,210
8,20 0,214
10,0 0,230

Teniendo en cuenta que el factor de conversión = 0.680 mM, 30 minutos de incubación

a. Calcular Km y Vmáx, según la ecuación Michaelis Menten:

b. Calcular Km y Vmáx, aplicando los dobles recíprocos, ecuación de
Lineaweaver-Burk.

2. Se obtuvieron los siguientes datos

[Sustrato], M V0 (μmol/min)
4,0.10-4 130
2,0.10-4 110
1,0.10-4 89
5,0.10-5 62
4,0.10-5 53
2,5.10-5 38
2,0.10-5 32

a. Calcular Km y Vmáx, según la ecuación Michaelis Menten:

b. Calcular Km y Vmáx, aplicando los dobles recíprocos, ecuación de Lineaweaver-
Burk.
3. En 10 mezclas de reacción conteniendo la misma concentración de enzima y
distintas concentraciones de sustrato (sustrato M), se determinaron las
velocidades iniciales:

[Sustrato], M V0 (μmol/min)
1,0.10-3 65
5,0.10-4 63
1,0.10-4 51
5,0.10-5 42
3,0.10-5 33
2,0.10-5 27
1,0.10-5 17
5,0.10-6 9.5
1,0.10-6 2.2
5,0.10-7 1.1

a. Calcular Km y Vmáx, según la ecuación Michaelis Menten:

b. Calcular Km y Vmáx, aplicando los dobles recíprocos, ecuación de Lineaweaver-
Burk.

4. Los siguientes datos se registraron para la reacción S P catalizada

enzimáticamente:

Concentración de Sustrato
v0 (nmoles/l x min)
(molar)
6,25 x 10-6 15,00
7,50 x 10-5 56,25
1,00 x 10-4 60,00
1,00 x 10-3 74,90
1,00 x 10-2 75,00

a. Calcular Km y Vmáx, según la ecuación Michaelis Menten:

b. Calcular Km y Vmáx, aplicando los dobles recíprocos, ecuación de Lineaweaver-
Burk.
c. Cuál sería v si (S) = 2,5.10-5 M; 5,0.10-5 M y 2,5.10-5 M
5. Se mide la velocidad inicial de la reacción enzimática para una serie de distintas
concentraciones iniciales de sustrato. Los datos obtenidos son:

Determínese gráficamente KM y vmáx. mediante el método de Lineweaver-Burk

6. Una enzima que cataliza la reacción X→Y se aisló de dos especies bacterianas
diferentes. Ambas enzimas tienen la misma Vmax pero diferentes valores de Km
para el sustrato. La enzima A tiene una Km de 2.0 μM, mientras que la enzima B
tiene una Km de 0.5 μM. El gráfico representa las cinéticas de reacción llevadas
a cabo con la misma concentración de cada enzima y con [X]= 1 μM. ¿Qué curva
representa a la enzima A y cuál a la enzima B?

7. El estudio de una reacción enzimática que sigue una cinética del tipo Michaelis-
Menten ha aportado los siguientes datos:

[S] (µM) V0 (nM/min)

1 25.
4 40
10 45.5
100 49.5
500 50
1000 50

a. Calcule el valor de Km y Vmax.

b. Si se aumenta la cantidad de enzima en la reacción, ¿variarán Km y Vmax.?
8. Para establecer los parámetros cinéticos de dos enzimas (E1 y E2, PM 65000 y
75000 Da, respectivamente) que catalizan la misma reacción en dos compartimentos
subcelulares distintos, se determinaron las velocidades iniciales de la reacción en
presencia de diferentes concentraciones de sustrato y de 1 µg/ml de enzima en cada
caso. Los ensayos se realizaron en tampón fosfato 0,2 M, pH 7,2 (pKs: 2,1; 7,2; 12,3).
Los resultados obtenidos fueron los siguientes:

¿Cuál será la Vmax y la KM de ambas enzimas y análisis su Km.