Temario

Sensores Qumicos

Bioing. Maria Lorena Lpez Rodriguez

19 de Junio 2009

Transductores qumicos. Clasificacin. Sensores Electroqumicos.

Sensores potenciomtricos. Teora y medicin de pH. Electrodo

de referencia. Electrodo indicador: Electrodo selectivo de vidrio.
Electrodo de membrana lquida: Ca++, K+. Electrodos sensibles a
molculas: CO2.

Sensores amperomtricos: O2.

Sensores con semiconductores.

Biosensores.

Sensores de gases.

Instrumentacin: Analizador de pH. Objetivo del equipo.

Descripcin del equipo. Calibracin. Mantenimiento general del
equipo y del electrodo. Solucin de problemas comunes.
2

Transductor qumico

Sensor qumico

Un transductor qumico produce una seal

elctrica proporcional a un parmetro
qumico

Composicin qumica de la sangre u otros

fluidos (PO2, PCO2 , pH, etc.)

Composicin de los gases respiratorios (O2,

CO2 y N2)

Segn el principio de transduccin:

Clasificacin

Electroqumicos

Segn la respuesta:

efecto de la interaccin electroqumica entre el

analito y el electrodo

pticos
fenmenos pticos, resultantes de la interaccin
del analito y el receptor

Msicos

Directos

Seal
Elctrica

cambio de masa sobre una superficie modificada

Indirectos

Trmicos
efecto calorfico de la interaccin entre el analito y
el receptor
5

Segn el principio de transduccin:

Mtodos electroqumicos

Electroqumico

ptico

Msico

Trmico

Parmetro a
medir

- Potencial
- Corriente

- Absorbancia
- Fluorescencia

Masa

Temperatura

Transductor

- Electrodos de
metal
- ISFETs

Fotodiodos

Cristales
piezoelctricos

Termistor

Aplicacin

- pH
- ISEs

Sensores de O2

Inmunosensores

Sensores
enzimticos

Grupo de mtodos analticos cuantitativos basados en

las propiedades elctricas de una disolucin del analito
cuando forma parte de una celda electroqumica

Celda Electroltica

Celda Galvnica o Pila

Reaccin qumica

energa externa
al sistema

espontneamente
se genera energa
8

Celda electroqumica - Electroltica

Celda electroqumica - Galvnica

- +

KCl

Oxidacin

Reduccin

Unin
lquida

1.
2.
3.

Electrolito:
-Lquido
-Slido

Electrodos conectados externamente mediante un conductor

metlico
Disoluciones de electrolito en contacto (permite movimiento de iones)
Reaccin de transferencia de e- en cada uno de los dos electrodos

Celda
qumicamente
reversible

Potencial de Celda:

10

Electrodo Est
Estndar de Hidr
Hidrgeno (EEH)
2H+(ac) + 2e- H2(g)

Ecelda = Ectodo Enodo

2H+ + 2e- H2(ac)

H2(ac) H2(g)

Electrodo de referencia:

para que los valores de potenciales relativos de

electrodo sean tiles y tengan aplicacin amplia, por
convencin se emplea una semi-celda de referencia
frente a la cual se comparan todas las dems

Electrodo estndar o normal de hidrgeno

Electrodo de plata / cloruro de plata
Electrodo de calomel

11

Es reversible
Acta como nodo o ctodo
El potencial de un EEH depende:
t
actividades del ion hidrgeno y del hidrgeno molecular en la solucin

Especificaciones para un EEH: aH+ = 1 y pH2 = 1atm

Por convencin: potencial de este electrodo valor de 0V

cualquier potencial que se desarrolle en una celda galvnica

formada por un EEH y algn otro electrodo se debe enteramente a
este ltimo
12

Electrodo de plata/cloruro de plata:

Requisitos de un electrodo de
referencia:
referencia:

fcil de fabricar
reversible
sumamente reproducible

Consiste en un alambre de Ag que se oxida para formar una capa de AgCl

Se introduce en una disolucin KCl saturada con AgCl
Un puente salino conecta la disolucin de KCl al sistema electrdico
El potencial de este electrodo es: 0.2 V positivo con respecto al EEH

AgCl (s) + e- Cl- + Ag(s)

Electrodo de calomel:
En la prctica:
El potencial es: de 0.24 V positivo
La reaccin de electrodo es:

Electrodo de plata/cloruro de plata

Hg2Cl2(s) + 2e- 2Cl- + 2Hg(l)

Electrodo de calomel

- Ag / ClAg: t > 60C

- Hg(I) reaccionan menos con
componentes de la muestra

13

Potencial de electrodo. Potenciales de celda para una celda que se

compone del electrodo en cuestin actuando de ctodo y del EEH
actuando de nodo

Potencial estndar de electrodo E. Potencial de electrodo

cuando las actividades de todos los reactivos y productos son la unidad

Los mtodos electroanalticos pueden

basarse en la medida de:

M2+ + 2e- M(s)

Ctodo: lmina de metal M en disolucin de

nodo: EEH

14

E de una celda mientras que I se fija a algn

valor constante

Potenciometra
M2+

Por definicin el potencial E observado en el dispositivo de medida de

voltaje es el potencial de electrodo de la pareja M/M2+

Se supone:
potenciales de unin a travs del puente salino = 0
aM2+ (ac) = 1

15

I en una celda electroqumica a un E fijo

Amperometra
16

Potenciometra

Sensores electroqumicos

Potenciom
Potenciomtricos

Estudia la FEM generada en una celda galvnica

donde:

Amperom
Amperomtricos

una reaccin qumica tiene lugar de forma espontnea

y donde:
energa qumica energa elctrica

medida de la FEM

Semiconductores

[especies qumicas] en una muestra

18

17

Medici
Medicin de par
parmetros fisiol
fisiolgicos
de inter
inters

Sensores Potenciomtricos
Son aquellos en los cuales la seal
primaria, fruto de la interaccin entre
analito y elemento de reconocimiento, es
un potencial elctrico

Exmenes clnicos de rutina:

La medida se realiza a intensidad nula y

frente a un electrodo de referencia

19

Hemoglobina y hematocrito
pH
Gases en sangre (presin parcial de O2 y CO2)
[Electrolitos] (Na+, K+, Ca2+)
Otros parmetros de inters: glucosa, urea, etc.

