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UNIVERSIDAD POLITCNICA METROPOLITANA DE

PUEBLA
INGENIERA EN BIOTECNOLOGA

REPORTE DE PRCTICA
ANTIBIOGRAMA

MICROBIOLOGA APLICADA
M.C. RAFAEL TORRES MONTIEL
5C
KAREN SOFA JUREZ
ZAMBRANO

LEONARDO JOVANY SAN


MARTIN ROMERO

LUZ MIREYA GONZAGA


VELZQUEZ

VASHTI LUZ PREZ


ALVREZ

PRACTICA NMERO:
FECHA EN QUE SE REALIZA LA PRCTICA:
18/03/2016

INTRODUCCIN
El

antiobiograma

es un mtodo de estudio in vitro del


comportamiento de los antimicrobianos (antibiticos y quimioterpicos)
frente a los agentes infecciosos. Tiene como finalidad proporcionar
informacin til para la iniciacin y marcha de la teraputica anti
infecciosa. Con los resultados obtenidos en el antibiograma clasificamos
las bacterias en: sensibles, moderadamente sensibles y resistentes, a un
determinado antimicrobiano.
La informacin que proporciona el antibiograma es valiossima, aunque
no basta para el establecimiento de una terapia adecuada si se
considera aisladamente y se aplica sin tener en cuenta las
peculiaridades del antimicrobiano, las caractersticas clnicas del proceso
infeccioso y las del propio paciente. El estudio estadstico del
antibiograma permite conocer la tendencia de sensibilidad de cada
especie bacteriana, su coeficiente de benignidad frente a los
antimicrobianos utilizados y su ndice de especificidad, que traduce la
eficacia de cada antimicrobiano desde el punto de vista teraputico y
epidemiolgico. ( Garca Martos, 1996)
PRUEBAS DE SENSIBILIDAD BACTERIANA
Las pruebas de sensibilidad bacteriana se llevan a cabo mediante el
antibiograma que sirve para medir la sensibilidad de una cepa
bacteriana a uno o varios antibiticos. El estudio de la sensibilidad in
vitro es uno de los requisitos previos para la eficacia in vivo de un
tratamiento antibitico. Tambin es importante para realizar estudios
sobre la evolucin de las resistencias bacterianas que permite revisar los
protocolos de la antibioticoterapia emprica.

La determinacin de la Concentracin Mnima Inhibidora (CMI) es la


medida de la sensibilidad de una bacteria a un antibitico. Es la mnima
cantidad de antimicrobiano que es capaz de impedir el crecimiento de
un microorganismo en unas condiciones normalizadas. Es el mtodo
habitual utilizado en los laboratorios de Microbiologa Clnica. Para
llevarlo a cabo es necesario utilizar cepas control (de referencia) con el
fin de que los resultados sean reproducibles y comparables. Este mtodo
nos ofrece informacin sobre la sensibilidad de las bacterias S (sensible),
I (intermedia) y R (resistente).
Sensible, si existe una buena probabilidad de xito teraputico en el
caso de un tratamiento a la dosis habitual.
Resistente, si la probabilidad de xito teraputico es nula o muy
reducida. No es de esperar ningn efecto teraputico sea cual fuere el
tipo de tratamiento.
Intermedia, cuando el xito teraputico es imprevisible. Se puede
conseguir efecto teraputico en ciertas condiciones (fuertes
concentraciones locales o aumento de la posologa).
Existen diferentes tcnicas de laboratorio que permiten medir o calcular
de forma rutinaria, y de manera semicuantitativa, las CIM (mtodos
manuales y mtodos automatizados o semiautomatizados). Se puede
realizar mediante:

Difusin en agar: Disco placa y E test


Dilucin: Medio slido y Medio lquido (micro/macrodilucin)
Mecanizados y Automatizados

La Concentracin Mnima Bactericida (CMB) es la mnima cantidad de


antibitico capaz de destruir el 99,9% de una muestra inoculada en
condiciones estandarizadas.
Mtodos
En un primer momento, el mtodo estndar utilizado para las pruebas in
vitro fue el de dilucin en caldo, que proporcionaba un resultado
cuantitativo. Actualmente existen varios mtodos que se utilizan para
llevar a cabo los estudios de sensibilidad a los antibiticos y todos ellos

se realizan bajo
internacionales.

