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Pruebas de Sensibilidad Antimicrobiana

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Revista Médica del Hospital Nacional de Niños Dr. Carlos Sáenz Herrera - Pruebas ...

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Revista Médica del Hospital Nacional de Niños Dr. Carlos Sáenz Herrera
versión impresa ISSN 1017-8546

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Rev. méd. Hosp. Nac. Niños (Costa Rica) v.34 supl. San José 1999
Pruebas de sensibilidad antimicrobiana Métodología de laboratorio

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Dr. Marco Luis Herrera*

Consideraciones Generales La prueba de sensibilidad antimicrobiana es una de las tantas armas con las que contamos en el laboratorio para ayudar a los profesionales en medicina controlar los procesos infecciosos que se desarrolla en los pacientes(4).

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Pero para poder desarrollar todo el potencial con que se cuenta hay que cumplir con un requisito fundamental: es necesario lograr el aislamiento del agente productor del cuadro clínico mediante los cultivos correspondientes. Hay un axioma que no pierde actualidad y sobre el que es indispensable insistir: Primero cultivar y luego medicar. Antes de medicar (antibióticos) a un paciente, asegúrese de que ya se hayan recolectado las muestras para realizar los cultivos que requiere un buen diagnóstico. Esto asegurará hasta un máximo las posibilidades de aislar el agente etiológico. Contando ya con dicho agente el laboratorio puede hacer uso de las diferentes técnicas que se han desarrollado para guiar de la mejor manera posible al médico, en la escogencia del antibiótico a emplear en el control del proceso infeccioso. Como un comentario adicional, hay que recordar que muchas veces, lo que se observa in vitro no correspondiente a lo observado in vivo, razón por la cual, los señores clínicos deben poner especial atención en el seguimiento clínico de su paciente. La no concordancia entre los hallazgos en el laboratorio y la respuesta del paciente a la terapia antimicrobiana, tiene diferentes explicaciones, algunas de las cuales tienen relación con el comportamiento de los microorganismos y otras con el comportamiento individual de cada paciente. Un ejemplo para el primer caso es la producción en el paciente de enzimas inducidas durante el curso de una terapia antimicrobiana, enzimas que tienen la propiedad de inactivar el antibiótico sólo en el paciente(9). Por otra parte, siempre es conveniente revisar si realmente el paciente está ingiriendo el antibiótico como corresponde, si está siendo administrado en el plazo y en la concentración adecuada para ese paciente, sin olvidar la idiosincracia del mismo. La razón fundamental de una prueba de sensibilidad es la de realizar una predicción a través de una prueba in vitro, observar la respuesta del paciente a un determinado antibiótico, la evolución de la infección y detectar una resistencia relevante del organismo que está causando este proceso infeccioso(4). Hay aún muchos agentes microbianos para los cuales la escogencia de una terapia antimicrobiana continúa siendo empírica, porque estos agentes no han desarrollado resistencia contra los antibióticos(1). Por esta razón, la prueba de sensibilidad adquiere una mayor importancia para algunas especies bacterianas que no tienen una sensibilidad predecible. Ejemplos claros de este último tipo de microorganismos son: Staphylococcus sp., Enterococcus sp., Pseudomonas sp. y los miembros de la familia Enterobacteriaceae(4). Otros organismos donde la prueba de sensibilidad, sobre todo en los últimos años, ha adquirido una gran importancia son: Streptococus pneumoniae, Haemophilus influenzae, Neisseria meningitidis, Neisseria gonorrhoeae y Mycobacterium tuberculosis(4). Para efectuar las pruebas de sensibilidad, se cuenta con los siguientes métodos(4). A. B. C. D. Difusión en agar (Técnica de Bauer & Kirby) Dilución en agar Macrodilución en caldo Microdilución en caldo

http://www.scielo.sa.cr/scielo.php?pid=S1017-85461999000100010&script=sci_arttext

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se debe reportar 6 mm. también puede usarse solución salina al 0. ajustando el pH. y que realmente contengan la concentración del antibiótico que dice tener(16). El más conocido es el Müeller-Hinton ya sea en agar o en caldo. En ambos caos. puede producir una falsa resistencia. el cual se emplea en los métodos de difusión y de dilución enagar. ya que ese es el diámetro del disco. Epsilon test (E test) Métodos aumatizados Pruebas especiales. También cambios en el pH. discos de papel impreganados con una concentración conocida del antibiótico. Cualquiera que sea el método hay que controlar cada una de estas tres variables y cada una de ellas es importante a su manera. este pH debe ser correctamente regulado. un agar muy duro. puede producir falsa sensibilidad y a su vez.4 medido a temperatura ambiente y una vez solidificado el medio de cultivo. que sea polvo (no hidratado). los medios de cultivo deben ser lo más frescos posible. 