Cada test tiene un propsito especfico en el

diagnstico
20

Medici
Medicin de pH

Teor
Teora del pH

Los electrodos de pH idealmente se comportan como una celda

electroqumica y reaccionan a la [H+] generando una FEM que segn la
Ley de Nernst es:

Medida de la [ ] del in hidrgeno (H+) dada en moles (M)

por litro en una disolucin
pH =

log[H+]

[H+]

E = E +

10pH

Reemplazando las constantes:

El agua se disocia:

se considera una sustancia neutra

Si la solucin de aH+1 es una solucin normal de hidrogeniones (1g H+

por litro) pH = -log aH+

14

Alcalinidad

aH + 1
aH + 2

Conociendo la aH+ en una de las soluciones calculamos la otra

E = 0.059 log
7

Acidez

1
= 0.059 pH
aH + 2

pH =

E
0.059

21

22

Electrodo indicador

Electrodo de referencia

E = 0.059 log

H2O [H+] [OH] = 1,0 x 1014 M (a 25C)

agua [H+] = 1,0 x 107 M pH = 7

Rango de acidez de una disolucin:

RT
RT
ln a H + = E + 2.3
log aH +
nF
nF

Potencial constante en el tiempo

No reaccionan con el analito

Selectividad con el analito

Responde en forma rpida y reproducible a los cambios
de actividad del ion analito
Electrodo Indicador

Metlico

Potencial: reaccin
xido/reduccin

Membrana

Electrodo selectivo de iones

Electrodo de pIon

Potencial: unin
23

Electrodo de vidrio

Propiedades de las membranas

selectivas

Hay 2 electrodos de
referencia:

Mnima solubilidad: 0 (disoluciones de analito

generalmente)

Molculas grandes o agregados moleculares: vidrios de slice o resinas

polimricas

externo de Ag/AgCl o calomel

interno de Ag/AgCl

Conductividad elctrica: migracin en el interior de la

Aunque el electrodo de referencia

interno es una parte del electrodo de
vidrio, no es el elemento sensible al
pH

membrana de iones con una sola carga

Reactividad selectiva con el analito:

la
membrana o alguna de las especies contenida en la matriz de la
membrana deben ser capaces unirse selectivamente con los iones del
analito

La delgada membrana de vidrio, en la base del electrodo,

es la que responde al pH
Debe estar hidratada antes de funcionar

25

Electrodos de membrana l
lquida

Membranas lquidas: lquidos inmiscibles

retenidos en un soporte slido, inerte y poroso
que se unen selectivamente con algunos iones
Permiten la determinacin potenciomtrica
directa de las actividades de varios cationes
polivalentes y aniones y cationes monovalentes
de gran importancia fisiolgica. Ej. Calcio,
Potasio, etc.

26

Disco poroso de plstico

hidrfobo: mantiene la capa
orgnica entre las dos
disoluciones acuosas

Los poros del disco se llenan

con el lquido orgnico

Para determinaciones de
cationes divalentes:

Tubo interno: disolucin acuosa

patrn de MCl2 (M2+ catin a
determinar) saturada con AgCl
electrodo de referencia:
alambre de plata Ag/AgCl disolucin

27

28

Electrodos tpicos de membrana lquida disponibles

comercialmente

Electrodos sensibles a mol

molculas
Electrodos sensibles
a mol
molculas
Sondas sensibles
a gases

Membrana catal
cataltica

Gases disueltos
Ej.: CO2, amoniaco

Compuestos org
orgnicos
Ej.: glucosa, urea

29

Dise
Diseo de las sondas de membrana para CO2

Sondas sensibles a gases

Son celdas electroqumicas construidas con un
electrodo especfico de iones y uno de referencia
sumergidos en una disolucin interna, que est retenida
por una delgada membrana permeable a gases

30

Cuando esta membrana se coloca entre 2 soluciones de [iones]

se estable una V a travs de la membrana
Si la [ion1] a un lado es conocida se puede conocer la [ion2 ] a
travs de la V a travs de la membrana dada por la ec. ideal de
Nernst
31

El corazn de la sonda es una

membrana delgada y porosa
(fcilmente reemplazable)

Separa la disolucin del analito de

una disolucin interna que
contiene NaHCO3 y NaCl

Electrodo de vidrio sensible al pH

Electrodo de referencia: Ag/AgCl

El pH de la pelcula de lquido
adyacente al electrodo de vidrio es
el que proporciona una medida del
contenido de CO2 de la disolucin
del analito situada al otro lado de
la membrana

32

Mecanismo de respuesta

Cuando una disolucin que contiene CO2 se pone en contacto con la membrana
microporosa el gas difunde a travs de la membrana

Debido a que los poros de la membrana son numerosos y pequeos, el equilibrio

se establece rpidamente entre la disolucin externa y la pelcula delgada de
disolucin interna adyacente a la membrana

