UNIVERSIDAD MICHOACANA SAN NICOLÁS DE HIDALGO

FACULTAD DE QUÍMICO FARMACOBIOLOGÍA

LABORATORIO DE ANALISIS INSTRUMENTAL

PROFA. Laboratorio: QFB. RAQUEL SANTILLAN GALVÁN

NO. DE EQUIPO: 06

Practica No. 5: ESPECTROFOTOMETRÍA II

Nombre de los integrantes:

BARRAGAN BARRAGAN RICARDO
CAMPOS JACINTO ANABELLA
CÁRDENAS ORTEGA HUITZILIHUT
LAGUNA GARCIA ROBERTO
RAMIREZ CARDENAS EMILIO
MARTINEZ MARTINEZ GUADALUPE

QUINTO SEMESTRE

SECCIÓN 01

FECHA: 13/11/2023
OBJETIVO :
Determinar la concentración de Cu +2 en una muestra problema .

FUNDAMENTO :
La espectrofotometría es el método de análisis óptico más usado en las
investigaciones biológicas. El espectrofotómetro es un instrumento que permite
comparar la radiación absorbida o transmitida por una solución que contiene una
cantidad desconocida de soluto, y una que contiene una cantidad conocida de la
misma sustancia.El análisis espectral se encarga de detectar la absorción o emisión
de radiación electromagnética a ciertas longitudes de onda. Y tiene en cuenta los
niveles de energía implicados en una transición cuántica .
La espectroscopia estudia concretamente 6 fenómenos ópticos:
● Absorbancia : Proceso por el cual una especie, en un medio transparente,
capta selectivamente ciertas frecuencias de la radiación electromagnética.
● Transmitancia : Es un concepto más relacionado con la muestra puesto que
nos indica la cantidad de luz absorbida por la misma.
Existen diferentes técnicas espectroscópicas para medir la transmitancia y
absorbancia que utilizan espectrofotómetros. Estas son algunas de las principales:
● UV-VIS : Esta técnica estudia la interacción de la luz con moléculas que
absorben dicha radiación. En general, la absorción de la radiación UV o
Visible aparece por parte de la excitación de los electrones de enlace.
● Infrarroja : En la región infrarroja (IR) del espectro, la radiación de menor
energía también puede producir cambios dentro de átomos y moléculas. Este
tipo de radiación no suele ser lo suficientemente energética para excitar
electrones.
● Rama : Al igual que la espectroscopia infrarroja, Raman también proporciona
información estructural de la muestra. En este caso, cuando se irradia la
muestra con una fuente de luz potente, es decir, un láser, una pequeña parte
de dicha radiación es dispersada por ciertas moléculas a longitudes de onda
diferentes a las de la radiación incidente.
Esta técnica de espectrofotometría aplica una Ley muy importante la de :
Ley de Lambert-Beer : Esta ley expresa la relación entre absorbancia de luz
monocromática (de longitud de onda fija) y concentración de un cromóforo en
solución:
A = log I/Io = ε·c·l
La absorbancia de una solución es directamente proporcional a su concentración –a
mayor número de moléculas mayor interacción de la luz con ellas-; también
depende de la distancia que recorre la luz por la solución –a igual concentración,
cuanto mayor distancia recorre la luz por la muestra más moléculas se encontrará-;
y por último, depende de ε, una constante de proporcionalidad -denominada
coeficiente de extinción- que es específica de cada cromóforo
En general, los espectrómetros miden en % de transmitancia (T) y absorbancia (A).
El porciento de transmitancia se refiere a la cantidad de radiación que pasa a través
de la muestra y alcanza el detector. muestra y alcanza el detector.

METODOLOGÍA:
a) Materiales:
●Tubos de ensaye
●Celdas
●Espectrofotómetro UV/VIS

b) Reactivos:
●Sulfato de cobre ( CuSO4)
●Agua destilada

c) Equipo:
● Bata de manga larga
● Protectores faciales
● Guantes de nitrilo o látex
● Calzado cerrado

d) Procedimiento:
A partir de una solución patrón de CuSO4 que contiene 1mg/ml de Cu+2, preparar
diluciones con concentraciones de 0.8, 0.6, 0.4 y 0.2 mg/ml

⬇
Se coloca cada solucion en celdas y uno
con agua destilada para calibrar

⬇
Se busca en el menu el espectro que es con lo que se va a trabajar
 ⬇
Se calibra con la tecla de linea base

⬇
Leer la Absorbancia de cada estándar, de una longitud en nm de acuerdo a la
siguiente forma: 0.2 de concentracion, 0.4, 0.6 y 0.8.