2 y 7. haciendo un plateo y un conteo colonial con la finalidad de asegurarse de que se está preparando correctamente(16). se aplica sobre la superficie de una placa seca de agar Müeller-Hinton que tenga un pH entre 7. http://www. principalmente para lograr una mejor detección de la resistencia a la oxacilina y a la vancomicina(16). preparaciones farmacéuticas del antibiótico o tiras de plástico con una matriz propia y una gradiente decreciente del antibiótico determinado. Luego. no se debe reportar Omm. Esto significa que debemos estandarizar dicho inóculo(16). es indispensable que sea fresca (un periodo de incubación no mayor de 24 horas) y que haya sido crecida en un medio de cultivo no inhibitorio(16).4% o un caldo nutritivo(1. para la técnica de la difusión en agar. En cuanto a la cepa bacteriana. para los cuales se recomienda una incubación de 24 horas. además. intermedio o resistente. puede utilizarse el medio de cultivo conocido como agar chocolate con una base de GC y enriquecido con Isovitalex al 2%(1). Lo importante es que estas diferentes presentaciones del antibiótico estén en la mejor condición posible. Cada vez que se va a preparar el medio de cultivo. Sin que importe el método a emplear. A la hora de preparar el medio de cultivo. Según el método a emplear y según el agente a estudiar.scielo. es cualitativa y sus resultados se pueden interpretar únicamente como sensible. que se respete la cadena de frío. pero también un agar con más de 4 mm de profundidad puede producir una disminución en la migración (difusión) del antibiótico con la consiguiente falsa resistencia.. Carlos Sáenz Herrera . F. Un agar delgado. Si se emplean placas de petri de 100 mm de diámetro. cada cierto tiempo. pueden producir falsa resistencia o falsa sensibilidad al incidir en la polaridad de los antibióticos. Página 2 de 7 E. Vamos a discutir en primer lugar lo concerniente al medio de cultivo. las consideraciones son las siguientes: Podemos tener cuatro tipos de posibilidades.. La cepa se debe rayar sobre la superficie del medio de forma tal que se logre un crecimiento confluente(16). en un plazo no mayor de 15 minutos. Esta estandarización puede realizarse utilizando el estándar de McFarlane o utilizando un nefelómetro. estos parámetros deben ser aún más claramente controlados.5 de McFarlane. se procede a colocar los discos o las pastillas con el antibiótico. al incidir en un cambio en la velocidad y distancia de la difunsión del antibiótico(16). 16). Un agar muy suave. permite una mejor difusión de los antibióticos produciendo una falsa sensibilidad. Esta técnica. Otro punto de gran importancia es la profundidad del agar. el antibiótico a utilizar y la cepa bacteriana a probar. hay que asegurarse que el polvo esté en buenas condiciones. Cada plato es observado en una luz indirecta y cada halo de inhibición es medido utilizando un caliper o en su defecto una regla graduada en la forma adecuada. A-Disfusión en agar (Técnica de Bauer & Kirby) La técnica de difusión en agar(16). Además. el número máximo de discos a colocar es de 5(1.Revista Médica del Hospital Nacional de Niños Dr. En cuanto al antibiótico. Siempre se debe ajustar la concentración del inóculo de la cepa a probar. hay tres facetas o pasos que se deben considerar: el medio de cultivo a emplear. G. O los integrantes de la familia Enterobacteriaceae. y asegurnádose de que la concentración del agar sea la correcta. Para la Neisseria gonorrhoeae. para la detección de la sensibilidad del Streptococus pneumoniae (1).cr/scielo. La cepa se debe rayar sobre la superficie del medio de solidificado el medio de cultivo. la cual debe ser exactamente de 4 mm. Para la preparación del inóculo lo más recomendable es usar aguar destilada estéril. pastillas con una concentración conocida del antibiótico. Una vez realizado esto. la placa se incuba a 35ºC en aire ambiente y por un periodo no mayor a las 18 horas excepto para los aislamientos de Staphylococus sp y Enterococcus sp. que no se humedezcan. revisar el inóculo. hay varios medios de cultivo que se pueden utilizar.5 de McFarlane(16). Otro medio de cultivo usado en especial para la prueba de sensibilidad del Haemophilus influenzae es el HTM (Haemophilus Test Media).php?pid=S1017-85461999000100010&script=sci_arttext 19/04/2013 . y está diseñada específicamente para bacterias de crecimiento rápido domo los Staphylococcus sp. el reforzado con sangre de carnero al 5%.sa. el inóculo bacteriano llevado a una concentración igual a la del estándar 0. la estandarización se hace hasta el estándar 0. con no más de 7 días de preparados y siempre deben ser guardados en bolsas plásticas selladas y a 4°C(16). Todos estos medios de cultivo deben ser preparados de la mejor manera posible. En especial.16). Es conveniente. sin cambios de color y de consistencia y por supuesto.Pruebas . En el caso de que no se presente un halo.