En la disolucin interna se establece otro equilibrio que hace que cambie el pH de

la pelcula superficial interna
CO2 (ac) CO2 + H2O H2CO3 HCO3- + H+

El electrodo de vidrio (en la pelcula de disolucin interna) detecta el cambio de pH

El potencial de celda (electrodo de referencia interno + electrodo indicador) est

determinado por la [CO2] en la disolucin externa

Ningn electrodo est en contacto directo con el analito

Las especies que pueden interferir en la medida son los

gases disueltos que pueden pasar a travs de la
membrana y que puedan adems afectar el pH de la
disolucin interna

33

34

Electrodos de membrana biocatal

biocataltica

Consideraciones generales
finales

La muestra se pone en contacto

con una enzima inmovilizada
donde el analito experimenta
una reaccin cataltica para dar
especies tales como amonaco,
CO2, iones H+, o H2O2

La [producto] es a la [analito]
Poseen muchas limitaciones: costos, respuesta a ms de un catin
monovalente, incompatibilidad de pH entre la enzima y el sensor
(enzima pH=7, sensor pH=8 9)
35

Los fabricantes proporcionan informacin sobre

las caractersticas y modo de empleo

Tipo de membrana

Rango de [ ] en la que se puede medir el analito

t en que operan las interferencias

Cuidados del electrodo indicador

Electrodo de referencia requerido

36

Medicin de pH

37

38

Instrumentaci
Instrumentacin: Medidor de pH

Brazo portaelectrodo
Electrodo/s

Determina la [H+] en una disolucin

Objetivo: realizar mediciones de la acidez de
una solucin acuosa, siempre que el mismo
sea utilizado de forma cuidadosa y se ajuste a
procedimientos plenamente comprobados
Selector de funciones:

pHmetros, monitores de pH

Ajuste temperatura
Calibracin
39

Modo de operacin

40

Brazo portaelectrodo con

agitador

Electrodos

Par de electrodos:
-Referencia
- Indicador

42

Solucin de relleno:

3.

Seleccin del electrodo

a.

Gel:

Par de electrodos o combinado:

1.

b.

Suspensiones coloidales
Muestras que contienen ioduros
Muestras slidas
Soluciones viscosas
Muestras que requieren determinaciones de iones especficos

Rellenable:

> mantenimiento
Cuerpo de vidrio
Exactitud alta (0.01 unidades de pH)
> Vida til
Aplicaciones de laboratorio

Construccin del cuerpo:

4.

Tipo de juntura: simple (Ag/AgCl) o doble (Calomel)

2.

No necesita mantenimiento
Cuerpo de polmero
Exactitud moderada (0.05 unidades de pH)
Vida til limitada
Aplicaciones de campo o industriales

a.

Vidrio:

Muestras que reaccionan con la Ag

Protenas, sulfuros o iones de metales pesados

Buffer Tris [tris(hydroxymethyl)aminomethane]

b.

Aplicaciones de laboratorio
Compuestos orgnicos o solventes que pueden atacan el epoxy
Materiales corrosivos

Epoxy o polmero:

> vida til

Aplicaciones de campo

Otras consideraciones para una aplicacin

particular

Dimensiones fsicas del electrodo y del bulbo

Tipo de muestra

Tipo de juntura lquida: cermica, Teflon o polipropileno

Pin cermico: bajo velocidad de flujo

Cermica anular o coaxial: flujo alto para prevenir taponamiento
Teflon o polipropileno: flujo alto, difcil de taparse
Unin sleeve (manga): flujo ms rpido, para muestras sucias o viscosas

pH de la muestra

Resistencia del electrodo

Conector y longitud de los cables

Montaje: vertical, no < a 15

Unin lquida

Calibracin

Calibracin de un punto

Calibracin

Se realiza en condiciones de funcionamiento y uso

normal
Utiliza una solucin de referencia de pH conocido

Calibracin de dos puntos

Se realiza para efectuar mediciones muy precisas

Si se utiliza de forma espordica o si el
mantenimiento que recibe es eventual
Utiliza dos soluciones de referencia de pH conocido
49

50

Compensacin de temperatura

La Vsalida del electrodo cambia

linealmente con los cambios de pH

El pH de una solucin depende de la t

La magnitud de la variacin puede

predecirse

pH = 7 a 25C error temperatura = 0

Compensacin de temperatura

Tabla de error pH / t

Se corrige: sumando o
restando el error (de tabla)
del valor de pH medido
segn estos criterios

0.03pH error / unidad de pH / 10C

> 25C

< 25C

Restar

Sumar

<7

Sumar

Restar

Compensaci
Compensacin manual: El usuario coloca la t
t a
la cual se realiza la medici
medicin

ATC: sonda de temperatura incluida

Cuando t 25C y el pH 7
error de temperatura:

Temperatura
pH
>7

Mantenimiento general del ANALIZADOR

Mantenimiento bsico del ELECTRODO

Frecuencia: Cada seis meses

Frecuencia: Cada cuatro meses

1.

Examinar el exterior del equipo y evaluar su condicin fsica general.

Limpieza.

1.

Rellenar con una solucin saturada de KCl

2.

Probar el cable de conexin y su sistema de acoples. Limpios y en

buenas condiciones.

2.

Limpieza del electrodo: depende del tipo de contaminante

Limpieza general. Remojar en una solucin 0,1 M de HCl o 0,1 M de HNO3, durante 20 min

3.

Examinar el encendido y los controles del equipo. Buen estado y

fciles de accionar.

