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Enzimas – Seminario 1
Temario: Bases de la catálisis enzimática. Estado de transición. Unión sustrato-sitio activo
(grupos de unión al sustrato, grupos catalíticos). Tipos de mecanismos de reacción. Catálisis
ácido-base. Efecto del pH. Cinética de las reacciones catalizadas por enzimas. Velocidad
inicial. Métodos de medidas experimentales. Dependencia de la velocidad de reacción con la
concentración de enzima y de sustrato. Número de recambio. Ecuación de Michaelis--
Menten. Supuestos fundamentales. Significado físico de los distintos parámetros. Unidades
de actividad enzimática. Determinación de parámetros de reacciones enzimáticas
monosustrato. Representaciones gráficas alternativas (transformaciones de la ecuación de
MichaelisMenten).
Bibliografía:
Bioquímica. Lehninger
Bioquímica. Stryer.
Bioquímica. Zubay
Cálculos en Bioquímica. Segel
Enzimas. Dixon
Quantitative problems in Biochemistry. Dawes.
PREGUNTAS
Problema 2. Relación entre la concentración de sustrato (S), Km, velocidad inicial y Vmáx:
a) Calcule los valores de (S) en relación a Km para los cuales se obtienen velocidades
iniciales de reacción de 5%, 10%, 25%, 50%, 90% y 99% de la Vmax, y grafique los resultados
(reordene apropiadamente la ecuación de Michaelis-Menten). ¿Qué rango de (S) es el más
útil para determinar el valor de Km?
b) ¿Qué relación existe entre los valores calculados en a) y la proporción de moléculas de
enzima que se encuentran en la forma de un complejo con el sustrato (ES)? ¿Esta relación es
válida en el instante en que se mezcla la enzima con el sustrato o en el estado estacionario?
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Problema 3. El Km de cierta enzima es 1,0x10 M. La reacción sigue la cinética de Michaelis-
Menten. Para una determinada concentración de enzima la velocidad inicial de reacción es
37 µmoles/min a concentración de sustrato 0,1 M. Sin embargo, a una concentración de
sustrato 0,01 M, la velocidad inicial de reacción permanece en 37 µmoles/min.
Problema 4. La penicilina es hidrolizada y con ello inactivada por la penicilinasa, una enzima
presente en algunas bacterias resistentes a la penicilina. El peso de esta enzima en
Staphylococcus aureus es de 29,6 kDa. La cantidad de penicilina hidrolizada en un minuto en
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una disolución de 10 ml que contiene 10 g de penicilasa purificada se midió como función
de la concentración de penicilina.
Concentración Moles
Penicilina hidrolizados/min
0,1 x 10-5M 0,11 x 10-9M
0,3 x 10-5M 0,25 x 10-9M
0,5 x 10-5M 0,34 x 10-9M
1 x 10-5M 0,45 x 10-9M
3 x 10-5M 0,58 x 10-9M
5 x 10-5M 0,61 x 10-9M
Problema 9. A partir de los siguientes datos, diga cuál es el mejor de los substratos para esta
enzima. Explique.
Sustrato Km (mM) kcat (s-1)
A 0,01 2x10-2
B 0,1 4x10-4
C 1 2x102
D 10 7x10-1
E 100 5x104
F 1000 2x103
a- Calcule, con estos datos, Vmáx y Km a partir de un gráfico 1/V en función de 1/(S).
b- Calcule las unidades de invertasa contenidas en los 0,4 ml de extracto enzimático, de
acuerdo a una unidad de actividad enzimática que Ud. debe definir previamente.
c- ¿Puede calcular la actividad específica de la invertasa en el extracto enzimático? Explique.
a- Determinar Vmáx y Km
b- ¿Cuál sería v si (S) = 2,5.10-5 M; 5,0.10-5 M y 2,5.10-5 M y la concentración de enzima es el
doble de la original?
c- ¿Cuál es la concentración de enzima libre cuando (S) es 1,00.10-2 M ?.
d- ¿Cuál es la concentración de enzima libre cuando (S) es 6,25.10-6 M ?.
e- La V dada en la tabla anterior se determinó midiendo la concentración de producto
acumulado en un período de 10 min. ¿Es válida la suposición de que estos valores de v
representan las velocidades iniciales en todo el rango de (S)?.
f- Defina una unidad enzimática para este sistema y calcule la actividad en la mezcla de
incubación.