por lo tanto su halo.scielo. en el caso de una cepa sensible tendrá un diámetro muy amplio. Otra desvetaja y la más importante.25. Este es una placa de metal de 32 pozos y una lámina de metal con 32 proyecciones que toman. se emplea un inoculador conocido como el inoculador de Steer. 4. o sea. Influenzae (20 a 24 horas). para el caso del Streptococcus pneumoniae. si el halo encontrado es menor de 20 mm. 2. que tiene una molécula muy grande y muy hidrofóbica. la dilución en tubo y la microtitulación. Para inocular el medio de cultivo. Organismos con Haemophilus influenzae. aun cuando.php?pid=S1017-85461999000100010&script=sci_arttext 19/04/2013 . Si la cepa logra crecer en la superficie del medio de cultivo. lo recomendado es poner a crecer al organismo en un agar chocolate suplementado. La placa se incuba a 35ºC por 18 a 24 horas y se revisa el crecimiento. 8). se preparan tubos con la concentración definida de antibiótico y se le agrega a cada tubo una cantidad conocida del agar Müeller-Hinton. por el contrario. Cada antibiótico tiene su halo de inhibición específico y éste depende del tamaño de la molécula del antibiótico y su polaridad. manteniendo el resto de condiciones igual (35ºC y 5 a 7% de CO2)(1). el inóculo bacteriano y el antibiótico. tendrá mucha capacidad para migrar. 7. sólo porque el primero tenga un halo de inhibición mucho mayor(16).16).006 ug/ml(1). Para Haemophilus influenzae. presenta varias ventajas como: a. ante todo presenta el problema de la contaminación y la dificultad para detectarla. es que esta técnica debe ser modificada para poderla emplear en organismos fastidiosos o de crecimiento lento(1. un antibiótico con un peso molecular bajo como la penicilina. ésta es más sensible a la penicilina que a la vancomicina. La técnica de difución en agar.5. Se han desarrollado varios métodos en este campo como son las técnicas de la dilución en agar. la microtitulación y el E test (16). Streptococcus pneumoniae y Moraxella catarrhalis.125. depende del antibiótico y del tipo de cepa a probar. De esta manera. En especial.Pruebas . cada una.sa. Para esto se hace una CMI.(16) En la técnica de la dilución en agar. es evidente la necesidad de contar con metodología que solvente ese problema. si el halo de inhibición es mayor de 20 mm. Carlos Sáenz Herrera . Página 3 de 7 Los diámetros alrededor de cada disco son medidos y su interpretación se basa en guías publicadas cada cierto tiempo. 8. La dilución en tubo sigue siendo el estándar dorado de las pruebas de sensibilidad. preparar el inóculo en un caldo de Müeller-Hinton o solución salina estéril al 0. es la técnica de referencia. La escogencia de la concentración en la que se inicia el gradiente. intermedio o resistente al antibiótico testado(1.. 0. 0. de esta manera.Revista Médica del Hospital Nacional de Niños Dr. la incubación debe ser un poco más prolongada que para H. siempre contra el control positivo. 0. Para estos agentes fastidiosos. e. existen guías propias de la NCCLS que se emplean para conocer si las cepas se reportan como sensible. es fácil de efectuar y de gran reproducibilidad bajo precio no requiere equipo especial sus resultados son fácilmente interpretados por los clínicos es muy flexible a la hora de escoger los antibióticos a probar(16). 0. En el caso de la vancomicina. ya sea por microtitulación o por la técnica del E test(1. 16). http://www. Por el contrario. intermedio o resistente(7). 1. 4. 