condiciones

entandarizadas

por

organismos

Dilucin en caldo
Se colocan concentraciones decrecientes del agente antimicrobiano,
generalmente diluciones 1:2, en tubos con un caldo de cultivo que
mantiene el desarrollo del microorganismo. Los antibiticos se preparan
en "soluciones madre" concentradas y luego se diluyen en caldo hasta
obtener las concentraciones apropiadas.
Un tubo de caldo se mantiene sin inocular como control negativo de
crecimiento. Despus de un periodo de incubacin adecuada se observa
la turbidez de los tubos que indica el desarrollo bacteriano. El
microorganismo crecer en el tubo control y en todos los que no
contengan suficiente antibitico que sea capaz de inhibir su desarrollo.
La concentracin de antibitico que presente ausencia de crecimiento es
la Concentracin Mnima Inhibitoria.
Para medir la CMB se debe realizar la prueba de actividad bactericida,
que emplea el mismo sistema de dilucin en caldo que para medir la
sensibilidad.
A partir de la CMI, se siembra una cantidad conocida de inculo de cada
uno de los tubos de caldo que no tienen turbidez en placas de agar, y el
nmero de colonias que crece en estos subcultivos, despus de incubar
durante la noche, se compara con el nmero de UFC/ml del cultivo
original. La mnima concentracin del agente antibacteriano que permite
sobrevivir a menos de 0,1 % del inculo original se denomina
concentracin bactericida mnima (CBM).
Difusin en agar
Este mtodo incorpora el antimicrobiano a discos de papel de filtro. Su
introduccin permiti agilizar la determinacin de la sensibilidad de las
cepas bacterianas frente a un nmero importante de antimicrobianos de
forma simultnea. El empleo de los discos de papel de filtro para las
pruebas de sensibilidad est estandarizado y se correlaciona con las
CMIs. Durante muchos aos, y a pesar de ser una tcnica puramente
cualitativa, el mtodo de difusin por disco (o mtodo Kirby-Bauer), en
funcin sobre todo de su comodidad, economa y fiabilidad, ha sido uno
de los ms utilizados en los laboratorios.

El microorganismo a investigar se inocula en una o varias placas de agar


y sobre su superficie se disponen los discos correspondientes a varios
antibiticos. Se incuban las placas durante 16-24 horas y se estudia el
crecimiento en ellas. Se valora el dimetro de la zona de inhibicin que
se forma alrededor de cada disco y se compara con las referencias
oportunas publicadas por la NCCLS. De esta manera se sabe si el
microorganismo es Sensible, Intermedio o Resistente a cada uno de los
antibiticos.

Ilustracin 1: Diagrama de flujo, Tomado de


http://www.telefonica.net/web2/carlosmartinezanton/pdf/8.%20An
tibiograma.pdf

Mtodo de E-test

Es un mtodo ms reciente, es una combinacin de caractersticas de


los mtodos anteriores. Se trata de una tcnica cuantitativa en placa
que permite obtener una lectura directa de CMI en g/ml, ya que se
emplean tiras plsticas impregnadas en concentraciones crecientes de
antibitico.

El microorganismo se inocula en una placa y sobre ella se deposita la


tira del antibitico (o antibiticos) a ensayar. Se incuba durante 16-24
horas a 35C y se valora la zona de inhibicin alrededor de cada tira. La
CMI se lee directamente observando el punto ms bajo de la elipse que
presente el crecimiento.

Ilustracin 2: E-test

Ilustracin 3: Antibiograma

Mtodos automatizados
La mayora de estos mtodos utilizan sistemas de microdilucin en
medio lquido sobre microplacas con pocillos en "U" e interpretan el
crecimiento bacteriano en los diferentes pocillos por medio de un
autoanalizador (mediciones por turbidez o fluorescencia). Anteriormente
se haca por lectura ptica del tcnico a travs de un espejo invertido.
Son sistemas fciles y rpidos, generalmente automatizada o
semiautomatizada. Son mtodos ideales para grandes volmenes de
trabajo. Una de sus grandes limitaciones es que slo ofrecen garanta
para investigar microorganismos de crecimiento rpido y que no tengan
requerimientos especiales.

