ESTERIFICACIÓN CATALIZADA POR LIPASA: UNA ACTIVIDAD DE

LABORATORIO BASADA EN LA INVESTIGACIÓN PARA PROMOVER LA

COMPRENSIÓN DE LOS ESTUDIANTES DE SECUNDARIA Y LAS
PERCEPCIONES POSITIVAS DE LA QUÍMICA VERDE.

RESUMEN.
Se diseñó una unidad de aprendizaje de laboratorio basada en la investigación para
mejorar la comprensión de los estudiantes de secundaria sobre la aplicación de la lipasa
como catalizador para sintetizar derivados de éster de isoamilo y geranilo, así como para
promover su comprensión y percepciones positivas de la química verde. La unidad de
aprendizaje constó de tres laboratorios y una presentación final. La primera actividad de
laboratorio permitió a los estudiantes aprender a ajustar las técnicas de titulación a
macroescala a las técnicas de titulación a microescala para que el método pudiera
utilizarse para la determinación cuantitativa de productos éster en las siguientes dos
actividades de laboratorio. La segunda actividad de laboratorio introdujo a los
estudiantes a una forma más ecológica de sintetizar compuestos éster al reemplazar un
catalizador de ácido fuerte dañino por un catalizador más amigable con el medio
ambiente, una enzima lipasa. La tercera actividad de laboratorio desafió a los
estudiantes a diseñar sus propios experimentos para sintetizar otros ésteres utilizando
reacciones de esterificación catalizadas por lipasa. Al final de la unidad de aprendizaje,
los estudiantes de cada grupo presentaron los resultados y las conclusiones de la tercera
actividad de laboratorio a toda la clase y explicaron cómo se aplicaron los 12 principios
de la química verde en el laboratorio. Los resultados del Examen Conceptual de la
Unidad de Aprendizaje y el Cuestionario de Percepciones de la Unidad de Aprendizaje
indican que las unidades de aprendizaje pueden promover la comprensión conceptual de
los estudiantes. También tienen percepciones positivas hacia la química verde y las
unidades de aprendizaje.

ESTERIFICACIÓN CATALIZADA POR LIPASA.

La esterificación es una reacción para producir compuestos éster a partir de alcoholes y
ácidos carboxílicos. Los estudiantes deben aprender este concepto en química orgánica
básica. La reacción es ampliamente utilizada para la síntesis de compuestos aromáticos,
grasas y aceites. Tradicionalmente, los ésteres generalmente se producen utilizando una
reacción catalizada por ácido llamada "esterificación de Fischer", que generalmente
produce residuos de ácidos fuertes, y la reacción también requiere altas temperaturas
(aproximadamente 80 ° C). Para superar estas desventajas, varias enzimas, como la
lipasa y la esterasa, se han investigado y utilizado para catalizar la esterificación. Entre
ellas, la lipasa es una de las enzimas más utilizadas para sintetizar compuestos de éster
valiosos en muchas industrias como alimentos, cosméticos, fragancias, sabores y
productos farmacéuticos. Usar la lipasa como catalizador tiene varias ventajas. Por
ejemplo, la reacción se puede realizar en condiciones suaves (a pH neutro y bajas
temperaturas) y en un sistema libre de solventes; además, la enzima puede reutilizarse y
la reacción no produce residuos peligrosos. Por lo tanto, el uso de la esterificación
catalizada por lipasa es más eficiente y más verde que la síntesis química convencional.

En este estudio, la síntesis de ésteres de isoamilo y ésteres de geranilo a partir de la

esterificación de alcohol isoamílico o geraniol con diversos ácidos carboxílicos (Ver
Tabla 1) se desarrolló y utilizó como modelo de aprendizaje para los estudiantes. Los
ésteres de isoamilo, como el acetato de isoamilo y el butanoato de isoamilo, son
compuestos valiosos ampliamente utilizados en las industrias de sabores y alimentos.
Los ésteres de geranilo son compuestos de la familia de los ésteres de alcohol
terpenoides y se pueden encontrar en la naturaleza; Se utilizan como ingredientes de
sabor o fragancia en las industrias alimentaria, cosmética y farmacéutica. Por lo tanto,
estos compuestos son buenos candidatos para motivar e inspirar el aprendizaje de los
estudiantes. Además, los ésteres de isoamilo y éster de geranilo tienen un aroma
distinto, lo que permite a los estudiantes detectar su formación directamente al oler.

La resina acrílica con lipasa de Candida antarctica (Novozyme 435) se usó como
biocatalizador en este estudio debido a su alto rendimiento de conversión de producto y
precio razonable para uso en el aula (aproximadamente 1.3 USD / reacción). En esta
lección de aprendizaje, la síntesis de éster libre de solvente catalizada por Novozyme
435 se llevó a cabo en un matraz Erlenmeyer. Inicialmente, se mezclaron 14.4 mmol de
alcohol y 7.2 mmol de ácido carboxílico (relación molar 2: 1), y luego se agregaron 30
mg de enzima (1.5% p / p). La mezcla de reacción se incubó en un agitador orbital con
una velocidad de agitación de 100 rpm a temperatura ambiente. Los rendimientos de
producción en 2 h fueron 21%, 68%, 83% y 84% para acetato de isoamilo, butanoato de
isoamilo, hexanoato de isoamilo y octanoato de isoamilo, respectivamente (ver Figura
1A).

Para la síntesis de hexanoato de isoamilo y octanoato de isoamilo, las reacciones

también alcanzaron el equilibrio después de 2 h. De manera similar a la síntesis de
derivados de éster isoamilo, los derivados de éster de geranilo también se sintetizaron
usando una reacción de esterificación catalizada por lipasa. La reacción sin solvente se
realizó agregando 30 mg de enzima (1.5% p / p) a una mezcla de 14.4 mmol de geraniol
y 7.2 mmol de ácido carboxílico (relación molar 2: 1). La mezcla de reacción se incubó
a temperatura ambiente con agitación a 100 rpm. La síntesis de ésteres de geranilo fue
más lenta que la síntesis de ésteres de isoamilo (véase la Figura 1B). Los rendimientos
de producción fueron 33% para acetato de geranilo, 71% para butanoato de geranilo,
80% para hexanoato de geranilo y 79% para octanoato de geranilo después de 5 h. Las
reacciones también alcanzaron el equilibrio después de 6 h para la síntesis de hexanoato
de geranilo y octanoato de geranilo, con un porcentaje de rendimiento del 87% y 88%,
respectivamente. Estos resultados son el primer informe para la síntesis de hexanoato de
geranilo y octanoato de geranilo catalizado por Novozyme 435. Todas las identidades
estructurales de los productos de éster de geranilo se confirmaron utilizando GC − MS
(consulte la Información de apoyo para el instructor, Figuras S2.1 − S2.8).

La cantidad de formación de producto se determinó mediante el método de titulación

utilizando NaOH 0,1 M como solución estándar y fenolftaleína como indicador. Se
retiró una parte alícuota de la reacción (100 µl) sin la enzima para detener la reacción en
varios momentos, e inmediatamente se agregó 1 ml de etanol. El etanol no solo detiene
la reacción sino que también actúa como disolvente para la valoración de la mezcla con
una solución estándar de NaOH. Se realizaron tres titulaciones para cada muestra
recolectada. La diferencia en la cantidad de NaOH utilizada entre los grupos
experimentales y los grupos de control (la reacción sin la enzima) se usó para calcular el
porcentaje de conversión de esterificación (aunque el producto éster puede ser
hidrolizado por NaOH, pero la hidrólisis es muy lenta, no afecta significativamente el
porcentaje de conversión de esterificación).