16. por la NCCLS (National Committee for Clinical Laboratory Standards) y el organismo es reportado como sensible. que sirve como control positivo de crecimiento. En éstas lo que se pretende es hacer un gradiente decreciente de la concentración de un antibiótico dado y probarlo contra un inóculo bacteriano estandarizado. c. Una vez incubado por 24 horas. B-Método de Dilución en agar Siendo la técnica de difusión en agar únicamente cualitativa. hay que controlar el medio de cultivo. b. Adicional a esto.cr/scielo. en el medio de cultivo a emplear. se reporta como sensible a esa concentración de antibiótico. Generalmente se inicia a una concentración de 128 ug/ml y se hacen diluciones dobles hasta obtener el gradiente decreciente en la concentración de antibiótico (64. d. Para Neisseria gonorrhoecae se debe utilizar agar base GC suplementado(4) y para Streptococcus pneumoniae agar sangre al 5% y que tenga Müeller-Hinton como base.. con una concentración mínima inhibidoria menor de 0. se inocula una placa de Müeller-Hinton sin antibiótico. su halo de inhibición será muy pequeño.9%. que para una cepa determinada. y teniendo en mente que en muchas oportunidades clínicas se hace necesario conocer con exactitud qué concentración de antibiótico es la necesaria para lograr controlar un proceso infeccioso dado. Neisseria meningitidis. necesitan de una técnica de difusión modifica. 32. Si. realizar la prueba de sensibilidad sobre el agar HTM e incubarlo a 35ºC por 16 a 18 horas en una atmósfera de 5 a 7% de CO2(1). lo recomendado es el empleo de un disco de oxacilina de 1 ug de potencia. 16). en la atmósfera de incubación y en la preparación del inóculo(1). este tubo se homogeniza y se chorrea en una placa de Petri vacía con lo que se logra una placa de agar Müeller-Hinton con el antibiótico diluido a una concentración determinada(16). no crece. De este tipo de técnicas podemos mencionar tres: la dilución es agar. 20 ul del inóculo estandarizado del agente y que se coloca sobre la superficie del agar con antibióticos. Para ambos. Dentro de sus desventajas está el hecho de que brinda sólo información cualitativa. Neisseria gonorrhoecae. modificación que se hace principalmente en el periodo de incubación. se considera que la cepa es sensible a la penicilina. se reporta como resistente a esa concentración del antibiótico.06 ug de droga activa)(16). la cepa se considera resistente y debe ser confirmado realizando una prueba más específica que nos informe hasta dónde llega esa concentración(1. en las de dilución. no se puede afirmar. Al igual que la técnica de difusión.

se extraen 10 ul y se inoculan en el medio de cultivo. La CMI será la concentración del último pozo en el cual no hay crecimiento. una arriba del punto de quiebra del antibiótico y otra debajo de este valor. C-Macrotitulación en tubo Esta técnica se deriva de la anterior.125 ug/ml. Generalmente la CMB es una o dos diluciones más alta que la CMI(16). una abajo y otra arriba del punto de quiebra. si la cepa a estudiar es un Haemophilus sp. pureza y crecimiento de todas las pruebas de sensibilidad. para un volumen final de 100 ul en ambos pozos(16). Sin embargo. y porque presenta el grave problema de la dificultad para detectar contaminaciones del medio de cultivo. E-E test interpretación de los http://www. esta técnica exige mucho trabajo técnico y es lenta para la resultados. en el primer pozo hemos puesto 50 ul de medio de cultivo. La cepa se prepara en las mismas condiciones de turbidez. de 96 pozos y un fondo en U(16). Esto nos indica lo necesario que es conocer con toda exactitud el número de ucf/ml del inóculo estandarizado.9% de las bacterias de un inóculo inicial. con tapa. colocamos 50 ul de la solución madre (en este ejemplo de 512 ug/ml) en el primer pozo y realizamos diluciones dobles hasta el pozo 10 del cual eliminamos 50 ul. Luego de este periodo de incubación. Por supuesto. esta técnica consume una gran cantidad de tiempo y trabajo. por eso se ha empleado otra técnica derivada de ésta: la microtitulación(16). El punto de quiebra es un valor matemático. si crece sólo en la concentración bajo el punto de quiebra. 