26.

Aminocidos
Isaac Tnez Fiana
Departamento de Bioqumica y Biologa Molecular, Facultad de Medicina, Universidad de Crdoba, Avda. Menndez Pidal s/n, 14004 Crdoba

RESUMEN

Veinte son los aminocidos constitutivos y piezas bsicas de las protenas. stas son constituyentes esenciales de todos los organismos, ejerciendo las funciones ms nobles y elevadas dentro de la clula. El presente captulo tiene como objetivo principal exponernos conceptos bsicos sobre estas unidades de las protenas y sus diferentes reacciones qumicas, as como mostrarnos su implicacin en la patologa mdica. Palabras Clave: Aminoacidurias, reacciones coloreadas

1. INTRODUCCIN Y OBJETIVOS Los aminocidos son las unidades constituyentes de las protenas, biomolculas estas ltimas de inters en las organizaciones estructurales y funcionales de clulas y tejidos. Tngase en cuenta que todas las enzimas, fundamentales para las reacciones bioqumica, y todos los anticuerpos, esenciales en los procesos de inmunidad, son protenas y se encuentran por tanto constituidos por aminocidos. La hidrlisis de protenas por los diferentes mtodos (cida, bsica o enzimtica) proporciona 20 aminocidos (alanina, prolina, lisina, cido asprtico, cido glutmico, asparagina, glutamina, histidina, glicina, serina, valina, tirosina, triptofano, fenilalanina, treonina, isoleucina, leucina, cistena, metionina y arginina) como constituyentes universales de las protenas. stos se distribuyen en esenciales (fenilalanina, leucina, lisina, metionina, isoleucina, treonina, triptfano y valina; aminocidos esenciales en nios, arginina e histidina) que deben ser suministrados por la dieta, y los no esenciales. Existen otros aminocidos no proteicos que aparecen en ciclos pero no forman parte de la estructura proteica, como es el caso de la ornitina, citrulina, 3-metilhistidina, GABA, L-azaserina, homoserina, homocistena, etc. Se conocen alrededor de 150. Los aminocidos desde el punto de vista qumico son cidos orgnicos (RCOOH), portadores de un grupo amino (-NH2) y un radical variable R. Segn la naturaleza del grupo R los aminocidos pueden ser clasificados en cuatro grandes grupos: apolares, polares sin carga, aninicos y catinicos.

El objetivo del presente tema estar dirigido a clarificar los conceptos relacionados con estas molculas, as como a entender su importancia clnica y a realizar tcnicas destinadas a su identificacin. 1.2. Metabolismo de aminocidos y afecciones relacionadas Una enfermedad gentica es una afeccin mrbida provocada por una variacin del material gentico humano. La enfermedad se produce cuando se lleva a cabo la mutacin en un solo gen en forma espontnea o hereditaria. Si sta se expresa, el gen mutante da lugar a la sntesis de una protena anormal o altera el nivel de produccin de una protena. 1.2.1. Aplicaciones Clnicas Por definicin los errores congnitos del metabolismo incluyen defectos que se encuentran en enzimas y que interrumpen vas fisiolgicas. Con esta interrupcin, se siguen tres cursos: Exceso de precursores txicos Exceso de metabolitos txicos Deficiencia de metabolitos esenciales

Los errores congnitos del metabolismo de aminocidos provocan aminoaciduria o incremento de aminocidos en la orina. Las aminoaciduras son renales o de desbordamiento: * Aminoacidurias renales. Identificadas por tasas plasmticas normales de aminocidos y elevacin de su presencia en orina. Este fenmeno se debe a una reduccin en la capacidad de reabsorcin de los tmulos renales * Aminoacidurias por desbordamiento. Elevacin de aminocidos en plasma y en orina Cistinuria. Los individuos excretan mayores cantidades de cistina, lisina, arginina y ornitina. El defecto parece localizarse en la protena de transporte que se encuentra en la membrana de ciertos tipos de clulas epiteliales. La nica manifestacin de la enfermedad es la formacin de clculos renales que se produce durante la niez y alcanza su mximo nivel en la tercera dcada de la vida. Se trata de una aminoaciduria renal. Cistinosis. Es la afectacin del almacenamiento de lisosomas que generalmente se debe a un defecto en el proceso de transporte para el paso de cistina a travs de las membranas del lisosoma. Se producen manifestaciones sistmicas graves debido a los precipitados, que afectan a diversos rganos (rin, hgado y bazo) as como a los tejidos de la mdula sea, ganglios

