1

1. CONCEPTOS FUNDAMENTALES
De forma general, las muestras bajo estudio en el campo del análisis químico son
complejas y contienen normalmente especies de características semejantes que, en
muchas ocasiones, son interferentes en las determinaciones individuales. Por ello, es
muy común que resulte necesaria la inclusión en el proceso analítico de una etapa
previa de separación, con el fin de eliminar las especies interferentes o aislar el analito.

Cerveza
Sangre
Aire
Agua potable
Pintura
Aleaciones
Alimentos en general
Plantas, (productos agrondustriales
En veces es necesario o deseable obtener por separado los componentes de
una mezcla o conocer su composición, y a esto se dedica el análisis químico.
LOS COMPONENTES DE UNA MEZCLA PUEDEN CONCENTRARSE O SEPARARSE
MEDIANTE PROCESOS DE SEPARACION.
1. Conceptos fundamentales

Determinación individual de una especie química

ALIMENTOS: Matrices muy complejas

ETAPA DE SEPARACIÓN EN EL MÉTODO DE ANÁLISIS

¿Qué es una separación?

1 A + B

2 A + A, B
A, B

3 B + A, B

C2>C0>C1
A(C0), B(C0) A(C1), B(C1) + A(C2), B(C2)

3
1. Conceptos fundamentales

Proceso físico
i empre
s
TÉCNICA DE SEPARACIÓN
av
ece
s
Proceso químico

Ej: Extracción líquido-líquido para extraer el pentaclorofenol contenido en

una alícuota de vino en pentano.

1º: Proceso químico: reacción de derivatización

C6Cl5-OH + (CH3-CO)2O → C6Cl5-O-CO-CH3 + CH3-COOH

2º: Proceso físico: transferencia del producto derivado

a la fase orgánica

Segunda fase: pentano (menos densa que la fase inicial)

Fase inicial: alícuota de muestra

Fig.1 4
1. Conceptos fundamentales

¿Cuándo es necesario aplicar una técnica de separación?

Cuando la [ analito]
en la muestra es muy Eliminación de interferencias
Eliminación de
baja e incremento de la
interferencias
No origina señal: concentración del analito
incrementar [ ]

Incremento de la Incremento de la
selectividad Incremento de la selectividad y la sensibilidad
sensibilidad

5
2. Fundamento de algunas técnicas de separación

Los métodos de separación están basados en las

diferentes propiedades físicas (como la densidad, la
temperatura de ebullición, la solubilidad, el estado de
agregación , etc.) de las sustancias que componen la
mezcla.

A continuación, veremos algunos de los métodos más

utilizados:

6
FILTRACIÓN
Es el más sencillo de todos los métodos de separación.
Esta técnica está basada en el diferente tamaño de las partículas
de las sustancias que componen la mezcla.
Se utiliza para separar un sólido de un líquido en el cual no es
soluble . Para ello, se hace pasar la mezcla por un material
poroso, como papel, telas, etc., que retiene las partículas de la
mezcla cuyo tamaño sea mayor que el tamaño del poro Cocina=colar

En química = filtrar
 DECANTACIÓN

Este método está basado en la

diferente densidad de dos líquidos
que no forman una mezcla
homogénea; es decir, de dos
líquidos inmiscibles. Aceite

Se coloca la mezcla en un embudo

Agua
de separación que tiene una llave
de salida en su parte inferior. Luego
se abre la llave y se deja salir el
liquido de mayor densidad. Una vez
que sale en su totalidad, se cierra la
llave, quedando dentro del embudo Agua

el liquido de menor densidad 

 Tamizado

Consiste en separar una mezcla de materiales sólidos

de tamaños diferentes, por ejemplo granos de maíz y
arena empleando un tamiz (colador). Los granos de
arena pasan a través del tamiz y los granos de
maíz quedan retenidos.

9
 Métodos de separación en mezclas heterogéneas
Separación magnética
Esta técnica está basada en las
propiedades magnéticas de
algunas sustancias.
Consiste en aplicar un campo
magnético (un imán) para
extraer de la mezcla las
sustancias que son atraídas por
él.
En pocas palabras, son sistemas de
separación magnética que atraen
materiales férreos como limaduras
de hierro o partículas magnéticas
muy finas y, por lo tanto, los filtran
y separan de la cadena de
producción.
Esta función es especialmente clave en la
 industria alimentaria, ya que es fundamental
que los alimentos se envasen y entreguen sin
ningún tipo de contaminación. Dado que
existen separadores magnéticos de diversas
formas y con diferentes propiedades, éstos se
pueden unir a la cinta transportadora en
cualquier punto de la cadena de producción. La
humedad tampoco es un problema, ya que
también hay separadores magnéticos con alto
rendimiento que son resistentes a la corrosión.
Esto es extremadamente práctico porque
también se puede usar para limpiar alimentos
líquidos como el aceite
 MÉTODOS DE SEPARACIÓN DE MEZCLAS
HOMOGÉNEAS