Remocin de depsitos y bacterias. Remojar en una disolucin 1:10 de blanqueador

4.

Verificar funcionamiento del display.

Limpieza de aceite y grasa. Enjuagar con un detergente o con alcohol

5.

Verificar el estado del brazo portaelectrodo (mecanismo de montaje y

fijacin del electrodo).

Limpieza de depsitos de protenas. Remojar en pepsina al 1 % en HCl 0,1 M, durante 5 min

6.

Revisar las bateras si aplica; cambiar si es necesario.

7.

Efectuar una prueba de funcionamiento midiendo el pH de una

solucin conocida.

domstico, durante 10 min

En todos los casos enjuagar con agua destilada antes de usar

Despus de realizar cualquier operacin de limpieza, enjuagar con agua

destilada y rellenar el electrodo de referencia antes de usar
53

54

Soluci
Solucin de problemas comunes

Otros cuidados

No golpear el electrodo. Manipularlo de

forma cuidadosa, evitando que sufra golpes,
choques o cadas.

Recordar que el electrodo es un elemento de

consumo y que tiene una vida til limitada.

Mientras no est en uso, mantener el

electrodo dentro de la solucin buffer de
almacenamiento.
55

56

Celda electroqumica - Electroltica

- +

Sensores Amperomtricos

57

58

Sensor amperom
amperomtrico de Clark

Mtodo amperomtrico

La determinacin de la PO2 molecular en una

solucin acuosa depende de la reduccin
qumica del O2 en la superficie metlica u otra
conductora cuando se aplica una diferencia de
potencial entre el electrodo de referencia y el
electrodo de trabajo por una fuente de tensin
externa

Se utiliza un electrodo de Clark

59

El sensor de O2 mide la
corriente originada durante la
reduccin de oxgeno:
O2 + 4e- 2O-

Electrodo de platino:
superficie donde se produce
la reduccin cubierto por una
membrana

Electrodo de referencia:
Ag/AgCl

60

Membrana permeable al O2

Evita contaminaciones con sustancias en la muestra (mayor vida til)

Mejora la respuesta del sensor: controla la difusin de O2 en la

superficie de platino

Evita el contacto directo del electrodo con la muestra

Los iones Cl- del electrolito reaccionan con el nodo de Ag formando

AgCl (oxidacin)

Los e- producidos se usan para la reduccin de O2 en la superficie de Pt

Este flujo resultante de e- (corriente en el rango de 0 a 10nA) es a la

PO2 en la muestra de sangre
La corriente es tambin al rea de superficie del electrodo de trabajo
reas de superficie de electrodo pequeas minimizan el consumo de O2
de la muestra
61

62

MOSFET

ISFETs

Aplico una tensin (VD) entre

Drenador Fuente: uniones p-n
polarizadas inversamente, no se
establece paso de corriente

Aplico un potencial (+) a la puerta:

efecto de campo

Transistores de efecto de campo selectivo a

iones

El ISFET es un transistor de efecto de campo

donde se reemplaza la puerta por una membrana
selectiva a iones
Se diferencia del MOSFET en que la variacin de
la [iones] de inters proporciona el potencial
variable de puerta para controlar la conductividad
del canal
63

portadores de carga (+) del

semiconductor p son repelidos por
el campo aplicado
canal de conduccin

La intensidad que circula crece con

el potencial de puerta (Vp) una vez
superado un valor mnimo o tensin
umbral Vu

1. Puerta
2. Capa aislante
4. Canal
S: fuente
D: drenador
B: sustrato

iD = K (VP VU ) 2
64

ISFET

Para mantener la i de drenaje constante se interpone un

potencial adecuado Vp en serie con el potencial de
membrana

Reemplazo la puerta metlica

por una membrana selectiva

Ahora el potencial de membrana

modula la intensidad del circuito
principal

El potencial Vp aplicado es la medida final que se

relaciona con la actividad de la especie principal de la
membrana depositada en la puerta

Combinando las expresiones anteriores:

El potencial umbral Vu ahora es

variable y depende de la
actividad de los iones (de carga
z) en disolucin:

VU = K 2 +

0,05916
log a x
z

VP =
1. Referencia
2. Capa aislante
3. Encapsulante
4. Canal
S: fuente
D: drenador
B: sustrato

VP = K 3 +

66

Interferencias

Expresin de trabajo: ecuacin de Nernst (relaciona la

medida con la especie qumica medida):

0,05916
V = K +
log a x
zx

Idealmente: respuesta a una nica especie, el ion principal

Ecuacin de Nicolsky-Eisenman: contribucin de posibles

iones interferentes

zx: carga del ion (con su signo)

ax : actividad que presenta en
la disolucin

V = K +

V = K + s log a x

0,05916
zx / z y
log(a x + K xpot
)
,y ay
zx
y x

ax y ay son la actividad del ion principal y del ion interferente respectivamente

zx y zy las cargas de los iones principal e interferente respectivamente

Un sensor potenciomtrico tiene la sensibilidad (s) fijada

0,05916
log a x
z

65

Aspectos prcticos

iD
0,05916
+ K2 +
log a x
K
z

Para un catin monovalente, la respuesta se incrementa en 59,16

mV por dcada de actividad (29,58 para un ion divalente),
mientras que para un anin el potencial decrece en esa proporcin
67

Kxy : coeficiente de selectividad potenciomtrica

Medida de la influencia del ion interferente en la respuesta final

Valores muy pequeos de Kxy son propios de sensores que muestran
una elevada selectividad por el ion principal
68

