26.

Aminocidos
Isaac Tnez Fiana
Departamento de Bioqumica y Biologa Molecular, Facultad de Medicina, Universidad de
Crdoba, Avda. Menndez Pidal s/n, 14004 Crdoba

RESUMEN

Veinte son los aminocidos constitutivos y piezas bsicas de las

protenas. stas son constituyentes esenciales de todos los organismos,
ejerciendo las funciones ms nobles y elevadas dentro de la clula. El
presente captulo tiene como objetivo principal exponernos conceptos
bsicos sobre estas unidades de las protenas y sus diferentes
reacciones qumicas, as como mostrarnos su implicacin en la patologa
mdica.
Palabras Clave: Aminoacidurias, reacciones coloreadas

1. INTRODUCCIN Y OBJETIVOS
Los aminocidos son las unidades constituyentes de las protenas,
biomolculas estas ltimas de inters en las organizaciones estructurales y
funcionales de clulas y tejidos. Tngase en cuenta que todas las enzimas,
fundamentales para las reacciones bioqumica, y todos los anticuerpos,
esenciales en los procesos de inmunidad, son protenas y se encuentran por
tanto constituidos por aminocidos.
La hidrlisis de protenas por los diferentes mtodos (cida, bsica o
enzimtica) proporciona 20 aminocidos (alanina, prolina, lisina, cido
asprtico, cido glutmico, asparagina, glutamina, histidina, glicina, serina,
valina, tirosina, triptofano, fenilalanina, treonina, isoleucina, leucina, cistena,
metionina y arginina) como constituyentes universales de las protenas. stos
se distribuyen en esenciales (fenilalanina, leucina, lisina, metionina, isoleucina,
treonina, triptfano y valina; aminocidos esenciales en nios, arginina e
histidina) que deben ser suministrados por la dieta, y los no esenciales.
Existen otros aminocidos no proteicos que aparecen en ciclos pero no
forman parte de la estructura proteica, como es el caso de la ornitina, citrulina,
3-metilhistidina, GABA, L-azaserina, homoserina, homocistena, etc. Se
conocen alrededor de 150.
Los aminocidos desde el punto de vista qumico son cidos orgnicos (RCOOH), portadores de un grupo amino (-NH2) y un radical variable R. Segn la
naturaleza del grupo R los aminocidos pueden ser clasificados en cuatro
grandes grupos: apolares, polares sin carga, aninicos y catinicos.

El objetivo del presente tema estar dirigido a clarificar los conceptos

relacionados con estas molculas, as como a entender su importancia clnica y
a realizar tcnicas destinadas a su identificacin.
1.2. Metabolismo de aminocidos y afecciones relacionadas
Una enfermedad gentica es una afeccin mrbida provocada por una
variacin del material gentico humano. La enfermedad se produce cuando se
lleva a cabo la mutacin en un solo gen en forma espontnea o hereditaria. Si
sta se expresa, el gen mutante da lugar a la sntesis de una protena anormal
o altera el nivel de produccin de una protena.
1.2.1. Aplicaciones Clnicas
Por definicin los errores congnitos del metabolismo incluyen defectos que
se encuentran en enzimas y que interrumpen vas fisiolgicas. Con esta
interrupcin, se siguen tres cursos:

Exceso de precursores txicos

Exceso de metabolitos txicos
Deficiencia de metabolitos esenciales

Los errores congnitos del metabolismo de aminocidos provocan

aminoaciduria o incremento de aminocidos en la orina. Las aminoaciduras son
renales o de desbordamiento:
* Aminoacidurias renales. Identificadas por tasas plasmticas normales de
aminocidos y elevacin de su presencia en orina. Este fenmeno se debe a
una reduccin en la capacidad de reabsorcin de los tmulos renales
* Aminoacidurias por desbordamiento. Elevacin de aminocidos en plasma y
en orina
Cistinuria. Los individuos excretan mayores cantidades de cistina, lisina,
arginina y ornitina. El defecto parece localizarse en la protena de transporte
que se encuentra en la membrana de ciertos tipos de clulas epiteliales.
La nica manifestacin de la enfermedad es la formacin de clculos renales
que se produce durante la niez y alcanza su mximo nivel en la tercera
dcada de la vida. Se trata de una aminoaciduria renal.
Cistinosis. Es la afectacin del almacenamiento de lisosomas que
generalmente se debe a un defecto en el proceso de transporte para el paso de
cistina a travs de las membranas del lisosoma. Se producen manifestaciones
sistmicas graves debido a los precipitados, que afectan a diversos rganos
(rin, hgado y bazo) as como a los tejidos de la mdula sea, ganglios

