28.

Protenas
Isaac Tnez Fiana
Departamento de Bioqumica y Biologa Molecular, Facultad de Medicina, Universidad de Crdoba, Avda. Menndez Pidal s/n, 14004 Crdoba

RESUMEN

La cuantificacin de protenas presentes en los medios biolgicos (sangre, orina, lquido cefalorraqudeo) es utilizada como prueba complementaria para ayuda en el diagnstico. Esta cuantificacin puede englobar al conjunto de protenas, como es el caso de la proteinemia, proteinuria y proteinorraquia, o referirse a protenas especficas, como albmina, Bence Jones, -antitripsina, ceruloplasmina, etc. El presente texto tiene como objetivo exponer los conceptos bsicos sobre estas molculas, sus diferentes reacciones qumicas, as como mostrarnos su implicacin en la bioqumica clnica y en la medicina. Palabras Clave: Protenas, estructura, funciones, proteinuria, proteinemia

1. INTRODUCCIN Y OBJETIVOS Las protenas son polmeros complejos de aminocidos que producen las clulas vivas. Cada forma de vida se define en gran parte por las protenas que produce. Cada protena est formada por 20 aminocidos en diversas cantidades y secuencias (aminocidos proteicos). Todas las protenas contienen carbono, hidrgeno, oxgeno, azufre y nitrgeno. Dentro de los aminocidos existen ocho esenciales: valina, leucina, isoleucina, fenilalanina, triptofano, treonina, metionina y lisina, que no pueden ser sintetizados y deben ser incorporados por la dieta. Los aminocidos presentan caracterstica anfotrica, pueden comportarse como cidos o bases. As, cuando ambos centros (cido y bsico) se encuentran ionizados de forma simultnea, el aminocido adopta la forma de in dipolar o zwitterion. Cada aminocido tiene un pH en el que no experimenta carga neta, este punto se denomina punto isoelctrico (pI). Las protenas pueden alcanzar diferentes niveles de configuracin desde su estructura bsica a la funcional: Primaria Secundaria Terciaria Cuaternaria Quinquenaria

Los objetivos perseguidos sern definir y describir algunas de las propiedades y funciones de las protenas, resaltando aquellas que pueden presentar una especial relevancia en la clnica mdica cotidiana. Tambin, se pretende realizar un acercamiento a los procedimientos bioqumicos existentes para la tipificacin y cuantificacin de las protenas y a la participacin de stas en procesos fisiopatolgicos. 1.1. Metabolismo La digestin de protenas se inicia en el estmago, inmediatamente despus de la ingestin, por accin de las secreciones gstricas, incluyendo el cido clorhdrico y la pepsina. El cido desnaturaliza y rompe los enlaces de la estructura secundaria, terciaria y cuaternaria, exponiendo los enlaces peptdicos a la accin de la pepsina, que es liberada como pepsingeno y activada por el cido clorhdrica a su forma de pepsina. A medida que el polipptido pasa al intestino delgado el pH cambia, hacindose alcalino e inactivando a la pepsina. El pncreas, por su parte, secreta y libera zimgenos (precursores inactivos o proenzimas) denominados tripsingeno, quimotripsingeno, proelastasa y procarboxipeptidas al intestino delgado. En este tramo de tracto digestivo, los zimgenos son activados a: tripsina, quimotripsina, elastasa y carboxipeptidasa. Una vez finalizada la digestin, los aminocidos libres se absorben a travs de la pared intestinal, proceso que requiere de un transporte activo y un gasto energtico. En un proceso similar a la digestin, las protenas de las clulas vivas se degradan constantemente y se resintetizan. Este proceso denominado recambio de protenas es utilizado por el 1-2 % de las protenas totales del organismo diariamente. Han sido observadas altas tasas de recambio en los lactantes y durante periodos de desarrollo acelerado. El exceso de aminocidos que se consume durante la dieta o se produce durante el recambio de protenas, sufre la eliminacin de su grupo amino (por enzimas especficas para cada aminocido). Asimismo, el amoniaco que se produce por la desaminacin oxidativa es transformado en urea en el hgado y posteriormente excretado al exterior a travs del sistema uro-excretor. La cadena de carbonos restante es transformada en grasa o utilizada para producir energa mediante procesos anlogos a los utilizados en el metabolismo de los hidratos de carbono. El metabolismo de las protenas se encuentra regulado de forma parcial por diferentes hormonas: Tiroxina Triyodotironina Cortisol Aldosterona Somatotropina Hormona del (GH)

crecimiento

1.2. Procesos analticos generales de las protenas Las protenas pueden ser estudiadas por diversos y muy diferentes mtodos analticos, algunos de los cuales se citan a continuacin: Turbidimetra Nefelometra Electroforesis Electroforesis bidimensinal Electroforesis capilar Cromatografa Enfoque isoelctrico Inmunoelectroforesis SDS PAGE

1.3. Aplicaciones clnicas Las protenas que se analizan con mayor frecuencia son las plasmticas. Sin embargo, tambin es posible analizarlas en otros lquidos del organismo: Orina Lquido cefalorraqudeo Lquido Pleural Etc.

