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OPERÓN

Unidad genética
funcional formada por un
grupo de genes Figura 5. Componentes en un operón
estructurales capaces de
ejercer una regulación de
su propia expresión.

Los elementos genéticos del modelo del operón son un


gen regulador, que codifica una proteína represora que
se une al centro operador, una secuencia de DNA
reguladora denominada centro operador y un conjunto
de genes estructurales. (Mark Berg, Stryer, Tymoczko,
Regulación de la expresión genética en los procariotes. Mecanismos de control sobre la síntesis enzimática.
Formando un paradigma. Concepto del operón.
La idea: ... Debemos recordar que antes de la guerra se sabía poco acerca de los genes bacterianos.
..Dos líneas de trabajo, de los años 46 y 47, el análisis de mutaciones bacterianas por Luria y Delbruck, y la combinación de mutantes por
Lederberg and Tatum. Ellos llamaron al proceso adaptación y no inducción. Sí una bacteria se toma de un medio con glucosa y se transfiere a
un medio con galactosido , después de un tiempo “hacen” la enzima y se “adaptan” para comer lactosa. Así, adaptación es una muy mala
palabra, porque dice diferentes cosas, dejaron de llamarle adaptación y le llamaron inducción enzimática. Aparecieron los genes en la
escena….

Teoría: 1961 de los mecanismos de regulación genética, mecanismos moleculares de como ciertos genes son activados
y suprimidos.

François Jacob Jacques Monod

Jacob, F.; Perrin, D.; Sánchez, C.; Monod, J. (Feb 1960). "L'opéron : groupe de gènes à expression coordonnée par un opérateur" [Operon: a group of genes with the
expression coordinated by an operator]. Comptes rendus hebdomadaires des seances de l'Academie des sciences 250 (6): 1727–1729.
Jacob, F.; Monod, J. (1959). "Genes of structure and genes of regulation in the biosynthesis of proteins". Comptes rendus hebdomadaires des seances de l'Academie des
sciences. 249: 1282–1284.
Pardee, A.; Jacob, F.; Monod, J. (1958). "The role of the inducible alleles and the constitutive alleles in the synthesis of beta-galactosidase in zygotes of Escherichia coli".
Comptes rendus hebdomadaires des seances de l'Academie des sciences. 246 (21): 3125–3128.
Genetics and Genomics Timeline https://www.dnalc.org/view/15693-Fran-ois-Jacob-and-Jacques-Monod.html
Mutantes reguladoras del metabolismo de la lactosa
El enfoque experimental: Obtención de cepas diploides parciales o merocigoto, con dos dosis de genes, habitualmente las bacterias son
haploides, mediante conjugación F´x F-, obtener bacterias diploides parciales o merocigotos, son inestables.
Las primeras mutantes aislados por Lederberg y cols y afectaban a los genes estructurales (z, y, a).
Se dedujo que estos genes estaban juntos y en el orden z-y-a. Los mutantes en estos genes se denominan z-, y- e a- y ,dan lugar a alteraciones
en la estructura de las enzimas codificadas por estos genes.

… bueno, Monod comenzó a obtener mutantes incapaces de metabolizar (comer y usar) lactosa y demostró que no sintetizaban
galactosidasa.
…Dedujo que debería ser un gen, el cual controla la síntesis de galactosidasa. También encontró que habría otro gen adyacente
diferente al primero el cuál tendría que ver con el transporte de la lactosa a la célula y la llamó permeasa. Entonces se dedujo que la
bacteria es incapaz de metabolizar lactosa porque no sintetiza la enzima que hidroliza a la lactosa pero también porque fueraincapaz
de transportarla.
…. el grupo de Monod encontró que hay mutantes capaces de sintetizar galactosidasa sin el galactosido. A las normales les llamamos
inducible y a las otras constitutivas.

