Cinética

enzimática
Serie Resuelta
 1.- Con base en la ecuación de Michaelis-Menten contesta las siguientes preguntas:
a) ¿A qué concentración de sustrato podrá una enzima operar a un cuarto de su velocidad
máxima (1/4 Vmax), si cuenta con una kcat de 30.0 s-1 y una KM de 0.0050 M?

V0= ¼ Vmax
V max [S ]
KM= 0.0050 M V  0 =
KM +[S]

V
  max = V max [S]   4 V max [S]
0.005  M+[S ]=
V max 0.005 M=
  4[S]−[S] 0.005 
  M=3[S]
4 0.005  M +[S ]

  0.005  M
[S]=    [ S]= 1.67  x   10−3 M
3
b) Determine la fracción de Vmax que se obtendría con las siguientes concentraciones de
sustrato [S]: 2 KM y 10 KM.

V  0 =
V max [S ] V max   [2 K M ]  V = 2 V max  [ K M ] 2
V  0 = V max
V  0 =
KM +[S] KM + [2 KM ]
0
3 KM 3

 V = V max  [10 K M ] V  = 10 V max  [ K M ] 10

V  0 = V max
0
KM + [10K M ]
0
11 KM 11
2.- Una enzima que cataliza la reacción X→Y se aisló de dos especies bacterianas
diferentes. Ambas enzimas tienen la misma Vmax pero diferentes valores de KM para el
sustrato. La enzima A tiene una KM de 2.0 μM, mientras que la enzima B tiene una KM
de 0.5 μM. El gráfico representa las cinéticas de reacción llevadas a cabo con la misma
concentración de cada enzima y con [X]= 1 μM. ¿Qué curva representa a la enzima A
y cuál a la enzima B?
A KM= 2.0 μM
B KM= 0.5 μM
B
A

La enzima A tiene una KM más grande que B , lo que quiere decir que requiere una [S]
mayor para llegar a la mitad de la Vmax y a la saturación.
 3.- Se midió la actividad de LDH de 25 mL de un extracto que tiene una concentración
de 4.5 mg/mL. Se utilizaron 10 μL de una dilución 2:350. El medio de ensayo incluyo
piruvato, amortiguador a pH 7.0 y NADH, para un volumen final con todo y enzima
de 800 µL. El coeficiente de absorbitividad molar del NADH es 6220 M -1cm-1. Usando
los siguientes datos calcula la actividad específica de la enzima en Unidades
internacionales.
  Curva temporal de actividad de LDH
A b s3 4 0 n m

m (min-1) 0.2177
1.2
1 f(x) = − 0.22 x + 1.2 Vol Rx (mL) 0.8000
0.8 R² = 1
Vol enzima (mL) 0.0100
0.6
0.4 Factor de Dilución 175.0000
0.2 Act vol (mmol/min/mL) 0.4900
0
0 1 2 3 4 5
Tiempo (min)

Act vol Prot Act total Act específica

Vol (mL) Proteína (mg)
(mmol/min/mL) (mg/mL) (mmol/min) (mmol/min/mg)
0.4900 25.0000 4.5000 112.5000 12.2500 0.1089
 4.- Completa la tabla de purificación.
Actividad Enriquecim
Actividad Proteína Veces
Paso Volumen (ml) específica iento
Total (U) total (mg) purificación
(U/mg) (%)
EC (1)
500 3,000 15,000 0.2 100 1
SA (2) 100 2,400 4,000 0.6 80 3
CII (3) 45 1,440 500 2.88 48 14.4
FG
Pasos:(4)
(1) Extracto Crudo; (2) fraccionamiento con sulfato de amonio; (3) Cromatografía de intercambio iónico; (4) Filtración en gel.
50 1,000 125 8 33 40

a) ¿Cuál fue el mejor paso de la purificación?

5.- De acuerdo a la siguiente tabla predice cuál es la enzima con la mayor afinidad por
su sustrato.
Enzima kcat/KM (s-1M-1)
Anhidrasa carbónica 8.3 × 107
Crotonasa 2.8 × 108
Triosa fosfato isomerasa 2.4 × 108
β-Lactamasa 1 × 108
6.- Se determinó la representación de dobles recíprocos para una reacción de un solo
sustrato catalizada por la enzima Succinato deshidrogenasa a tres diferentes
concentraciones de enzima. ¿Cuál de las siguientes familias de curvas se podría
esperar? Explícalo.

  gráfica dos, puesto que el parámetro cinético que depende de la [E] es la Vmax, ya que por
La
definición , mientras que la KM no depende de esto.

Por ello, a tres diferentes [E] de una misma enzima, se podrían esperar tres diferentes Vmax
pero la misma KM.
 7.- Las prostaglandinas son una clase de eicosanoides, derivados de ácidos grasos con
una gran variedad de acciones extremadamente potentes en los tejidos de vertebrados.
Son responsables de la producción de fiebre, inflamación y dolor. Las prostaglandinas
se derivan del ácido araquidónico a través de una reacción catalizada por la enzima
prostaglandina endoperóxido sintasa. Esta enzima, una cicloxigenasa, utiliza oxígeno
para convertir el ácido araquidónico en PGG 2, el precursor inmediato de muchas
prostaglandinas.

Prostaglandina Endoperóxido Sintasa 1  KM 1 1

= ( )
 +  
1 /V 0 (m in /m M )

V 0 V max   [S] V max

Sin I
0.0 Linear (Sin I)

0.0
f(x) = 0.02 x + 0.02
R² = 1
0.0
Sin I Con I
m (min) 0.0116 0.0203
f(x) = 0.01 x + 0.02 0.0
R² = 1
b (min/mM) 0.0194 0.0194
0.0
a (mM-1) 1.6693 0.9552
0.0 Vmax (mM/min) 51.6245 51.6325
0.0 KM (mM) 0.5991 1.0469
1/[S] (mM-1)
0
-2 -1. -1 -0. 0 0.5 1 1.5 2 2.5
8.- Se midió la cinética de una enzima como función de la concentración de sustrato en
presencia y ausencia del inhibidor (I), a una concentración de 2 mM.
a) ¿Cuáles son los valores de Vmax y KM en ausencia del inhibidor? ¿Y en su presencia?
b) ¿De qué tipo de inhibición se trata?

1  KM 1 1
1/V0 (min/μM)

0.3
Sin I
Linear (Sin I)
= ( )  +  
V 0 V max   [S] V max
f(x) = 0.67 x + 0.02
R² = 1
0.2

0.1 Sin I Con I

f(x) = 0.22 x + 0.02
R² = 1 m (min) 0.2240 0.6663
b (min/μM) 0.0224 0.0222
0 1/[S] (mM-1)
0 0.1 0.2 0.3 0.4 a (μM-1) 0.1000 0.0333
Vmax (μM/min) 44.6322 45.1060
KM (μM) 9.9971 30.0560