La mayora de las protenas plasmticas son sintetizadas en el hgado y la principal excepcin son las inmunoglobulinas, que son producidas por las clulas plasmticas. 1.4. Protenas sanguneas 1.4.1. Protenas totales Se miden en suero como parte de casi todos los anlisis de qumica sangunea. Su rango de referencia es de 6,4 a 8,2 g/dL. Su funcin es mantener la presin osmtica coloidal del plasma. Esta presin evita las prdidas de lquidos hacia los tejidos. El contenido en protenas totales del suero depende del estado nutricional, funcionamiento heptico, funcionamiento renal, errores metablicos y afecciones como mieloma mltiple. La deshidratacin hace que todas las fracciones de protenas aumente dando lugar a hiperproteinemia. La deshidratacin puede ser resultado del descenso en el consumo o aumento de la prdida de lquidos en enfermedades como el mal de Addison, acidosis diabtica, diarrea grave o deshidratacin por exposicin a altas temperaturas. La hipoproteinemia se debe a un aumento de las prdidas proteicas o a un bajo consumo de protenas por inanicin o malabsorcin. Aumento de prdidas: sndrome nefrtico (prdida de albmina a travs de los tmulos renales daados), hemorragias por traumatismos o extensas quemaduras. 1.4.2. Albmina

Constituye ms de la mitad de todas las protenas sricas y gran parte de la presin onctica depende de ella. Transporta sustancias menos solubles como cidos grasos, bilirrubina, hormonas, calcio, metales, frmacos y vitaminas. Su concentracin de de 3,4- 5,0 g/dL. Sufre una reduccin en procesos como afecciones hepticas, glomerulonefritis o nefrosis, afectaciones gastrointestinales e inanicin. Tambin existe analbuminemia hereditaria, aunque se trata de un proceso poco comn. Por su parte, su aumento puede ser indicativo de deshidratacin. 1.4.3. Alfa-1-antitripsina Tambin llamada alfa-1-antiproteasa. Su funcin es inactivar proteasas como las elastasas y colagenasas. Mediante este proceso evita la descomposicin del tejido conjuntivo. Su deficiencia provoca alteraciones hepticas en el lactante y enfisema en pacientes de 20 a 30 aos. Se encuentra elevada en infecciones, infarto de miocardio, desarrollo de tumores, intervenciones quirrgicas o traumatismos. 1.4.4. Ceruloplasmina
Protena transportadora del cobre. Presenta un color ligeramente azulado. Sus concentraciones pueden encontrarse elevadas durante procesos inflamatorios, cirrosis, leucemias agudas, enfermedad de Hodking y artritis reumatoide. Tambin se eleva durante el embarazo y con los anticonceptivos. Por el contrario,

sus concentraciones se reducen en procesos como desnutricin y hepatitis crnica. Se encuentra ntimamente relacionada con la enfermedad de Wilson, donde su dficit provoca cmulos txicos de cobre en hgado, cerebro, rin y eritrocitos. 1.4.5. Transferrina Protena encargada del transporte de hierro. Se encuentra disminuida en procesos como quemaduras graves, infecciones, neoplasias, afecciones hepticas y renales y en la transferrinemia hereditaria. Se eleva durante el embarazo, debido a la mayor demanda de hierro, y cuando se utilizan los estrgenos. 1.4.6. Protena C reactiva Denominada as por su reaccin con el polisacrido C de la pared celular de los neumococos. Se encuentra elevada en infecciones, daos agudos o necrosis celular asociada con infarto y en enfermedades malignas. 1.4.7. Fibringeno

Se fabrica en el hgado. Sirve de sustrato para la trombina, que es una enzima de coagulacin. Se reduce en la coagulacin intravascular diseminada (CID), afecciones hepticas o en la afibrinogenemias hereditarias. 1.4.8. Inmunoglobulinas Son el principal grupo de protenas sricas no producidas en el hgado. Existen diferentes tipos: Ig G Ig A Ig M Ig D Ig E

La mayor parte de ellas alcanza sus tasas completas en torno a los 16 aos de edad. 1.5. Protenas en otros lquidos 1.5.1. Orina Habitualmente no se aprecian protenas en la orina. Cuando aparecen protenas en la orina (proteinuria) generalmente son albminas y si persiste la albuminuria es indicativa de afectacin renal. 1.5.2. Lquido cefalorraqudeo Los niveles de protenas en este medio suelen ser bajos (15-45 mg/dL). stos se elevan en trastornos como traumatismos, neoplasias, infecciones y esclerosis mltiple. 1.6. Determinacin cuantitativa de protenas 1.6.1. Prueba de Biuret Basada en la formacin de un complejo de color magenta con el CuSO4 en un medio alcalino. Reacciona con compuestos que contienen dos o ms enlaces peptdicos. 1.6.2. Reaccin de Folin-Ciocalteau Basado en la formacin de un color a consecuencia de la formacin de un complejo de cobre y la reduccin de fosfomolibdato y fosfowolframato presente en el reactivo. Reacciona con compuestos fenlicos tales como la tirosina.