Clasificacin

Membranas

ISFET: genrico, diferentes variantes. Ej.

para medicin de pH

ChemFET: cuando se utiliza una

membrana cristalina o polimrica

EnFET: biosensor enzimtico

InmunoFET: basado en interacciones

entre antgeno y anticuerpo para generar
el efecto de campo

Implementacin

Analito

ISFET de membrana de
almina

Variante

xido aislante

pH

ChemFET de membrana
cristalina

Recubrimiento con
haluro de plata

Cl-

ChemFET de membrana
polimrica

Ionforo en matriz de
silicona

Ca2+

ISFET sensible a gases

Membrana permeable a
gases

NH3

EnFET

Membrana conteniendo
ureasa

Urea

69

70

Ventajas frente a un electrodo de

vidrio

Aplicaciones

Robustez

Tamao pequeo

Respuesta rpida

Posibilidad de fabricacin en paralelo

Industria farmacutica
Anlisis de efluentes
Contaminantes especficos en agua
Anlisis de suelos

No requieren de la hidratacin previa a su

utilizacin

Clnico:

Pueden almacenarse en estado seco

Volumen de muestra bajo

Anlisis de electrolitos en sangre

Anlisis de CO2

71

72

ISFET para pH

Disolucin del analito:

contiene iones H3O+

73

Puerta: recubierta con

una capa aislante de
SiO2, Si3N4 o almina

Todo el dispositivo est

recubierto de un
encapsulante polimrico
(excepto la puerta; aisla todas
las conexiones elctricas de
la disolucin del analito)

La superficie aislante funciona superficie de un electrodo

de vidrio
Los H+ procedentes de los iones H3O+ disolucin a ensayo
son adsorbidos por Si3N4

[H+] adsorbidos
V puerta fuente
conductividad del canal
Se puede controlar electrnicamente la conductividad del
canal para proporcionar una seal que sea al log [H3O+]
en la disolucin
75

74

Determinaci
Determinacin colorim
colorimtrica de pH

&

Mtodos de uso frecuente

Simplicidad
Peque
Pequea cantidad de muestra
$

'

Determinaciones aproximadas, no exactas

&
&

[H3O+] disolucin

En contacto con la capa

aislante y un electrodo de
referencia

&

76

Fundamento

Indicadores: toman coloraciones segn los pH de las

soluciones donde se aaden

Colorantes de la serie de Clark y Lubs:

Son cidos o bases que al disociarse toman viran de color

( del de la combinacin normal)
HI H+ + I-

Zona til o de viraje: corresponde a dos colores que evidencian el

predominio de la forma cida o alcalina del colorante para un
determinado pH

Colorantes de Michaelis:

K=

( H + )( I )
( HI )

y HI tienen coloracin; la solucin donde se agrega el

indicador presentar un color que depender de la [H+]

Derivados de la sulfonftalena
Amarillos del lado cido y rojos o azules del lado alcalino

Colorantes nitrados o fenolftalena

Monocromticos; van de incoloro al coloreado o viceversa

Indicador universal o de Bogen: mezcla de varios colorantes, dan los

colores del espectro a medida que pH

I-

El viraje del indicador se produce cuando la

[H+]

pH

10

12

=K
77

Papeles impregnados con indicadores: toman las coloraciones

correspondientes cuando se mojan en la solucin cuyo pH se quiere
conocer

El tono adquirido por el papel depende del pH de la solucin

Se compara con los colores estndar que llevan los tubos portapapeles

Ej: un papel impregnado con rojo fenol (zona de viraje entre 6.8 y 8.4)
permite determinar el pH de una solucin comprendido dentro de estos
valores

79

78

Biosensores

80

Biosensores
Los biosensores son sensores
modificados biolgicamente que nos
permiten identificar, transformar y
cuantificar un evento biolgico
poder analtico de los transductores qumicos
+
selectividad de los bioreceptores
81

82

Catalizadores biolgicos enzimas

Ventajas de enzimas comerciales: se reproducen por lotes, tiempo de

vida y caractersticas conocidas, disponibilidad inmediata

Desventajas de las enzimas purificadas: no son siempre estables y

pueden necesitar la presencia de sus cofactores para operar en
forma apropiada

Microorganismos. Entidades estructurales que poseen todas las

enzimas necesarias y sus cofactores en un ambiente optimizado por la
naturaleza

83

Tejidos y organelas. Presentan la ventaja de cohesin

Inmunorreceptores. Basados en reacciones antgeno-anticuerpo

Quimiorreceptores. Receptores celulares especficos de

membranas celulares que se excitan qumicamente para producir
cambios conformacionales. Ej: neurorreceptores para detectar drogas y
toxinas
84

Inmovilizacin del bioreceptor

Topograf
Topografa de los distintos sustratos

Modificacin superficial:
Monocapas:

Octanotiol sobre
Au/vidrio

-0.45V

Octanotiol sobre
Au monocristalino

-0.40V

Adsorcin
Sistemas Avidin-Biotin
SAM
Formacin de enlaces
covalentes

Multicapas:

Atrapamiento (geles,
polmeros, etc)
Microencapsulado

Preparaci
Preparacin de las SAMs

86

Transductores

Biosensores basados en enzimas

En funcin del componente bioactivo:

Electroqumicos
Potenciomtricos
Amperomtricos
Semiconductores

Quimioreceptores

Inmunosensores

Biocatalticos

Trmicos

Msicos (piezoelctricos)

pticos (fotomtricos)
92

Transductores trmicos
Mide la [sustrato] usando la variacin de entalpa
de una reaccin enzimtica
Mtodos para medir temperatura:

Termocuplas: no son lo suficientemente

sensibles
Termistores: son mezclas de xidos metlicos
con semiconductores cristalinos

La resistencia de un termistor es f(t), lo cual se ocupa

como principio para la transduccin
93

Transductores piezoelctricos

Las mediciones piezoelctricas usan la aparicin de una

polarizacin elctrica, o una variacin en la polarizacin
existente, por ejemplo cuarzo, cuando se aplica una
fuerza en la direccin apropiada

Este efecto piezoelctrico es reversible

95

T de referencia (variaciones de la t medio)

T trabajo (variaciones de t por la reaccin enzimtica ms las del

medio)

La enzima inmovilizada se coloca directamente sobre el termistor

de trabajo. La enzima transforma el sustrato y libera o consume
caloras que pueden medirse in situ por los termistores.

La diferencia de las dos t es la variacin por la actividad

enzimtica.

Mide la masa depositada en la superficie de un

cristal piezoelctrico, detectando la variacin en
su frecuencia

Se emplean dos termistores:

94

Un sensor piezoelctrico consiste en un cristal

de cuarzo, electrodos metlicos y el receptor
que brinda la selectividad
Al aumentar el peso del cristal su FRC

96

Aplicaciones

Empleando enzimas:

Deteccin y cuantificacin de organofosfatos: la enzima colinesterasa forma

compuestos con los derivados organosfatados, permitiendo su deteccin en
fase gaseosa. El de peso sobre el cristal se debe a los compuestos
formados.

Empleando agentes inmunolgicos

Deteccin y cuantificacin de bacterias:

Cuantificacin de Digoxina

Transductores pticos (fotomtricos)

Se basan en la medicin de la variacin de las propiedades
pticas de un medio o un receptor inmovilizado

Fibras pticas: la luz entre una muestra y una fuente o

detector se transporta a lo largo del interior de las fibras
siguiendo los principios de reflexin total

La variacin de masa se produce por el acoplamiento Ag-Ac

Inmovilizando el Ac anti-Candida para la bacteria Candida albicans, se pueden
medir [ ] entre 106 y 5.108 bact/ml
Se inmoviliza Ac anti-Digoxina sobre el cristal de cuarzo
Se coloca el sensor en el ambiente con el Ag
Se deja secar el sensor con el complejo Ag-Ac
Se mide frecuencia en fase gaseosa

Se obtiene una relacin lineal entre [Digoxina] y frecuencia (100 y 800 ng/ml)
98

Comnmente el
material (reactivo) que
cambia sus propiedades
pticas es inmovilizado
en la punta o alrededor
de una fibra ptica

Absorcin de luz

La reflexin total nunca es perfecta ondas

evanescentes que pueden usarse para detectar
variaciones de las propiedades pticas de pelculas
qumicas y biolgicas que se colocan alrededor de la fibra
99

El detector mide la de la intensidad de la luz de la

fuente causada por un producto absorbente que proviene
de la reaccin entre la sustancia inmovilizada y el analito

Se basan en el recubrimiento de la punta de una fibra

ptica con un indicador coloreado

Ej: medidores de pH pticos

100

Fluorescencia

La de la emisin fluorescente es de la de excitacin, y una sola

fibra es suficiente para transportar la radiacin de excitacin y
emisin

Es muy sensible y detecta muy bajas [ ]

Se emplean indicadores fluorescentes inmovilizados en la punta de

una fibra

Bio o Quimioluminiscencia

Bioluminiscencia: emisin de luz de organismos vivos como las

lucirnagas. Se emplea para cuantificar ATP.

Quimioluminiscencia: proviene de reacciones qumicas, en las que

ocurre una oxidacin que involucra O2 o H2O2. Estos sensores sirven
para medir H2O2
101

Biosensores de enzima

Tipos de biosensores

Los biosensores pueden clasificarse de

acuerdo al tipo de bioreceptor o del
transductor usado

Segn el tipo de bioreceptor (determina la

accin primaria del biosensor):

Combinacin de un transductor y una

capa delgada enzimtica, que se usa
normalmente para medir [sustrato]

Biosensores de enzima
Inmunosensores
Biosensores microbianos

103

La reaccin enzimtica transforma el

sustrato en un producto de reaccin que el
transductor puede detectar
104

Glu cos a + O2 GOD

Gluconolactato + H 2 O2

Principios de operacin
1.

2.

3.

4.

Transporte del S desde el

seno de la solucin hacia la
capa enzimtica

Biosensores enzimticos: electroqumicos,

pticos, trmicos o gravimtricos

Biosensores enzimticos electroqumicos

Difusin del S en esta capa,

acompaado por la
transformacin enzimtica
del S en P de reaccin

Miden la formacin de un producto o el consumo de un S,

si el P o S es electroactivo

Principio amperomtrico: se mide el consumo de O2 o la formacin de

H2O2 con un electrodo polarogrfico. Por ej. la glucosa se oxida por la
reaccin enzimtica de la glucosa-oxidasa (GOD) segn:

Migracin del P hacia el

transductor

Glu cos a + O2 GOD

Gluconolactato + H 2 O2

Conversin de la [P] en esta

superficie en una seal
elctrica por el transductor

Tanto el O2 como sustrato y H2O2 como producto pueden ser

detectados

105

106

Urea
NH 4+ ++ 2OH
H 2O

+
H + NH
Ureasa

+
H 22ONH 4+ + HCO3
3

EnFET

Electrodo de glucosa:
consiste en un electrodo
polarogrfico con una capa
de GOD inmovilizada
cubierta por una membrana
permeable a glucosa