linfticos y crnea ocular. Se trata de una aminoacidura renal. Esta suele ser
una de las causas del sndrome de Fanconi.
Sndrome de Hartnup. Se encuentra incrementada la excrecin urinaria de
alanina, treonina, glutamina, serina, asparagina, valina, leucina, isoleucina,
fenilalanina, tirosina, triptofano, histidina y citrulina. Fenmeno que origina una
aminoaciduria renal.
Estos pacientes manifiestan erupciones escamosas de color rojizo que
aparecen durante la primera dcada de la vida. Tambin presentan
manifestaciones neurolgicas como dolor de cabeza, falta de concentracin,
debilidad de los miembros y ataxia. Se caracteriza por una aminoaciduria renal.
Fenilcetonuria. Grupo de afecciones caracterizadas por defectos en la
conversin de fenilalanina a tirosina, debidos a la deficiencia de la enzima
fenilalanina hidroxilasa. Lo anterior causa la acumulacin de elevadas
concentraciones de fenilalanina y sus metabolitos, los cidos fenilctico,
fenilpirvico y fenilactico. Se trata de un trastorno hereditario de carcter
autonmico recesivo. Se diagnostica durante la lactancia y produce (en caso de
no recibir tratamiento a tiempo) retraso mental grave. Los sntomas tempranos
que pueden ser observados:

Dificultad para ingestin de alimento

Vmito
Retraso en el desarrollo
Hipopigmentacin

Al tercer-cuarto da de vida extrauterina los niveles sricos de fenilalanina

comienzan a incrementar. El aumento en fenilactico provoca que el sudor y la
orina tengan un olor a ratn o a rancio. Si la enfermedad no se trata a tiempo
se manifiestan los trastornos neurolgicos a los tres meses y alcanza su
mxima expresin a los tres aos de edad. La restriccin diettica de
fenilalanina evita el retraso mental. En general, los anlisis neonatales se llevan
a cabo mediante la prueba de Guthrie, que es un anlisis microbiolgico
semicuantitativo. Esta prueba se basa en que la presencia de fenilalanina evita
la inhibicin de beta-2-tienilalanina en la bacteria Bacillus subtilis, fenmeno
que permite el crecimiento de sta. La sangre del recin nacido se obtiene del
taln y se coloca sobre papel de filtro. El disco se pone en medio de cultivo que
contiene beta-2-tienilalanina inoculada con esporas de B. subtilis. Tras una
noche de incubacin se comparan las zonas de crecimiento con discos control.
Si la prueba de Guthrie indica un aumento de fenilalanina, se realiza una
prueba de confirmacin. La aminoaciduria provocada por este proceso es de
desbordamiento.
Tirosinosis y Tirosinemia. Tirosinosis. Caracterizada por elevados niveles
de tirosina en la sangre y en la orina. Los principales sntomas clnicos se
encuentran relacionados con dao heptico y renal. La lesin heptica conduce
a un fallo agudo o a un estado crnico que origina una cirrosis, por su parte, la
disfuncin renal ocasiona el sndrome de Fanconi.

Tirosinemia. Caracterizada por la precipitacin de cristales de tirosina que

conducen a la inflamacin y posterior lesin a nivel ocular y cutneo. En ciertos
casos ha sido documento un retraso mental.
En ambas situaciones se origina una aminoaciduria por desbordamiento.
Alcaptonuria. Caracterizada por excrecin urinaria de cido homogentsico.
La nica manifestacin de la alcaptonuria en nios pequeos es el fenmeno
de que la orina se oscurece al contacto con el aire, incorporacin de un lcali y
exposicin a la luz solar. Esta situacin persiste durante toda la vida y en
general no produce consecuencias aparentes. Induce una aminoacidura de
desbordamiento.
Enfermedad de la orina color maple (olor a jarabe de arce, miel de
maple).
Se trata de una cetoacidura de -cetocidos e hidroxicidos procedentes de
aminocidos con cadenas ramificadas (leucina, Isoleucina, valina).
En caso de no ser detectada o no poner el tratamiento temprano produce
dao cerebral grave y generalmente la muerte durante el curso del primer ao
de vida. Los sntomas que pueden observarse son entre otros: hipoglucemia,
acidosis, letargo, falta de apetito, vmito y convulsiones. Conduce a una
aminoacidura por desbordamiento.
Homocistinuria. Caracterizada por el aumento de homocistina en el
organismo. Los sntomas se manifiestan tras el nacimiento, uno de los ms
frecuentes es la dislocacin de la lente ocular. Tambin, se presentan
anormalidades mentales y en su conjunto los diferentes daos asociados a
este tipo de trastorno conducen a la muerte. La aminoacidura observada en
este trastorno es del tipo de desbordamiento.
Albinismo. Se debe a la ausencia de la enzima tirosinasa que permite el
paso de tirosina a melanina. Induce una aminoacidura de desbordamiento.

