AISLAMIENTO DE DNA PLASMÍDICO
INTRODUCCIÓN
Los plásmidos son moléculas de DNA extra
cromosómico, circular y generalmente
pequeño que se encuentra en muchas
especies bacterianas y que se puede
replicar de manera independiente del DNA
cromosómico; los plásmidos no son
necesarios para viabilidad general de la
célula, pero pueden contener genes que
contribuyen a la supervivencia en
condiciones especiales como resistencia a
antibióticos.
Algunos plásmidos poseen la propiedad
conocida como replicación relajada esto es
que están presentes en forma de muchas
copias por célula, los que facilitan su
aislamiento y purificación. Un vector de
donación es un sistema que permite
introducir en una célula hospedera u
fragmentada de DNA que se pretende
clonar, en esta célula el vector se replica
expresa.
Para ser utilizado como vector como vector
de clonación, un plásmido ideal debe de
poseer al menos tres características:
1.- Debe tener su propio origen de
replicación y por tanto la capacidad de
replicación autónoma independiente del
genoma del hospedero.
2.- Debe tener sitios de clonación múltiple
que permitan la apertura del DNA con
enzimas de restricción y hace posible la
clonación de insertos de DNA en la forma y
orientación determinada.
3.- Debe de poseer marcadores genéticos.
OBJETIVOS
Aislar el DNA plasmídico bacteriano e
identificarlo mediante una electroforesis
en gel de agarosa.
RESULTADOS
Circular relajada
Lineal enrollada
Súper enrollada
Imagen 1. Gel de agarosa tras revelar el DNA
plasmídico por el método de electroforesis.
DISCUSIÓN
Para el aislamiento de plásmido se llevó a
cabo el procedimiento MIMI-PREP el cual
se realiza en hielo.
Al adicionar la solución I la cual contenía
TRIS y este actúa como regulador, EDTA
como agente quelante el cual evitó que las
nucleasas degraden el plásmido y glucosa
como una fuente de carbono temporal.
Con la solución II se llevo a cabo una lisis
alcalina donde el SDS actúa sobre la
membrana rompiéndolas y formando
complejos con las proteínas en la parte
hidrológica y el NaOH desnaturaliza las
proteínas las cuales se separan mediante
centrifugación.
Al adicionar la solución III que contiene
acetato de potasio re naturalizando el DNA
el cual se vio afectado con la solución II.
Para poder obtener el DNA plásmido se
adiciona la solución IV (isopropanol) el cual
disminuyó la constante dieléctrica lo que
precipita el plásmido.

Se re suspende el botón del plásmido con

la solución V el cuál contiene tris-EDTA la
actuó como agente quelante y como
regulador.

Para separarlo de hace mediante una

electroforesis donde el DNA migra al polo
positivo ya que tiene una carga negativa.

Para obtenerlo se usa bromuro de etidio el

cual se intercala en las pares de bases del
plásmido y mediante luz UV revelarlo.

La isoforma que corre más rápido es la

súper enrollada ya que en esta forma tiene
menor choque con las otras moléculas de
la agarosa seguido por la lineal enrollada y
por ultimo circular relajada.

En la parte inferior de las isoformas se

observa una parte homogénea brillante
que corresponde al RNA que no se elimina
ya que no se adiciona RNAasas.

CONCLUSIÓN

 Las isoformas del plásmido influye

en la velocidad del corrimiento.
 El plásmido tiene una carga
negativa.
 El plásmido tiene 3 isoformas.
 La isoforma con mayor cantidad
fue la súper enrollada.

BIBLIOGRAFÍA

 Vejar Rivera Eva Irma. Prácticas de

Bioquímica descriptiva. Editorial
Unison. Impreso en México2005.
2ª edición. Pág. 160-168