Consisten en un ISE o ISFET cubiertos por una capa de

enzima inmovilizada y una membrana protectora

Se mide el P de las reacciones enzimticas. Por ej. la

hidrolizacin de urea es catalizada por la ureasa,

Urea + 2 H 2 O + H + Ureasa
2 NH 4+ + HCO3

La [glucosa] se mide por el

cambio de la corriente del
electrodo de O2 o del
electrodo de perxido

y luego NH3 se forma como:

NH 4+ + OH
NH 3 + H 2 O

Medicin de O2 : operacin
diferencial de 2 electrodos de O2
, con o sin GOD
107

Segn estas reacciones la urea puede medirse a travs

de un electrodo de NH3

Tambin hay otros electrodos potenciomtricos para

medir aminocidos, penicilina, etc.

108

Principio termomtrico: las reacciones

enzimticas producen calor en un rango de 20 a
100 kJ mol-4

La cantidad de sustancia puede estimarse del

calor producido

Un termistor recubierto con una enzima

inmovilizada puede ser un biosensor simple

Biosensores de enzima:
Resumiendo
Especificidad
Fcil implementacin
Disponibilidad comercial de enzimas y su
correspondiente transductor

El uso in vivo requiere biocompatibilidad (depsito de

plaquetas en la membrana enzimtica)

Aplicaciones:

Las sustancias tpicas que se analizan por

principios termomtricos son: etanol, glucosa,
lactato, cido oxlico, penicilina, sucrosa, y urea
109

Sensor de GOD para determinar glucosa en sangre y orina

diagnstico de diabetes

Electrodos de urea y creatinina funciones renales

Electrodo de colesterol deteccin y prevencin de arteriosclerosis

Electrodo de acetilcolina monitorear los neurotransmisores que

participan en la sinapsis
Electrodo de lactato evaluar esfuerzo muscular

110

Inmunosensores
Reconocen el acoplamiento entre un antgeno (Ag) y un
anticuerpo (Ab) que forman un complejo antgeno anticuerpo (AgAb),
Ab + Ag AgAb
K=

[ Ab Ag ]
[ Ab ][ Ag ]

K: constante de
afinidad

Cuando se introduce Ag (y Ab se mantiene constante), la cantidad de

Ag introducida se determina por el de AgAb

Si el anticuerpo Ab se inmoviliza y fija en la superficie del sensor, la

formacin de AgAb causar un cambio en potencial de electrodo, de
masa o de las propiedades pticas, que pueden ser detectados
directamente con una variedad de transductores

111

112

Ventajas:

Biosensores microbianos

Especificidad de las reacciones inmunolgicas

Se usan para medir drogas y para determinar la hormona HCG

para el diagnstico de embarazo, alfa-fetoprotena para la
identificacin de cncer, y el antgeno de superficie de hepatitis B

Combinacin de un microorganismo con un

transductor capaz de detectar el metabolito
involucrado

Desventajas:

Formacin del complejo AgAb lenta (gran n de pasos)

Inmunosensores indirectos: no dan una respuesta directa ante la

presencia del analito (precisan de una seal secundaria producida por
un marcador radiactivo, una enzima, un compuesto fluorescente, etc.)

No todos trabajan en condiciones de total reversibilidad

Son difciles de miniaturizar o no presentan la configuracin

electrnica adecuada para ser utilizados in-situ masivamente

Los microorganismos poseen sistemas

enzimticos que son los que dan la selectividad

Se inmovilizan generalmente en geles o usando

membranas de dilisis

113

114

Biosensor de medicin de respiracin

Ventajas frente a los electrodos de enzimas aisladas:

Menos sensibles a inhibirse por solutos y ms tolerantes

en ambientes de pH subptimo

> tiempo de vida que los electrodos de enzimas

+ baratos (porque la enzima no necesita aislarse)

Mantienen las enzimas en su ambiente natural

Consiste de microorganismos aerbicos inmovilizados y un electrodo de

O2

Cuando un sustrato, que un microorganismo puede metabolizar, se

encuentra en una solucin saturada de O2, ocurre una reaccin metablica
por el consumo de O2 disuelto, entonces puede medirse el sustrato por la
de O2

Puede medirse: glucosa, azcares, cido actico, amonio, y alcoholes

Biosensor de medicin de metabolitos

Problemas que presenta su construccin:

Inapropiados para mediciones in vivo y, en ambientes

biolgicos complejos

El gran n de enzimas presente en los microorganismos

puede hacer bastante difcil las interpretaciones analticas

115

Consiste de microorganismos inmovilizados y un sensor que detecta el

metabolito producido por la reaccin catalizada por ese microorganismo
Usando tipos de sensores de gases e iones, pueden medirse muchas
sustancias detectando los metabolitos
Por ej. electrodo utilizado para detectar H2 para medir cido frmico,
electrodo de CO2 para cido glutmico y lisina, y electrodo de pH para
cido nicotnico
116

Si se inmovilizan bacterias luminiscentes y se combinan

con un fotodetector, se pueden medir sustancias que
afecten la bioluminiscencia detectando el cambio en la
luminiscencia

Glucosa: luminiscencia

Cromo, mercurio, luminiscencia

Sensores hbridos: biosensor microbiano + membrana

con enzimas inmovilizadas

Por ej., el biosensor de urea se forma combinando un membrana

de ureasa y un sensor microbiano de NH3 usando bacterias que
causan nitracin. Este sensor es superior al potenciomtrico de
amonio en el sentido de que la interferencia inica o compuestos
voltiles como aminas es menos comn.