3. LISTADO DEL MATERIAL MATERIAL NECESARIO

Agua destilada
Arginina
Asprtico
Bao Mara
Calculadora
Cistena
Lisina
Ninhidrina
Pipetas 1 5 mL
Prolina
Tubos de ensayo

4. PROTOCOLOS A REALIZAR
4.1. Reacciones de los aminocidos
4.1.1. Prueba de la ninhidrina
Reaccin para la deteccin de aminocidos, actualmente acoplada a
sistemas de valoracin automtica. La ninhidrina (hidrato de tricetohidrindeno)
es un oxidante energtico que por una desaminacin oxidativa de los
aminocidos conduce a la formacin del aldehdo correspondiente, con
liberacin de amoniaco y gas carbnico y formacin de la ninhidrina reducida o
hidrindrantina. La molcula de hidridantina, en presencia de otra de ninhidrina,
condensa a travs del amoniaco produciendo una estructura denominada
indanona o prpura de Ruhemann, manifestando un color rojizo, excepto para
la prolina, hidroxiprolina y en menor medida para la histidina. Presenta su
mximo de absorbancia a los 570 nm, exceptuando los tres aminocidos
reseados anteriormente.

Aadir 2ml de:

* Lisina 0,5%
* Asprtico 0,5%
* Prolina 0,5%

Incorporar 2 ml de ninhidrina 0,2% en etanol 95%

Calentar al bao mara
Observar los resultados

4.1.2. Prueba del cido nitroso

Tomar 1 ml de:
* Problema
* Patrn al 1%
* Blanco de agua destilada

Incorporar 0,5 ml de cido clorhdrico concentrado.

Aadir 1 ml de nitrito sdico al 5%
Observar los cambios

Nota: Si se desprenden burbujas indica presencia de grupos amino libres y

por lo tanto la reaccin es positiva.
4.1.3. Prueba de Millon
Ensayo especfico para los aminocidos fenlicos (tirosina). Esta reaccin da
una tonalidad rosa o un precipitado rosa.

Poner 3 mL de tirosina 0,02%

Aadir 4 gotas de reactivo de Millon (10 g de mercurio en 10 mL de

cido ntrico fumante. Se le incorpora 40 ml de agua y se deja reposar.
Finalmente se decanta.)

Nota: El proceso debe realizarse en campana con extractor

Calentar en el bao mara

Observar el cambio de coloracin

4.1.4. Prueba de Folin

Incorporar 1 mL de la solucin problema, patrn al 1% y blanco de agua

destilada
Aadir 0,5 mL de 1,2-naftoquinon-4-sulfonato sdico al 0,2%
Aadir 1 mL de hidrxido sdico al 10%.
Calentar al bao mara a 70-80 C durante 5 minutos

Si aparece un color anaranjado o rojo es indicativo de la presencia de

aminocidos.
4.1.5. Prueba de Sullivan

Aadir 0,5 mL de la solucin problema, patrn al 1% y blanco de agua

destilada
Aadir 0,5 mL de cianuro sdico al 5%

Nota: Cuidado es extremadamente venenoso

Aadir 0,5 mL de 1,2-naftoquinon-4-sulfonato sdico al 0.5% recin

preparado
Incorporar 2,5 mL de sulfito sdico al 10% en hidrxido sdico al 2%
Aadir 0,5 mL de tiosulfato sdico al 2%

Si aparece una coloracin roja, la reaccin es positiva e indicativa de la

presencia de cistena o cistina.
4.1.6. Prueba del azufre

Tomar 3 mL de cistena 0,1%

Incorporar 1 mL de NaOH al 40%
Poner 2 3 gotas de una solucin de acetato de plomo
Calentar al bao mara durante 3 minutos, hasta ebullicin.

