TALLER CINETICA ENZIMATICA

BIOQUIMICA

1. La Km de una hexocinasa para la glucosa es 10-4 M. Si la concentración de

glucosa en el medio de reacción es 1.8 µg/ml, cual sera la velocidad de
transformación de la glucose expresada en function de la velocidad maxima. El
peso molecular de la glucose es 180.

2. Calcular la velocidad que se obtendrá en una reacción enzimática si la velocidad

máxima es igual al 100% y la concentración de sustrato es a) 10 Km y b) Km/3

3. Una enzima cuyo Km es 2,4x10-4 se ensaya con una concentración de sustrato

de 2x10-7 M. Si la velocidad media para esta reacción con una concentración
de sustrato de 5x10-2 M fue de 0.128 mmol/min, calcular la velocidad inicial en
el caso anterior.

4. Una aldolasa de músculo de rata se ensayó a diversas concentraciones de sustrato,

en presencia y ausencia de iodoacetamida, obteniéndose los siguientes resultados:

[Fru 1,6 BP] v0(moles/ml min)

(M) -I +I
5 0,063 0,0156
10 0,102 0,0267
20 0,160 0,0410
50 0,244 0,0620
100 0,286 0,0710

Sabiendo que la concentración de enzima en el ensayo fué de 10 nM y la del

inhibidor fué de 7,5 nM:
a) Determinar la KM y la Vmax de la enzima.
b) Discutir el posible tipo de inhibición que ejerce la iodoacetamida en esta
reacción. Determinar los valores de Km y Vmáx para el inhibidor, asi como el
valor de Ki

5. La actividad de una enzima se ensayó a distintas concentraciones de sustrato y de

un compuesto X, que inhibía la reacción, a una concentración de 50 mM. Los
resultados obtenidos fueron:

[S] M v0 (µmoles/ml min)

-X +X
12,5 13,3 3,45
16,7 17,2 4,55
25,0 22,2 6,45
50,0 33,3 11,76
100,0 40,0 20,00

a) Calcular la KM y la Vmáx de la reacción.

b) Determinar el tipo de inhibición que ejerce X.
c) Determinar la Ki y el grado de inhibición para una [S] = KM.

6. Una reacción enzimática se lleva a cabo, a distintas [S], en ausencia y presencia de

dos inhibidores diferentes. Decir qué tipo de inhibidor es cada uno y hallar todos los
parámetros cinéticos.
 [S] v0 va'(+ Ia = 1,5 mM) vb'(+ Ib = 1,5 mM)
(mM) (µmol/l min) (µmol/l min) (µmol/l min)
0,2 1,67 0,625 0,83
0,4 2,86 1,176 1,43
0,8 4,44 2,110 2,22
1,6 6,15 3,48 3,08
3,2 7,62 5,16 3,81

7. Calcule la constante de velocidad de una reacción se se efectúa de acuerdo a la

cinética de primer orden cuyo tiempo de vida media es de 0,45 segundos. Determinar
el tiempo que debe transcurrir para que se consuma el 80 % del reactivo.

8.- En un cultivo de bacterias, la velocidad de reacción de un enzima E fue de

20 μg/min para una concentración de sustrato de 3 mM. Si la concentración de
sustrato es igual o superior a 7 mM, la velocidad no supera los 40 μg/min. Al
añadir un inhibidor competitivo, la velocidad de la reacción fue de 20 μg/min
para una concentración de sustrato de 8 mM. Calculese la Km, la Vmax y la Ki
para este enzima, sabiendo que la concentración de inhibidor añadido es de 6
mM.

9. Un microorganismo marino contiene una enzima que hidroliza la glucosa-6-sulfato.

El ensayo de detección se basa en la velocidad de formación de glucosa. La enzima
en un extracto libre de células tiene un Km de 6,7x10-4 M y una velocidad máxima de
300 nMmin-1 .La galactosa-6-sulfato es un inhibidor competitivo. A una concentración
de glucosa-6-sulfato de 2x10-5M y galactosa-6-sulfato 10-5M, la velocidad inicial es 1,5
nMmin-1. Calcular el ki para la galactosa-6-sulfato.

10. Habiéndose conseguido aislar de Salmonella tyfpimurium una enzima que cataliza
la reacción A→P, se decidió hacer un estudio estructural y cinético de dicha enzima:

[A] mM 1,00 0,55 0,25 0,20

V(mmol P/ min) 1,00 0,71 0,50 0,41
V (nmol P/min) con J 0,66 0,41 0,25 0,20
donde J es un inhibidor de E cuya influencia como tal se quiere estudiar. [J] = 0,25mM
a) Calcular Km de la enzima estudiada para A, y Vmax para la transformación A--P en
presencia de E
b) Que tipo de inhibidor es J?. Calcula la Ki.

11. Calcular el Km y la velocidad máxima a partir de una representación de dobles

recíprocos, sabiendo que la recta corta al eje de de la ordenada en 5x103mol/min y la
pendiente de dicha recta es 120 min/l.

12, Calcular Ki para un inhibidor no competitivo si [I] es 2x10-4M da un 75% de

inhibición para una reacción catalizada enzimáticamente.