117

118

Sensores el
elctricos
Tipo Resistivos:
Resistivos: la R del sensor vara con la [gas]

Sensores de gases

Superficie de semiconductores de metal-xido (TiO2 , SnO2, ZnO),

orgnicos y polmeros conductores dopados con material cataltico
(Pd, Cu, Ni, Pt)
El gas reacciona con O2 adsorbido en la superficie del sensor
cambia la cantidad de e- en la superficie (y por lo tanto la
conductividad)

Trabajan a altas t (desde 130C) (necesitan R calefactora)

Sensor tipo Fgaro: tubo cermico donde se deposita el material

activo dopado con Pd

Tiene un filamento calentador en el interior del tubo

Se aplica una V para lograr la t de trabajo 350C

120

Sensores el
elctricos

Sensores catal
catalticos o pellistor
Una mezcla de gas combustible no arder hasta
que alcance una cierta t de ignicin ante la
presencia de materiales catalticos, el gas
empezar a arder a < t

Tipo Voltam
Voltamtricos:
tricos: la Vout depende de la [gas]

Un sensor de gas combustible cataltico utiliza

una bobina de hilo de Pt recubierto de un oxido
de metal con tratamiento cataltico

Ante la presencia de gases combustibles, las molculas reaccionan en la

superficie del sensor el cambio resultante de t en el hilo de platino cambia su
R [gas]

Vida til 2 aos

Problema: envenenamiento cataltico

Usan xido de nquel como material termoelctrico

Aplicando un gradiente de t al material termoelctrico se genera

una pequea tensin

Este gradiente de t puede ser provisto por una reaccin qumica en

uno de los lados del material

Algunos productos qumicos (silicona, cloro, compuestos sulfurosos) desactivan la

catlisis y hacen que el sensor no responda

Aplicaciones: detecta la mayor parte de los gases hidrocarburos

Detector tpico de metano

121

122

Sensor infrarrojo

Sensores electroqu
electroqumicos

Consiste en un electrodo sensor (ctodo) y un electrodo

indicador (nodo) separados por una delgada capa de
electrolito

El gas que se pone en contacto con el sensor reacciona

en la superficie del electrodo sensor y provoca un
mecanismo de oxidacin o reduccin se genera una
corriente elctrica [gas]

Los gases cuyas molculas consten en dos o mas tomos absorben especficas de
radiacin IR se pueden identificar las molculas del gas

La energa absorbida de la luz IR t de las molculas de gas [gas]

No tiene contacto con el gas a medir

Vida til: hasta 3 aos o especificacin de dosis de

exposicin al gas (ej: sensor de amonaco de 5.000
ppm/hora; si el sensor est expuesto constantemente a
50 ppm, tendr una vida de 100 horas)

Sencillos, robustos y tiles en la monitorizacin de la calidad del aire (CO2 o

hidrocarburos)

Elementos pticos pueden proteger los componentes del sensor del gas mayor vida til
y en situaciones de alta [ ]

No hay envenenamiento o contaminacin del sensor, combustin o fatiga del sensor

debido a larga exposicin

Aplicacin: deteccin de alta [hidrocarburos] y monitorizacin de CO2

Los sensores electroqumicos son vlidos para medir

unos 20 gases en los rangos de pocas ppm

CO, dixido de nitrgeno, Cl2, sulfito de hidrgeno, dixido de

sulfuro
123

124

Gases en sangre

Gases en sangre
Mtodos no invasivos:

Medicin invasiva: electrodo de Clark

Medicin mnimamente invasiva

Se introduce un pequeo catter en la nariz para

muestrear el aire exhalado

El extremo proximal puede tener una cubeta de

absorcin IR para determinar la cantidad de CO2 en la
muestra de aire

[CO2] en el aire exhalado representa el aire alveolar

podemos inferir el CO2 en sangre venosa

Medici
Medicin transcut
transcutnea electroqu
electroqumica de O2: electrodo de Clark

La piel sirve de membrana que separa el sensor de la sangre

Se mide indirectamente la composicin de gases en sangre arterial por

calentamiento

Medici
Medicin transcut
transcutnea electroqu
electroqumica de CO2

Oximetr
Oximetra de pulso:
pulso mide el cambio pulstil en la intensidad de luz
transmitida o reflejada a travs de 2 partes del cuerpo

Se usan 2 , diferencia entre el espectro ptico de la Hb oxigenada y

desoxigenada

125

Bibliograf
Bibliografa

126

Informacin de contacto

Principios de Anlisis Instrumental: Quinta Edicin. Skoog DA et al.

McGraw Hill, 2001.

Qumica Analtica: Sexta Edicin. Skoog DA et al., McGraw Hill, 1995.

Bioing. Maria Lorena L

Lpez Rodriguez

The Biomedical Engineering Handbook: Second Edition. Ed. Bronzino J.

Boca Raton: CRC Press LLC, 2000.

Measurement, Instrumentation and Sensors Handbook. Ed. Webster J.

Boca Raton: CRC Press LLC, 1999.

Medical Instrumentation. Application and Design: Second Edition. Ed.

Webster J. Houghton Mifflin Company, 1992.

INFIQC - Dpto de Fisicoqumica

Fac. Cs Qcas UNC
Pabelln Argentina
Tel: (0351) 4334180 int. 109

Principles of Applied Biomedical Instrumentation. Geddes LA y Baker

LE. John Wiley & Sons, Inc. 1968.

127

128