Ilustracin 4: Antibiograma, micro dilucin

OBJETIVO DE LA PRCTICA

Objetivo general:

Observar el efecto que tienen las bacterias ante los antibiticos.

Objetivos especficos:

Aplicar las tcnicas para realizar un antibiograma.


Determinar la sensibilidad de los microorganismos.
Interpretar un antibiograma.
Analizar los datos.

MATERIAL Y REACTIVOS QUE SE EMPLEAN PARA EL


DESARROLLO DE LA PRCTICA

Cantida
d

Material

10
2

Cajas Petri
Tubos de ensaye
Hisopos

Asa bacteriolgica

1
6
1
12

Equipo

Reactivos

Mechero
Desinfectantes,
agentes microbicidas
Pinzas
Discos

METODOLOGA QUE SE EMPLEA PARA EL DESARROLLO


DE LA PRCTICA
Se utilizaron seis agentes encontrados en mercados de distribucin de
limpieza:
1.
2.
3.
4.
5.
6.

Gel antibacterial
Pinol
Fabuloso
Clarasol Clorox
Alcohol 70%
Alcohol 96%

15/03/16
1. Preparar los medios de cultivo donde se realizar el antibiograma.
2. Esterilizar medios de cultivo, hisopos, discos y pinzas.

17/03/16
Hacer las pruebas con cada una de las muestras de microorganismos con las que se ha
estado trabando.

Ilustracin 5: Estra masiva

Ilustracin 6: Inculos

1. Tomar una cepa de cada una de nuestras muestras previamente


aisladas.

2. Inocular cada una de las cepas en los tubos de ensaye, el cual


contiene un medio de cultivo lquido.
3. Incubar durante 20 minutos a temperatura de 37C.
4. Tomar el inoculo con los hisopos.
5. Extender masivamente el inoculo en toda la placa. (Hacer esto con
las dos muestras de microorganismos).
6. Esperar a que se sequen las placas, colocar los discos previamente
sumergidos en cada uno de los agentes. Los discos deben estar
totalmente repartidos por toda la placa; colocndolos a una
distancia presagiada para la formacin de un halo de resistencia.
7. Incubar las dos placas.

Ilustracin 7: Placas con discos remojados en agentes

18/03/16
1. Observar los resultados.

Ilustracin 8: Medicin de halo

RESULTADOS OBTENIDOS Y DISCUSIN

Ilustracin 9: Antibiograma colonias chicas.

Ilustracin 10: Antibiograma de colonias grandes

Categoras de interpretacin:

Sensible: el microorganismo presenta una gran rea de inhibicin


causada por el frmaco.
Intermedio: se presenta un halo de inhibicin ms reducido.
Resistente: presenta muy poco o casi nada de halo.

Agente

Colonia chica

Colonia grande

Gel antibacterial

Sensible

Sensible

Pinol

Sensible

Sensible

Fabuloso

Sensible

Intermedio

Clorox

Sensible

Resistente -2cm de
dimetro

Alcohol 70%

Sensible

Sensible

Alcohol 96%

Sensible

Sensible

CONCLUSIONES DEL ESTUDIANTE


El dimetro obtenido depender no solo de la sensibilidad del
microorganismo y la carga del disco, sino tambin del espesor de la capa
de agar, pH y composicin, de la capacidad de difusin del agente en
ese medio, la temperatura, la velocidad de duplicacin bacteriana, y el
tamao y fase de crecimiento del inculo. Para que los resultados sean
confiables los procedimientos debern ser controlados y estandarizados
cuidadosamente.

REFERENCIA BIBLIOGRFICA

Garca Martos, P. (1996). Microbiologa clnica aplicada. Madrid, Espaa:


Ediciones Daz de Santo.