https://www.dnalc.org/view/15693-Fran-ois-Jacob-and-Jacques-Monod.html
Experimentos F´X F- diploides parciales, experimentos de complementación: Locus I región controla la inducibilidad de las
enzimas lac

β-GALACTOSIDASA (Z) PERMEASA (Y)


Cepa Genotipo No inducido Inducido No inducido Inducido Conclusiones
1 I+ Z+ Y+ − + − + I+ es inducible
2 I− Z+ Y+ + + + + I− es constitutiva
3 I+ Z− Y+/F′ I− Z+ Y+ − + − + I+ es dominante a I−
4 I− Z− Y+/F′ I+ Z+ Y− − + − + I+ actúa en trans

Mutante i -: un represor inactivo, es recesivo con respecto al i+ en los diploides parciales(i+/i-).

Mutante iQ : mutación en el promotor del gen I, no aparece proteína represora. mutante de tipo constitutivo
de galactosidasa.

Mutante iS : mutación en la secuencia central de la proteína, dominio de unión al inductor (al IPTG), reconoce
al operador permanentemente pero. La mutante está siempre reprimida y no se expresan los genes del
operón. Es dominante sobre i+ en los diploides parciales (i+/iS). En los diploides parciales Is reconoce y une a
las dos regiones operadoras bloqueando la transcripción de los genes estructurales. actúa en trans¡

http://www.mikeblaber.org/oldwine/bch5425/lect16/lect16.htm
Efecto de las mutaciones en la región promotor/operador

Mutantes del Promotor (OO): presentan una alteración en la secuencia de bases


nitrogenadas de la región promotora, la ARN-polimerasa no reconoce la secuencia
promotora y no ocurre la transcripción de los genes estructurales. A estos mutantes
se les ha denominado "Operador cero" (OO), pero es necesario recordar que
afectan a la región del promotor.

Mutantes constitutivas en el operador (OC): en la secuencia de bases nitrogenadas


de la región del Operador, capaz de originar que la proteína reguladora no sea capaz
de reconocer y unirse al operador, la región promotora es reconocida por la ARN
polimerasa y ocurre la transcripción de los genes estructurales en ausencia de
inductor.

El estudio de diferentes mutantes del operador ha permitido determinar que el


operador es una región de 17 a 25 nucleótidos situada justo antes del gen z y
Fig.1. Esquema del sitio operador lac. (A) Diagrama del complejo
represor lac-DNA, tetramero (From Wilson et al., 2007) (B) la primera después del promotor. Esta región muestra una enorme especificidad por la
región operdora identificada 27 pb (LacO1). Negritas,17 pb sitio de proteína represora.
unión de LacI

Fig.3. (A) Secuencia de los promotores inducibles lac. Rectangulos amarillos cajas -35 y -10, rojo elinicio de la transcripción en azul los sitios operadores. (B) Secuencias de los tres operadores
, Bases en mayusculas son las secuencias idénticas a las del LacO1.

http://2013.igem.org/Team:UCSF/Project/Conjugation/Promoter
La obtención de mutantes que afectaban tanto a los genes estructurales, a los elementos de control (promotor y operador)
y al gen regulador, permitieron dilucidar el funcionamiento del operón lactosa.

Expresión de los genes estructurales del operón lactosa


Bacteria normal
Ausencia de inductor (Sin lactosa) Presencia de inductor (Con lactosa)
Genotipo z+ y+ a+ z+ y+ a+
i+ p o z+y+a+ NO NO NO SI SI SI

Expresión de los genes estructurales del operón lactosa


Mutantes constitutivos
Ausencia de inductor (Sin lactosa) Presencia de inductor (Con lactosa)
Genotipo z+ y+ a+ z+ y+ a+
i- P OC z+y+a+ SI SI SI SI SI SI
i+P OC z+y+a+ SI SI SI SI SI SI

Ejercicio para hacer un simulacro: hacer un esquema que explique el fenotipo de cada cepa mutante constitutiva