linfticos y crnea ocular. Se trata de una aminoacidura renal. Esta suele ser una de las causas del sndrome de Fanconi. Sndrome de Hartnup. Se encuentra incrementada la excrecin urinaria de alanina, treonina, glutamina, serina, asparagina, valina, leucina, isoleucina, fenilalanina, tirosina, triptofano, histidina y citrulina. Fenmeno que origina una aminoaciduria renal. Estos pacientes manifiestan erupciones escamosas de color rojizo que aparecen durante la primera dcada de la vida. Tambin presentan manifestaciones neurolgicas como dolor de cabeza, falta de concentracin, debilidad de los miembros y ataxia. Se caracteriza por una aminoaciduria renal. Fenilcetonuria. Grupo de afecciones caracterizadas por defectos en la conversin de fenilalanina a tirosina, debidos a la deficiencia de la enzima fenilalanina hidroxilasa. Lo anterior causa la acumulacin de elevadas concentraciones de fenilalanina y sus metabolitos, los cidos fenilctico, fenilpirvico y fenilactico. Se trata de un trastorno hereditario de carcter autonmico recesivo. Se diagnostica durante la lactancia y produce (en caso de no recibir tratamiento a tiempo) retraso mental grave. Los sntomas tempranos que pueden ser observados: Dificultad para ingestin de alimento Vmito Retraso en el desarrollo Hipopigmentacin Al tercer-cuarto da de vida extrauterina los niveles sricos de fenilalanina comienzan a incrementar. El aumento en fenilactico provoca que el sudor y la orina tengan un olor a ratn o a rancio. Si la enfermedad no se trata a tiempo se manifiestan los trastornos neurolgicos a los tres meses y alcanza su mxima expresin a los tres aos de edad. La restriccin diettica de fenilalanina evita el retraso mental. En general, los anlisis neonatales se llevan a cabo mediante la prueba de Guthrie, que es un anlisis microbiolgico semicuantitativo. Esta prueba se basa en que la presencia de fenilalanina evita la inhibicin de beta-2-tienilalanina en la bacteria Bacillus subtilis, fenmeno que permite el crecimiento de sta. La sangre del recin nacido se obtiene del taln y se coloca sobre papel de filtro. El disco se pone en medio de cultivo que contiene beta-2-tienilalanina inoculada con esporas de B. subtilis. Tras una noche de incubacin se comparan las zonas de crecimiento con discos control. Si la prueba de Guthrie indica un aumento de fenilalanina, se realiza una prueba de confirmacin. La aminoaciduria provocada por este proceso es de desbordamiento. Tirosinosis y Tirosinemia. Tirosinosis. Caracterizada por elevados niveles de tirosina en la sangre y en la orina. Los principales sntomas clnicos se encuentran relacionados con dao heptico y renal. La lesin heptica conduce a un fallo agudo o a un estado crnico que origina una cirrosis, por su parte, la disfuncin renal ocasiona el sndrome de Fanconi.

Tirosinemia. Caracterizada por la precipitacin de cristales de tirosina que conducen a la inflamacin y posterior lesin a nivel ocular y cutneo. En ciertos casos ha sido documento un retraso mental. En ambas situaciones se origina una aminoaciduria por desbordamiento. Alcaptonuria. Caracterizada por excrecin urinaria de cido homogentsico. La nica manifestacin de la alcaptonuria en nios pequeos es el fenmeno de que la orina se oscurece al contacto con el aire, incorporacin de un lcali y exposicin a la luz solar. Esta situacin persiste durante toda la vida y en general no produce consecuencias aparentes. Induce una aminoacidura de desbordamiento. Enfermedad de la orina color maple (olor a jarabe de arce, miel de maple). Se trata de una cetoacidura de -cetocidos e hidroxicidos procedentes de aminocidos con cadenas ramificadas (leucina, Isoleucina, valina). En caso de no ser detectada o no poner el tratamiento temprano produce dao cerebral grave y generalmente la muerte durante el curso del primer ao de vida. Los sntomas que pueden observarse son entre otros: hipoglucemia, acidosis, letargo, falta de apetito, vmito y convulsiones. Conduce a una aminoacidura por desbordamiento. Homocistinuria. Caracterizada por el aumento de homocistina en el organismo. Los sntomas se manifiestan tras el nacimiento, uno de los ms frecuentes es la dislocacin de la lente ocular. Tambin, se presentan anormalidades mentales y en su conjunto los diferentes daos asociados a este tipo de trastorno conducen a la muerte. La aminoacidura observada en este trastorno es del tipo de desbordamiento. Albinismo. Se debe a la ausencia de la enzima tirosinasa que permite el paso de tirosina a melanina. Induce una aminoacidura de desbordamiento.