16). D-Microtitulación Aquí empleamos unas placas plásticas. Luego se colocan 50 ul de la solución madre del antibiótico. siempre para un volumen hasta el momento de 50 ul en cada pozo(16). Para obtener la CMB. se puede obtener la Concentración Mínima Inhibitoria (CMI). La placa se incuba a 35ºC por 18 a 24 horas. se cuentan las ufc. cubierta.sa.. sería de 128 ug. la técnica que se usa es la misma de la microdilución y la interpretación es la misma también(16). se hace una serie de diluciones del inóculo. que expresa un punto o concentración arriba del cual la cepa se debe interpretar como resistente al antibiótico(16). estériles. La CMB es la mínima concentración de un antibiótico que mata el 99. Carlos Sáenz Herrera . se incuba y luego se cuentan las colonias que crecen y esto se refiere al conteo bacteriano del inóculo inicial. usando como referencia el control positivo en el cual sí hay crecimiento. Basándose en este criterio.. el pozo 2 tendrá una concentración de 64 ug. El medio de cultivo empleado es Müeller-Hinton en caldo o el medio caldo HTM. la que se define como la mínima concentración de antibiótico que inhibe el crecimiento de una cepa bacteriana determinada(16). El control positivo tiene medio de cultivo más el inóculo bacteriano y el control negativo tiene medio de cultivo y antibiótico. la cepa es intermedia y sensible si no crece en ninguna. hace que esta técnica sea muy engorrosa por lo que en realidad se utilizan sólo dos diluciones. teniendo en cuenta que estamos haciendo una dilución 1: 2. Preparar toda una gradiente de medios de cultivo con una concentración decreciente de antibiótico.Pruebas . el siguiente de 16 y así hasta el pozo 10 que tendría una concentración final de 0. hemos sacado 50 ul y hemos colocado 50 ul del inóculo bacteriano. Cada placa permite realizar una CMI de un antibiótico a ocho cepas diferentes. El primer paso para proceder al montaje de una CMI/CMB utilizando la técnica de la microtitulación es colocar 50 ul del medio de cultivo en cada uno de los pozos de la placa a emplear(16). si la cepa crece en las dos concentraciones es resistente. ya sea con la tapa de la placa o con un plástico adhesivo permeable al oxígeno. el siguiente de 32. Para preparar las diferentes diluciones del antibiótico se parte de una solución madre que se debe diluir en las condiciones adecuadas para cada antibiótico. A un utilizando sólo dos concentraciones. Una vez lista la placa. lo que podría producir una falsa resistencia. si iniciamos con la solución madre de 512 ul. por lo que recientemente una casa comercial sueca. La interpretación es relativamente sencilla. Esta solución madre es diferente para cada antibiótico y su escogencia depende del tipo de antibiótico y la cepa a probar.Revista Médica del Hospital Nacional de Niños Dr. (16). de aquellos tubos en los que no se observe crecimiento. se multiplican por la dilución y se obtiene la concentración (ufc/ml) del inóculo empleado(16). Resumiendo. al escogerse dos concentraciones. luego procedemos a realizar diluciones dobles hasta los pozos 10. por o que si la solución madre tiene 512 ug/ml. la CMI se determina viendo en cuál pozo no hay crecimiento. por consiguiente.cr/scielo.php?pid=S1017-85461999000100010&script=sci_arttext 19/04/2013 . En este primer pozo la concentración del antibiótico. se realiza el plateo final en un medio de cultivo apropiado a la cepa y se incuba en las condiciones apropiadas hasta el otro día. en el primer pozo tendríamos una concentración real de 256 ug/ml. desarrolló una variación sustancial de esta técnica y la llama E test o Epsilon test(7.scielo. 50 ul de la solución madre de 512 ul. pero no se utiliza por la cantidad de material que emplea. Página 4 de 7 Con esta técnica. La CMI ya la hemos definido como la mínima concentración de antibiótico que inhibe el crecimiento posible de un inóculo bacteriano estandarizado. Por último se colocan 50 ul del inóculo bacteriano estandarizado. Con esa técnica se pueden determinar dos diferentes valores: la CMI y la CMB(16). o una CMI de una cepa contra ocho diferentes antibióticos. dejando el 11 como control de crecimiento negativo y al pozo 12 de control positivo de crecimiento. En los pozos de 1 a 10 (con excepción de pozos 11 y 12).