1.6.3. Reaccin de Bradford Basado en la reaccin con Commassie Brillant Blue G-250 en un mdico de cido fosfrico y metanol. Su reaccin produce cambios en la intensidad de coloracin que pueden ser ledos entre 465 y 595 nm.

2. LISTADO DEL MATERIAL NECESARIO cido fosfrico Agua destilada Bao mara Calculadora Commassie Brillant Blue G-250 Cubeta de vidrio Espectrofotometra Etanol Gradillas Hidrxido sdico Pipetas 1 5 mL Puntas desechables Sulfato cprico Tubos de ensayo Vasos de precipitado Yoduro potsico

3. PROTOCOLOS A REALIZAR 3.1. Mtodo de Biuret Reactivos Tubo N Patrn (Estndar) Agua B 0 mL 1 mL 1 0,1 mL 0.9 mL 2 0,5 mL 0.5 mL 3 1 mL 0 M1 (Muestra) 1 mL 0 M2 (Muestra) 1 mL 0 Solucin patrn de protenas 20 mg/mL. Leer a 545 nm de .

Biuret 3 mL 3 mL 3 mL 3 mL 3 mL 3 mL

3.2. Mtodo de Bradford Reactivos Tubo N Patrn (Estndar) B 0 mL 1 0,1 mL 2 0,5 mL 3 1 mL M1 (Muestra) 1 mL M2 (Muestra) 1 mL Solucin patrn de protenas 0,1 mg/mL Preguntas: a. Representar la curva patrn b. Calcular la concentracin de protenas en las muestras M1 y M2 c. Calcular el coeficiente de extincin 3.3. Caso clnico Mujer de 65 aos de edad que consulta al mdico de urgencias por insuficiencia respiratoria. ste en la historia clnica recoge: Antecedentes de disnea progresiva durante 7 aos No fuma No bebe En el examen fsico se aprecia: Lechos ungueales y mucosas cianticas

Agua 1 mL 0,9 mL 0,5 mL 0 0 0

Bradford 3 mL 3 mL 3 mL 3 mL 3 mL 3 mL

Se indica y realiza anlisis de bioqumica sangunea y hematimetra, resaltando los siguientes datos de inters: Recuento de leucocitos Recuento de eritrocitos Hematocrito Hemoglobina Protenas totales Albmina Bilirrubina AST ALP BUN 7000 / mm3 7,0 millones/mm3 60% 21 g/dL 7,3 g/dL 5,6 g/dL 0,5 mg/dL 24 U/L 30 U/L 13 mg/dL (4300 10800 /mm3) (4,2 5,9 millones/mm3) (43-52%) (13 18 g/dL) (6-8,4 g/dL) (3,5-5,8 g/dL) (0,1-1 mg/dL) (7 27 U/L) (13-39 U/L) (5-29 mg/dL)

Gases: pO2 pCO2 pH Preguntas:

63 mmHg 72 mmHg 7,28

(80-90 mmHg) (35-45 mmHg) (7,35-7,45)

1. Identifique las observaciones anormales de laboratorio y otros signos o sntomas de anormalidad 2. Clasifique el desequilibrio cido-base Acidosis respiratoria. Debido a falta de intercambio gaseoso 3. Explique el incremento de la masa de los eritrocitos La reduccin de la tensin de O2 provoca una respuesta en el organismo que produce ms eritrocitos (estimulacin de la eritropoyesis) 4. Qu valores de laboratorio indican que este paciente no tiene sndrome nefrtico? Valores normales de protenas totales, albmina y nitrgeno ureico sanguneo 4. BIBLIOGRAFA RECOMENDADA Borque de Larrea L, Gonzlez de Buitrago JM (1998): Protenas del plasma sanguneo. En Gonzlez de Buitrago JM, Arilla E, Rodrguez-Segade M, Snchez A (eds): Bioqumica Clnica, 1 Ed. Editorial Mc Graw-Hill Interamericana (Madrid, Espaa), pp. 191 204. Christensen SE (1995): Protenas. En Anderson SC, Cockayne (eds): Qumica Clnica, 1 Ed. Editorial Interamericana McGraw-Hill (Mxico D.F., Mxico), pp. 190 212. DOcon MD, Garca MJ, Vicente JC (1998): Estudio general del metabolismo de las protenas. En DOcon MC, Garca MJ, Vicente JC: Fundamentos y Tcnicas de Anlisis Bioqumico, 1 Ed. Editorial Paraninfo (Madrid, Espaa), pp. 89 100. Muoz E (1988): determinacin cuantitativa de protenas. En Lozano JA, Tudelo J (eds): Prcticas de Bioqumica. Experimentacin y Simulacin, 1 Ed. Editorial Sntesis (Madrid, Espaa), pp. 101 102.

ANEXO I. REACTIVOS Biuret CuSO4 1,5 g Tartrato sdico potsico 6g NaOH 30 g IK 1 g Hasta 1L de agua destilada

Bradford Commassie Brillant Blue G-250 10 mg 10 mL de cido fosfrico 88% 4,7 mL de etanol Agua destilada hasta 100 mL