Si aparece una coloracin negra en el precipitado, la reaccin ser positiva,

indicando la presencia de azufre. En la presente situacin, azufre procede de la
cistena.

4.1.7. Prueba de Sakaguchi

Esta prueba es positiva para compuestos que contengan el grupo guanidinio
como la arginina. El reactivo que se utiliza contiene -naftol e hipoclorito
sdico, en medio alcalino. La aparicin de una coloracin roja es indicativo de
una reaccin positiva.

Poner 5 mL de arginina al 0,02%

Aadir 1 mL de NaOH 2M
Aadir 1 mL de -naftol al 0,02% en etanol
Enfriar en hielo
Aadir 1 mL de disolucin alcalina de hipoclorito sdico
Esperar 30 segundos
Aadir 1 mL de disolucin de urea
Observar los cambios

4.1.8. Prueba de Jaff

Poner 1 mL de solucin de creatinina al 0,01% y un blanco

Aadir 1 ml de cido pcrico (preparado inmediatamente antes de ser
utilizado mezclando 5:1 de solucin acuosa saturada de cido pcrico e
hidrxido sdico al 10%)

Si acontece la aparicin de una coloracin roja, se tratar de una prueba

positiva para la creatinina. Puede ser leda a 520 nm, detectndose hasta 5
g/mL.
4.1.9. Prueba de Hopkin-Cole
Implica la reaccin del grupo indol del triptofano con el cido glioxlico, en
presencia de cido sulfrico concentrado.

Tomar 3 mL de triptofano 0,02%

Aadir 1 mL de reactivo de Hopkin-Cole (10 g de magnesio ms agua
hasta que ste quede cubierto. Mantener lentamente en agitacin
continua, aadir 250 mL de disolucin saturada y fra de cido oxlico.
Filtrar y acidificar con cido actico diluido y enrasar con agua hasta 1 L)
Aadir el contenido del tubo a otro que contenga 1 mL de cido sulfrico
concentrado

Si la reaccin es positiva se colorear la zona de contacto.

4.2. Caso clnico
Un beb varn de 5 meses es revisado en el Servicio de Pediatra
aprecindose:

Retraso en el desarrollo
Piel blanca

Rubio
Fotosensibilidad

En el reconocimiento el pediatra decide realizar una bioqumica sangunea,

destacando los siguientes resultados:
pH: 7,13
pCO2: 24 mm Hg
Creatinina 4,2 mg/dl
Bicarbonato: 12 mmol/l
y de orina apreciando:
Glucosuria
Proteinuria
Preguntas:
1. Cules de los siguientes rganos est probablemente afectado?

Msculo
Corazn
Hgado
Riones

Riones
2. Qu aminoacidura se relaciona con ms frecuencia a este cuadro
clnico? y con qu proceso se suele correlacionar?
Cistinosis, Sndrome de Fanconi

6. BIBLIOGRAFA RECOMENDADA
Anderson SC (1995): Metabolismo de aminocidos y afecciones relacionadas.
En Anderson SC, Cockayne (Iniciales nombre?) (eds): Qumica Clnica, 1
Ed. Editorial Interamericana McGraw-Hill (Mxico D.F., Mxico), pp. 213
221.
Berezov TT, Korovkin BF (1992): Chemistry of Proteins. En Berezov TT,
Korovkin BF (eds): Biochemistry, 1 Ed. Editorial Mir Publishers Moscow
(Mosc, Rusia), pp. 19 64.
Cabanes J (1988): Propiedades qumicas y separacin de los aminocidos. En
Lozano JA, Tudela J (eds): Prcticas de Bioqumica. Experimentacin y
Simulacin, 1 Ed. Editorial Sntesis (Madrid, Espaa), pp. 8792.
Snchez A (1998): Alteraciones de la digestin de protenas y de la absorcin y
metabolismo de los aminocidos. En Gonzlez de Buitrago JM, Arilla E,

Rodrguez-Segade M, Snchez A (eds): Bioqumica Clnica, 1 Ed. Editorial

McGraw-Hill Interamericana (Madrid, Espaa), pp. 181190.
Stroev EZ, Makarova VG (1989): Proteins. En Stroev EZ, Makarova VG (eds):
Laboraotry Manual in Biochemistry, 1 Ed. Editorial Mir Publishers Moscow
(Mosc, Rusia), pp. 30 64.