Se trata de tarjetas de 30 pozos que llenan con el inóculo bacteriano estandarizado. 13). Este utiliza tarjetas de plástico transparente para la prueba de sensibilidad. la sensibilidad se reporta en tiempos tan bajos como 4 a 5 horas.. G-Pruebas especiales Son técnicas que se utilizan con fines especiales y que se emplean en estudios de resistencia bacteriana en condiciones muy claramente definidas(9). Este método lo hemos usado para la detección de este tipo de agentes a partir de las heces de niños costarricenses y manos del personal de salud. Carlos Sáenz Herrera . con resultados excelentes (en prensa). En la mayoría de los casos.Pruebas . Actualmente. F-Métodos automatizados En cuanto a los métodos automatizados(3). el primero de ellos es la discusión de los métodos automatizados y por último aquellos métodos llamados espaciales.cr/scielo. se introducen a un incubador a 35ºC y cada 10 minutos el sistema hace una lectura y se mide la concentración del inóculo bacteriano. Los métodos a discutir son los siguientes: detección de la resistencia contra aminoglucósidos en los Enterococcus. se determina solamente la CMI y ésta se encuentra en la interfase de la elipse(7. una cepa resistente. comúnmente se utiliza una combinación sinérgica entre la vancominina y un aminoglucósido que puede ser gentamicina o streptomicina. lo que puede indicar resistencia o bajos niveles de ésta. Campylobacter sp. este sistema ha venido a solventar una serie de problemas técnicos y en especial la reducción importante en el tiempo de incubación de la prueba. es esperable que en pocos años se pueda desarrollar un medio de cultivo que soporte el crecimiento de este tipo de cepas. mediante una bomba de vacío y luego las tarjetas son selladas herméticamente. tendría una línea recta(13). Nos faltan dos temas importantes. Helicobacter pylory y Micobacterium tuberculosis. Si hay crecimiento en estas placas. Aun así. ya tiene a disposición tarjetas para la prueba de sensibilidad de organismos anaeróbicos. Para el tratamiento de infecciones serias por Enterococcus. 9). detección de la B-lactamasa y determinación de la actividad bactericida(9).. En E test ha venido a resolver una serie de problemas y a hacer más rápida y fácil la determinación de la CMI. por lo que se insiste en el hecho de que este dato es semicuantitativo. se pueden adquirir tiras de E test para pruebas de sensibilidad de las bacterias tradicionales y de las especiales como organismos anaerobios. el uso de un Müelle-Hinton suplementado con cloruro de sodio al 4% y 6 ug de oxacilina por ml de medio cultivo(7. tiempo que antes tomaba de 18 a 24 horas(3. E test para sensibilidad de los organismos levaduriformes(7). detección de la resistencia a la oxacilina en Staphylococcus. se controla la curva normal obtenida en el pozo de control positivo. hay resistencia a esos antibióticos(9). Cada tarjeta tiene un pozo control positivo de crecimiento y es este pozo donde se construye una curva normal de crecimiento bacteriano(13). El sistema Vitek está hecho para las pruebas de sensibilidad de los organismos de crecimiento rápido y es aquí donde se ha sentido su impacto. En cuanto a la resistencia de los Enterococcus contra la vancomicina. Este sistema no puede emplearse para las pruebas de sensibilidad de las cepas fastidiosas. Es importante mencionar que una prueba de sensibilidad realizada en un sistema automatizado. se escoja la concentración más alta y también es muy importante la observación de pequeñas colonias presentes en las zonas de bajo crecimiento. http://www.. En estos casos. recomienda. Se recomienda que. La lectura debe ser muy cuidadosa y puede hacerse con la ayuda de una lupa. Se trata del Sistema Automatizado Vitek de la casa comercial BioMerieux(13). El más sencillo el de dilución donde se emplean placas de Petri con Müeller-Hinton suplementado con gentamicina (500 ug) o streptomicina (200 ug). Hay también. una cepa sensible. pero no tenemos experiencia en este campo(13). detección de la resistencia de Enterococcus contra la vancomicina. se puede hacer una prueba para detectar la resistencia del Enterococcus a estos aminoglucósidos.scielo. tendría una curva exacta o muy parecida a la normal. Para ello hay tres métodos: el de difusión. sin embargo. revisaremos solamente el único sistema con el cual se ha acumulado una amplia experiencia en el Hospital Nacional de Niños. Cada uno de los pozos de antibióticos es referido al control positivo de crecimiento y la curva obtenida en cada uno a su vez. si la interfase cae entre dos puntos. por lo que puede ser utilizada en casos de sinergismo entre la gentamicina y la streptomicina para el tratamiento de infecciones invasoras por Enterococcus(13). El medio que se usa es agar sangre con sangre de caballo al 5% y con una base de Müeller-Hinton o puede utilizarse agar HTM o agar chocolate suplementado. El sistema Vitek trae una tarjeta (TA) que tiene estos antibióticos. para la detección de la resistencia de los Staphylococcus a la oxacilina.sa. proporciona un dato que se aproxima a una CMI ya que estos sistemas trabajan con 2 ó 4 diferentes concentraciones del antibiótico. La NCCLS. Aquí. una cepa intermedia presentaría una curva mucho menos amplia y con un menor recuento bacteriano que el control. el de dilución y la microtitulación(9). Así pues. Página 5 de 7 Este método emplea una tira con una matriz plástica que tiene una concentración decreciente de un antibiótico determinado. 16). La casa comercial.Revista Médica del Hospital Nacional de Niños Dr.php?pid=S1017-85461999000100010&script=sci_arttext 19/04/2013 . hemos empleado un agar sangre con base de MüellerHinton y 6 ug/ml de medio de vancomicina. no tendría una curva.

