I.

INTRODUCCIÓN

Las determinaciones moleculares se están imponiendo como técnicas

complementarias en el diagnóstico y la investigación en patología. Para la
identificación de los cambios en la expresión del mRNA se requiere el
establecimiento de controles internos de calidad de la reacción,
normalización de las muestras, así como de un adecuado método de
cuantificación. Actualmente existen diferentes técnicas de las cuales la más
utilizada es el desarrollo de muestras de ácidos nucleicos en gel de agarosa
marcados con bromuro de etidio.
El ARN es un material susceptible a la degradación debido a la acción de las
ribonucleasas (ARNsas). Por esta razón, requiere de una adecuada toma de
muestra, condiciones de frío durante la manipulación, conservación y trabajo
de meseta con el objetivo de inhibir la degradación enzimática.  En general,
se obtiene muy poca cantidad de este material por lo que cuantificarlo
implica perder una parte apreciable.
Los espectrofotómetros convencionales utilizan volúmenes grandes de
muestra. Generalmente, de 200 µL a 1 mL y aunque es posible realizar una
dilución, se compromete la concentración que en ocasiones puede llegar a no
ser detectable.
Actualmente existen espectrofotómetros que cuantifican directamente
pequeños volúmenes de muestra, que pueden llegar a ser hasta de 1 µL. El
espectrofotómetro de volumen múltiple procesa los datos con el software
Gen5TM y está diseñado para cuantificar de manera rápida y eficiente ácidos
nucleicos, proteínas, etc. La longitud de onda barre el espectro de 200 a 999
nm. Entre las opciones de lectura pueden leerse directamente placas de Elisa
o usar una plataforma denominada Take3, que ofrece tres opciones: dos
posiciones para cubetas convencionales de tamaños diferentes y una
plataforma con dos hileras de ocho círculos donde se aplican 2 mL de
muestra. Esta opción permitirá realizar la cuantificación de las muestras de
ARN que en conjunto con la electroforesis garantizarán la correcta
evaluación de cantidad y calidad del ARN con vistas a realizar un proceso de
transcripción inversa. (Rodríguez, 2009)
II. MATERIALES Y METODOS

- Muestra de gasterópodos (Material biológico)

- Microplacas
- Espectrofotómetro EPOCH
- Software del espectrofotómetro
- Agitador de tubos de ensayo
- Centrifuga
- Micropipeta

Tras realizar la extracción del material genético, se realiza la agitación y

centrifugación previa, posterior a esto se agregan 2 microlitros de la muestra
en los pocillos del espectrofotómetro, siendo uno de muestra en blanco, y las
otras muestras con replicación. Se coloca la placa con las muestras en el
equipo EPOCH, y con ayuda del software se procede a leer la muestra.

La espectrofotometría UV/Visible nos permite confirmar que contamos con

cantidad suficiente de ácidos nucleicos (DNA/RNA) de calidad adecuada
antes de llevar a cabo ensayos de PCR cuantitativa en tiempo real
(QRTPCR), análisis de SNPS (Polimorfismos de nucleótido único) o la
secuenciación automática de muestras de DNA de plásmidos, cósmidos,
productos de PCR.
La principal ventaja de trabajar con el espectrofotómetro NanoDrop ND1000
es que la medida se lleva a cabo a partir de
1 ó 1,5 µl de muestra sin ayuda de ningún tipo de cubeta ya que la muestra s
e pipetea directamente sobre la superficie de medida. El rango de medida par
a muestras de DNA es de 2-3700 ng/µl y para RNA de 2-3000 ng/µl. 

Kit Rango
dsDNA HS assay 20 pg/µl – 100 ng/µl
dsDNA BR assay 100 pg/µl – 1000 ng/µl
dsRNA HS assay 250 pg/µl – 100 ng/µl
dsRNA BR assay 1 ng/µl – 1000 ng/µl
 Traer 3 µl de RNA o DNA (10 -2000 ng/µl) en tubos de 1.5 ml.
Cuando las muestras estén cuantificadas se enviará al solicitante una hoja
con información relativa a la concentración, ratios 260/280, 260/230.

III. RESULTADOS

Según el video observado sobre la cuantificación de ADN, se obtuvo la

siguiente tabla con resultados con valores entre 260 y 280 nm, con los cuales
se puede determinar la pureza del ADN

1 2
-0.002 260
0.001 280
A
-3 260/280
  -1.5 ng/µL
0.667 0-644 260
0.36 0.343 280
B
1.883 1.906 260/280
677.1 654 ng/µL
0.451 0.429 260
0.239 0.225 280
C
1.888 1.901 260/280
451.1 428.5 ng/µL
0.251 0.235 260
0.135 0.128 280
D
1.86 1.834 260/280
251.1 234.7 ng/µL

Siendo la muestra A1, la muestra en blanco, por lo cual no se tienen

resultados de pureza de ácidos nucleicos ya que no lo contiene.

IV. DISCUSIONES
V. CONCLUSIONES
VI. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

 Rodríguez, A. S. (2009). Capítulo 11: Extracción de ácidos

nucleicos. access medicina Biología molecular. Fundamentos y
aplicaciones en las ciencias de la salud.