3. LISTADO DEL MATERIAL MATERIAL NECESARIO Agua destilada Arginina Asprtico Bao Mara Calculadora Cistena Lisina Ninhidrina Pipetas 1 5 mL Prolina Tubos de ensayo

4. PROTOCOLOS A REALIZAR 4.1. Reacciones de los aminocidos 4.1.1. Prueba de la ninhidrina Reaccin para la deteccin de aminocidos, actualmente acoplada a sistemas de valoracin automtica. La ninhidrina (hidrato de tricetohidrindeno) es un oxidante energtico que por una desaminacin oxidativa de los aminocidos conduce a la formacin del aldehdo correspondiente, con liberacin de amoniaco y gas carbnico y formacin de la ninhidrina reducida o hidrindrantina. La molcula de hidridantina, en presencia de otra de ninhidrina, condensa a travs del amoniaco produciendo una estructura denominada indanona o prpura de Ruhemann, manifestando un color rojizo, excepto para la prolina, hidroxiprolina y en menor medida para la histidina. Presenta su mximo de absorbancia a los 570 nm, exceptuando los tres aminocidos reseados anteriormente. Aadir 2ml de: * Lisina 0,5% * Asprtico 0,5% * Prolina 0,5% Incorporar 2 ml de ninhidrina 0,2% en etanol 95% Calentar al bao mara Observar los resultados

4.1.2. Prueba del cido nitroso Tomar 1 ml de: * Problema * Patrn al 1% * Blanco de agua destilada Incorporar 0,5 ml de cido clorhdrico concentrado. Aadir 1 ml de nitrito sdico al 5% Observar los cambios

Nota: Si se desprenden burbujas indica presencia de grupos amino libres y por lo tanto la reaccin es positiva. 4.1.3. Prueba de Millon Ensayo especfico para los aminocidos fenlicos (tirosina). Esta reaccin da una tonalidad rosa o un precipitado rosa. Poner 3 mL de tirosina 0,02%

Aadir 4 gotas de reactivo de Millon (10 g de mercurio en 10 mL de cido ntrico fumante. Se le incorpora 40 ml de agua y se deja reposar. Finalmente se decanta.)

Nota: El proceso debe realizarse en campana con extractor Calentar en el bao mara Observar el cambio de coloracin

4.1.4. Prueba de Folin Incorporar 1 mL de la solucin problema, patrn al 1% y blanco de agua destilada Aadir 0,5 mL de 1,2-naftoquinon-4-sulfonato sdico al 0,2% Aadir 1 mL de hidrxido sdico al 10%. Calentar al bao mara a 70-80 C durante 5 minutos

Si aparece un color anaranjado o rojo es indicativo de la presencia de aminocidos. 4.1.5. Prueba de Sullivan Aadir 0,5 mL de la solucin problema, patrn al 1% y blanco de agua destilada Aadir 0,5 mL de cianuro sdico al 5%

Nota: Cuidado es extremadamente venenoso Aadir 0,5 mL de 1,2-naftoquinon-4-sulfonato sdico al 0.5% recin preparado Incorporar 2,5 mL de sulfito sdico al 10% en hidrxido sdico al 2% Aadir 0,5 mL de tiosulfato sdico al 2%

Si aparece una coloracin roja, la reaccin es positiva e indicativa de la presencia de cistena o cistina. 4.1.6. Prueba del azufre Tomar 3 mL de cistena 0,1% Incorporar 1 mL de NaOH al 40% Poner 2 3 gotas de una solucin de acetato de plomo Calentar al bao mara durante 3 minutos, hasta ebullicin.