Washington D. Washington D.(9) Para la detección de la resistencia al cloranfenicol mediada por una CAT. 9. Para poner en evidencia este tipo de cepas hemos usado una técnica muy sencilla. Eds: Murray P. C. hay un cambio de color del disco y éste pasa de amarillo a rojo(9). In: H..). & Peterson L. Jankins M. vol. [ Links ] 9. cefotaxime o ceftazidime y amoxicilina/ac. como son los métodos genéticos para la detección de resistencia y las diferentes técnicas empleadas en el estudio de resistencia a los antivirales. Wayne PA.: American Society of Microbiology.sa. 16). In: Manual of Clinical Microbiology. Carlos Sáenz Herrera . Washington D. 3. USA. Sixth edition. la Escherichia coli presentará un halo de inhibición. D. USA..C. en la cual tenemos un disco impregnado con la cefalosporina y sólo se coloca una asada del organismo a testar y pocos minutos después se observa el cambio de color. et al. [ Links ] http://www.. In: Manual of Clinical Microbiology.cr/scielo. Baron E.14. Washington D. La idea es rayar una cepa de Escherichia coli con sensibilidad comprobada al cloranfenicol sobre el agar y luego colocar discos de cloranfenicol y sobre ellos discos sin antibióticos impregnados con la cepa a probar.. [ Links ] 3. El método más sencillo para la detección de la B-lactamasa es el uso de la cefalosporina cromogénica o Cefinasa de la casa BBL. veremos un gran halo de inhibición. El control de calidad debe ser efectuado al menos una vez por semana.9).C. Eds: Murray P. 1995. se raya un inóculo bacteriano estandarizado y se colocan tres discos: aztreonam.: Susceptibility tests of fastidious bacteria. & Sahm D.. 7. Antimicrobial Susceptibility Testing: General Considerations. cada vez que se cambia el lote del medio del cultivo o se prepara medio fresco y cada vez que se cambia un antibiótico o se inicie el uso de uno nuevo. Una vez incubada la placa por 24 horas.: Chloranfenicol acetyltransferase test.. 1. se ha desarrollado una técnica muy ingeniosa.. [ Links ] 2. Hindler J. Doern G. & Salfinger M. En un plato de agar Müeller-Hinton. [ Links ] 7. In: Manual of Clinical Microbiology. así como la detección de agentes antimicrobianos en fluidos biológicos(12). ya que no son detectadas en el laboratorio por los métodos rutinarios. Pfaller M. Pfaller M. Baron E. 11. si la cepa no produce esta enzima. Ferraro M. Puede haber un reporte de sensibilidad.. Baron E. AB BioDisk NA Piscataway N. Control de Calidad Una revisión sobre el tema de las pruebas de sensibilidad antimicrobiana no puede estar concluido sin mencionar lo concerniente al control de la calidad(1. por lo que estos temas serán objeto de una publicación posterior.. Baron E. En todos estos campos se ha avanzado mucho en los últimos años. : Manual of Clinical Microbiology. poniendo en evidencia la producción de la CAT.: American Society of Microbiology. In: Manual of Clinical Micribiology Sixth edition. & Pfaller M. Pfaller M. NCCLS: Performance Standards for Antimicrobial Susceptibility Testing. 1995. Eds: Murray P.C.J. pero no funciona el antibiótico en el paciente.Pruebas .. et al. Pfaller M. presentan patrones de sensibilidad conocidos. 15). los antimicóticos.. Washington D. Este es un tema de gran importancia. donde se usan discos sin antibiótico impregnados con la cepa a probar.. Washington D. Washington D. separados equidistantemente por 30 mm. Espinel I. et al. Si la cepa produce una B-lactamasa. Dicho control se realiza utilizando cepas control de la American Type Cultive Colection (ATCC) o de alguna otra institución internacional que se dedique a la producción y mantenimiento de cepas bacterianas. 5.. 1998. [ Links ] 5. Eds: Murray P. In: Manual of Clinical Microbiology. se presenta la inducción y no hay actividad del antibiótico. ésta debe encontrarse dentro de los límites máximos o mínimos impuestos por las regulaciones internacionales. si la cepa produce enzimas inducidas. Pfaller M et al.: American Society of Microbiology.: American Society of Microbiology. no habrá inhibición y por ende. Si la cepa produce CAT. Sixth edition. discos de cloranfenicol y un agar Müeller-Hinton(6). Eds: Murray P. Clinical Microbiology Procedures Handbook. & Jorgensen J. American Society of Microbiology.Revista Médica del Hospital Nacional de Niños Dr.. Quedan sin tratar algunas otras técnicas. 