ANTIBIOGRAMA

El estudio de la sensibilidad de los microorganismos a los antimicrobianos es una de las

funciones más importantes de los laboratorios de microbiología clínica.

Su realización se desarrolla mediante las pruebas de sensibilidad o antibiograma, cuyo

principal objetivo es evaluar en el laboratorio la respuesta de un microorganismo a uno o
varios antimicrobianos, traduciendo, en una primera aproximación, su resultado como factor
predictivo de la eficacia clínica.

Definición:

El antibiograma es una prueba de laboratorio de microbiología, que tiene como objetivo

evaluar la respuesta de un microorganismo a uno o a varios antimicrobianos o antibióticos.

El antibiograma define la actividad in vitro de un antibiótico frente a un microorganismo

determinado y refleja su capacidad para inhibir el crecimiento de una bacteria o población
bacteriana.

Sin que importe el método a emplear, hay tres facetas o pasos que se deben considerar:

1. El medio de cultivo a emplear

2. El antibiótico a utilizar

3. La cepa bacteriana a probar.

Cualquiera que sea el método hay que controlar cada una de estas tres variables y cada una
de ellas es importante a su manera.

Medio de cultivo a emplear

Según el método a emplear y según el agente a estudiar, hay varios medios de cultivo que se
pueden utilizar

Puntos a tomar en cuenta para los medios de cultivo

Todos los medios de cultivo deben ser preparados de la mejor manera posible, ajustando el
pH, y asegurándose de que la concentración del agar sea la correcta.

En especial, para la técnica de la difusión en agar, estos parámetros deben ser aún más
claramente controlados.

Un agar muy suave, puede producir una falsa sensibilidad ya su vez, un agar muy duro,
puede producir una falsa resistencia, al incidir en un cambio en la velocidad y distancia de la
difusión del antibiótico.

Cambios en el pH, pueden producir falsa resistencia o falsa sensibilidad al incidir en la

polaridad de los antibióticos, este pH debe ser regulado correctamente.

Otro punto de gran importancia es la profundidad del agar, la cual debe ser exactamente de
4mm.

Un agar delgado, permite una mejor difusión de los antibióticos que producen una falsa
sensibilidad, pero también un agar con más de 4 mm de profundidad puede producir una
disminución en la migración (difusión) del antibiótico con la consiguiente falsa resistencia.

Además, los medios de cultivo deben ser lo más frescos posibles, con no más de 7 días de
preparación y siempre deben ser guardados en bolsas plásticas selladas ya 4°C.

Cada vez que se va a preparar el medio de cultivo, hay que asegurarse de que el polvo esté
en buenas condiciones, sin cambios de color y de consistencia y por supuesto, que sea polvo
(nohidratado).

Puntos a tomar en cuenta para el antibiótico

- Podemos tener cuatro tipos de posibilidades, discos de papel impregnados con una
concentración conocida del antibiótico, pastillas con una concentración conocida del
antibiótico, preparaciones farmacéuticas del antibiótico o tiras de plástico con una
matriz propia y un gradiente decreciente del antibiótico determinado.
- Lo importante es que estas diferentes presentaciones del antibiótico están en la mejor
condición posible, que se respete la cadena de frío, que no se humedezcan, y que
realmente contengan la concentración del antibiótico que dice tener

Puntos a tomar en cuenta para las cepas bacterianas

Se debe ajustar la concentración del inóculo de la cepa a probar. Esto significa que
debemos estandarizar dicho inóculo.

Esta estandarización puede realizarse utilizando el estándar de McFarlan o utilizando un

nefelómetro. En ambos caos, la estandarización se hace hasta el estándar 0,5 de McFarlan.

Para la preparación del inóculo lo más recomendable es usar agua destilada estéril;
también puede usar solución salina al 0,4% o un caldo nutritivo.

Métodos cualitativos

Los métodos cualitativos son menos precisos que los semicuantitativos. Los resultados
generalmente se informan en una de las siguientes formas: Sensible (S), Intermedio (I) y
Resistente (R).

Método de difusión

- Método del antibiograma disco-placa

El antibiograma disco-placa basado en el trabajo de Bauer, Kirby y colaboradores es uno de los

métodos que el National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS) recomienda para
la determinación de la sensibilidad bacteriana a los antimicrobianos

Fundamento

❑ El microorganismo es inoculado en la superficie de una placa de agar, sobre el cual se

colocan discos impregnados con una concentración conocida del antibiótico.

❑ Las placas se incuban por 16-18 horas a 35- 37°C.

❑ Durante la incubación, el antibiótico difunde radialmente desde el disco a través del

agar, por lo que su concentración va disminuyendo a medida que se aleja del disco.

❑ En un punto determinado, la concentración del antibiótico en el medio es incapaz de

inhibir al germen en estudio.

❑ El diámetro del área de inhibición alrededor del disco puede ser convertido a las categorías
de sensible, intermedio o resistente (S, I, o R) de acuerdo a tablas publicadas por los
organismos encargados del control de tales métodos, por ejemplo, el Comité Nacional de
Estandar de Laboratorios Clínicos de los Estados Unidos de Norteamérica (National Committee
for Clinical Laboratories Standards).

Concentración mínima inhibitoria

La CMI se define como la concentración mínima de antibiótico que inhibe el crecimiento

posible de un inóculo bacteriano estandarizado.