Si aparece una coloracin negra en el precipitado, la reaccin ser positiva, indicando la presencia de azufre. En la presente situacin, azufre procede de la cistena.

4.1.7. Prueba de Sakaguchi Esta prueba es positiva para compuestos que contengan el grupo guanidinio como la arginina. El reactivo que se utiliza contiene -naftol e hipoclorito sdico, en medio alcalino. La aparicin de una coloracin roja es indicativo de una reaccin positiva. Poner 5 mL de arginina al 0,02% Aadir 1 mL de NaOH 2M Aadir 1 mL de -naftol al 0,02% en etanol Enfriar en hielo Aadir 1 mL de disolucin alcalina de hipoclorito sdico Esperar 30 segundos Aadir 1 mL de disolucin de urea Observar los cambios

4.1.8. Prueba de Jaff Poner 1 mL de solucin de creatinina al 0,01% y un blanco Aadir 1 ml de cido pcrico (preparado inmediatamente antes de ser utilizado mezclando 5:1 de solucin acuosa saturada de cido pcrico e hidrxido sdico al 10%)

Si acontece la aparicin de una coloracin roja, se tratar de una prueba positiva para la creatinina. Puede ser leda a 520 nm, detectndose hasta 5 g/mL. 4.1.9. Prueba de Hopkin-Cole Implica la reaccin del grupo indol del triptofano con el cido glioxlico, en presencia de cido sulfrico concentrado. Tomar 3 mL de triptofano 0,02% Aadir 1 mL de reactivo de Hopkin-Cole (10 g de magnesio ms agua hasta que ste quede cubierto. Mantener lentamente en agitacin continua, aadir 250 mL de disolucin saturada y fra de cido oxlico. Filtrar y acidificar con cido actico diluido y enrasar con agua hasta 1 L) Aadir el contenido del tubo a otro que contenga 1 mL de cido sulfrico concentrado

Si la reaccin es positiva se colorear la zona de contacto. 4.2. Caso clnico Un beb varn de 5 meses es revisado en el Servicio de Pediatra aprecindose:

Retraso en el desarrollo Piel blanca

Rubio Fotosensibilidad

En el reconocimiento el pediatra decide realizar una bioqumica sangunea, destacando los siguientes resultados: pH: 7,13 pCO2: 24 mm Hg Creatinina 4,2 mg/dl Bicarbonato: 12 mmol/l y de orina apreciando: Glucosuria Proteinuria Preguntas: 1. Cules de los siguientes rganos est probablemente afectado? Msculo Corazn Hgado Riones

Riones 2. Qu aminoacidura se relaciona con ms frecuencia a este cuadro clnico? y con qu proceso se suele correlacionar? Cistinosis, Sndrome de Fanconi

6. BIBLIOGRAFA RECOMENDADA Anderson SC (1995): Metabolismo de aminocidos y afecciones relacionadas. En Anderson SC, Cockayne (Iniciales nombre?) (eds): Qumica Clnica, 1 Ed. Editorial Interamericana McGraw-Hill (Mxico D.F., Mxico), pp. 213 221. Berezov TT, Korovkin BF (1992): Chemistry of Proteins. En Berezov TT, Korovkin BF (eds): Biochemistry, 1 Ed. Editorial Mir Publishers Moscow (Mosc, Rusia), pp. 19 64. Cabanes J (1988): Propiedades qumicas y separacin de los aminocidos. En Lozano JA, Tudela J (eds): Prcticas de Bioqumica. Experimentacin y Simulacin, 1 Ed. Editorial Sntesis (Madrid, Espaa), pp. 8792. Snchez A (1998): Alteraciones de la digestin de protenas y de la absorcin y metabolismo de los aminocidos. En Gonzlez de Buitrago JM, Arilla E,

Rodrguez-Segade M, Snchez A (eds): Bioqumica Clnica, 1 Ed. Editorial McGraw-Hill Interamericana (Madrid, Espaa), pp. 181190. Stroev EZ, Makarova VG (1989): Proteins. En Stroev EZ, Makarova VG (eds): Laboraotry Manual in Biochemistry, 1 Ed. Editorial Mir Publishers Moscow (Mosc, Rusia), pp. 30 64.