1995.C. Bibliografía 1. Sixth edition.. [ Links ] 6. las B-lactamasas de efecto expandido o inducibles y algunas otras como son la cloranfenicol acetil tranferasa (CAT) o aminoglucósido acetil tranferasa (AAT)(6. 1995. 940 West Valley Raod. Eighth Informational Supplement. NCCLS document M100-s8 (ISBN 1-56238-337-X) NCCLS. Baron E.: Antimicrobial Agents and Susceptibility Tests: Mycobacteria.. Jorgensen J. 1995. In. 1995. Página 6 de 7 En el campo de la resistencia bacteriana mediada por enzimas.. Las cepas de la ATCC. Swenson J.: Special Test for Detecting Antibacterial Resistence.: Instrument-Based Antibacterial Susceptibility Testing. 1992. producida por Haemophilus influenzae.C. Eds: Murray P. inactivará al coranfenicol y la Escherichia coli no presentará un halo de inhibición.. clavulánico.scielo. Inderlied C. En los últimos años. C. [ Links ] 4. con gran importancia clínica. Isenberg (ed.: American Society of Microbiology. PDM Epsilometer. por lo que al montar una prueba de sensibilidad. se han detectado muchos tipos de B-lactamasas inducidas. Sixth edition....php?pid=S1017-85461999000100010&script=sci_arttext 19/04/2013 .: American Society of Microbiology. [ Links ] 8. Pfaller M. et al. Sixth edition. ya que al poner la cepa en contacto con el antibiótico in vivo. antiparasitarios y la resistencia en organismos anaeróbicos(2. 10. por el contrario.:Antifungal Agents and Susceptibility Testing. podemos mencionar varios tipos como por ejemplo las B-lactamasas. Baron E. 4. et al.

: American Society of Microbiology.: American Society of Microbiology. 1995. Eds: Murray P... [ Links ] * División de Microbiología. Eds: Murray P.. Sixth edition. Carlos Sáenz Herrera . 1995.. Ostergaard B. Sixth edition.: Acquired Drug Resistance and Susceptibility Testing in Parasitic Diseases. Popovic T..C.sa. 510721-1 (rev (0796)) Bio Merieux Vitek Inc.C. Pfaller M. Pfaller M. [ Links ] 11. Washington D. Woods G. Missouri.sa. & Doern G.: American Society of Microbiology. Eds: Murray P. Sixth edition. Página 7 de 7 10. 1995. 1995 [ Links ] 15. jr..scielo. In Manual of Clinical Microbiology. In Manual of Clinical Microbiology. et al. et al.cr/scielo. In: Manual of Clinical Microbiology. 1654-1000. 1995. In Manual of Clinical Microbiology. Baron E. & Biron K. In Manual of Clinical Microbiology. Pfaller M. Carlos Sáenz Herrera. Costa Rica Hospital Nacional de Niños Dr. San José.: American Society of Microbiology. Pfaller M.: Genetic Methods for Detecting Antibacterial Resistence Genes... Washinton D. Dr. Eds: Murray P. Swierkosz E.. & Washington J.C.... et al. Wexler H... USA. et al.: Assays for Antimicrobial Agents in Body Fluids.Pruebas . Baron E.. Washington D.C. Sixth edition. Hazelwood.: Susceptibility Testing of Anaerobic Bacteria. Technical Bulletin Manual Clinical. et al. Tenover F. Washington D.C. Baron E.: Antibacterial Susceptibility Tests: Dilution and Disk Diffusion Methods. [ Links ] 13.cr http://www. Sixth edition. et al.: American Society of Microbiology. Sixth edition. Carlos Sáenz Herrera Apdo. cendeiss@ccss. CCSS. & Olsvik O.. Pfaller M.: American Society of Microbiology. [ Links ] 12..php?pid=S1017-85461999000100010&script=sci_arttext 19/04/2013 . Costa Rica. [ Links ] 14. Baron E. Stanley S.Revista Médica del Hospital Nacional de Niños Dr. Washington D.. Pfaller M.. [ Links ] 16. 1995. Eds: Murray P.C. San José. In Manual of Clinical Microbiology.. Hospital Nacional de Niños. Lakatua D & Rotschafer J. Laboratorio Clínico. Baron E.. 1997.: Antiviral Agents and Susceptiblity Testing. Baron E. Eds: Murray P. Washington D.

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