⬇
Graficar Conc. vs Absorbancia
⬇
Ajustar por el m.m.c.
⬇
Señalar la concentración de Cu en ambas
 ⬇
Comparar para saber cual de los dos resultados en mejor

CÁLCULOS Y RESULTADOS

Concentración Longitud Absorbancia

0,2 783 nm 0,073
0,4 575 nm 0,080
0,6 611 nm 0,146
0,8 649 nm 0,091

Concentración Longitud Transmitancia

0,2 785.0 nm 119.9 %
0,4 790.0 nm 107.9 %
0,6 790 nm 100.9 %
0,8 789 nm 93.1 %
 n y Absorbancia x concentración xy y^2 x^2 y corregida
1 0,073 0,2 0,0146 0,005329 0,04 0,0595
2 0,080 0,4 0,032 0,0064 0,16 0,1015
3 0,146 0,6 0,0876 0,021316 0,36 0,1435
4 0,091 0,8 0,0728 0,008281 0,64 0,1855
SUMA 0,390 2 0,207 0,041326 1,2 0,4900

n y Transmitancia x concentración xy y2 x2 y corregida

1 119,9 0,2 23,98 14376,01 0,04 118,56
2 107,9 0,4 43,16 11642,41 0,16 109,82
3 100,9 0,6 60,54 10180,81 0,36 101,08
4 93,1 0,8 74,48 8667,61 0,64 92,34
SUMA 421,8 2 202,16 44866,84 1,2 421,8
Datos:
Tubo 1: 1 mg/ml
Tubo 2: 0.8 mg/ml
Tubo 3: 0.6 mg/ml
Tubo 4: 0.4 mg/ml
Tubo 5: 0.2 mg/ml

Volumen final: 10 ml

Fórmula para sacar los volúmenes:

C1V1=C2V2

Despeje de la fórmula:
V1=C2V2/C1

1. V1=(0.8 mg/ml)(10 ml)/1.0 mg/ml)= 8 ml

2. V1=(0.6 mg/ml)(10 ml)/0.8 mg/ml= 7.5 ml

3. V1=(0.4 mg/ml)(10 ml)/0.6 mg/ml= 6.66 ml

4. V1=(0.2 mg/ml)(10 ml)/0.4 mg/ml= 5 ml

OBSERVACIONES:
Para realizar esta práctica determinamos la concentración de sulfato de cobre en
una muestra problema que se diluyó con diferentes concentraciones que fueron de
0.8,0.6,0.4,y 0.2 mgr/ml.
Para calibrar tuvimos que introducir una celda con agua destilada que se introdujo
dentro del aparato alineando la clara clara.

Una vez teniendo nuestro aparato calibrado, se introduce la muestra de sulfato de

cobre el cual tiene una concentración de 0.2 mgr/ml.

Teniendo la muestra dentro se obtuvieron la absorbancia y transmitancia máxima en

las hojas dadas por el aparato.

CONCLUSIÓN:
Se logró el objetivo de determinar la concentración de Cu+2 en distintas
disoluciones con concentraciones de 0.8, 0.6, 0.4 y 0.2 mg/ml, esto por medio del
uso del aparato utilizado en esta técnica de espectrofotometría uv el cual fue el
espectrofotómetro, obteniendo así de este, la absorbancia máxima de cada
concentración, además de su longitud de onda máxima. Con esto queda entendido
la utilidad y función de esta técnica, ya sea en el campo de la investigación
científica o en el sector farmacéutico pueden ser de gran ayuda para estos campos
como lo es para realizar pruebas en las fases de investigación y control de calidad
del desarrollo de fármacos.

BIBLIOGRAFÍAS:
● Mettler-Toledo International Inc. all rights reserved. (2023, 1 noviembre).
Espectrofotómetros UV/VIS Compacto.
https://www.mt.com/mx/es/home/products/Laboratory_Analytics_Browse/uv-vis-spect
rometers.html
● Colaboradores de Wikipedia. (2023a, marzo 5). Espectroscopia ultravioleta-visible.
Wikipedia, la enciclopedia libre.
https://es.wikipedia.org/wiki/Espectroscopia_ultravioleta-visible
● CONTROL DE CALIDAD DE INSUMOS y DIETAS ACUICOLAS. (s. f.).
https://www.fao.org/3/ab482s/AB482S03.htm
● Eyco, L. (2023, 30 marzo). ¿Para qué se utiliza la espectrofotometría UV-VIS y cómo
funcionan los equipos de medición? Laboratorios EYCO.
https://www.laboratorioseyco.com/para-que-se-utiliza-la-espectrofotometria-uv-vis-y-
como-funcionan-los-equipos-de-medicion/
● Mettler-Toledo International Inc. all rights reserved. (2023, 1 noviembre).
Espectrofotómetros UV/VIS.
● Ultraviolet Spectroscopy (UV)|PerkinElmer. (s. f.).
https://www.perkinelmer.com/es/category/ultraviolet-spectroscopy-uv?utm_source=G
oogle&utm_medium=cpc&utm_campaign=APP-TECUVS-2023-AMER-PaidSearch-S
CH-EGM-ZZ&sfdc_id=7014V000002IwCE&LS=PPC&adgroup=145898955312&ad=6
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