Los métodos que se utilizan en este

caso son:
EVAPORACIÓN:
Consiste en separar los
componentes de una mezcla de un
sólido disuelto en un líquido.
se calienta la mezcla hasta que el
liquido (solvente) se evapore,
separándose así del solido que se
encontraba disuelto (soluto)
La evaporación se realiza en
recipientes de poco fondo y mucha
superficie, tales como cápsulas de
porcelana, cristalizadores, etc.
PARA DETERMINAR MATERIA
SECA 11
 CENTRIFUGACION

Consiste en la separación de materiales de diferentes densidades

que componen una mezcla. Para esto se coloca la mezcla dentro
de un aparato llamado centrífuga, la cual tienen un movimiento de
rotación constante y rápido, lo cual hace que las partículas de
mayor densidad vayan al fondo y las más livianas queden en la
parte superior. 

12
 DESTILACIÓN
Para separar líquidos miscibles o un sólido disuelto en líquido.

AGUA EN
CONTRA
CORRIEN
TE
núcleos de
ebullición

DESTILACION SIMPLE Consiste en llevar una mezcla líquida a ebullición en un matraz de

destilación. El vapor que se desprende al inicio está compuesto principalmente por el
líquido de menor temperatura de ebullición. Este vapor se hace pasar por un refrigerante o
condensador y se colecta en un recipiente.

EJEMPLOS: para determinar el nivel de alcohol en bebidas

 DESTILACIÓN FRACCIONADA
Siendo la principal diferencia con respecto a la destilación simple el uso de una
columna de fraccionamiento,
el producto es calendado siendo evaporado y enviado a la columna que tiene

bandejas horizontales
colocadas una sobre
otras con temperaturas
deferentes las T° de las
bandejas inferiores son
mayores que las
superiores. Ese contacto
produce un intercambio
de masa, donde los
líquidos con menor punto
de ebullición se
convierten en vapor, y los
vapores con mayor punto
de ebullición pasan al
estado líquido.
DESTILACIÓN FRACCIONADA

PETROLEO
•Mezcla en la que coexisten
las fases sólida, líquida y
gaseosa.
•La mayor parte de sus
componentes son
hidrocarburos (C e H) pero
contienen N, S, O ó metales.
•Se obtienen combustibles,
lubricantes, ceras, disolventes
y derivados petroquímicos.
 CRISTALIZACIÓN
Para separar un sólido disuelto en un disolvente. Un sólido tiene un
limite de solubilidad SATURACIÓN por ejemplo el NaCl es de 39.12% m/v
en agua.

Si el volumen de disolvente disminuye mientras la temperatura se

mantiene constante, el sólido (soluto) tendera a cristalizar.
La solubilidad aumenta al T y una disminución de T favorece la
cristalización del soluto.
CRISTALIZACIÓN FRACCIONADA: cuando se tienen 2 o mas solutos en solución, al
evaporar parcialmente el disolvente cristalice sólo uno de ellos ,el menos soluble. Este
puede separarse por filtración para luego seguir evaporando el disolvente hasta la
cristalización de un segundo soluto, y así sucesivamente.
Cristal de fosfato monoamónico
 EXTRACCIÓN
Se hace pasar repetidamente por la mezcla un solvente que permita separar
algunos de los solidos. La extracción se hará cuando el solvente se agrega en
frio. Si el solvente se agrega en caliente, el método se llamara decocción

Este fenómeno unido a la mayor o

menor solubilidad en agua en cierto
tipo de solutos comparada con su
solubilidad en otros disolventes
orgánicos no miscibles en agua,
constituye la base de la
EXTRACCIÓN

EJEMPLO: tenemos una solución acuosa con 2

sólidos, uno de los cuales (S1= cafeína) es soluble
en cloroformo (cualquier disolvente no miscible al
agua) y el otro (S2) NO. Al añadir cloroformo sobre
esta solución acuosa y agitar, S2 permanecera en el
agua, mientras que S1 será extraído, al menos
parcialmente, por el cloroformo. Es necesario
repetir este proceso varias veces.
 DISOLUCION
Se utiliza para separar mezclas solidas. Se
agita la mezcla y luego se le agrega un
solvente que permita disolver uno de los
sólidos. Para separar definitivamente el
solido no disuelto y el solido disuelto se
utiliza la técnica de filtración o de
decantación  
 MACERACION:
•  Se utiliza para separar mezclas solidas.
Se tritura la mezcla y luego se le agrega
un solvente selectivo para disolver uno de
los solidos

20
 LIXIVIACION:
Se utiliza para separar mezclas solidas. Se hace pasar reiteradamente  un
solvente selectivo, para separar el solido soluble y dejar dentro del tubo
el solido insoluble

Algunos ejemplos son:

La extracción de colorantes se
realiza a partir de materias sólidas
por lixiviación con alcohol o soda.

Dentro de ésta, tiene una gran

importancia en el ámbito de la
metalurgia, ya que se utiliza
mayormente en la extracción de
algunos minerales como oro, plata y 
cobre.
También se utiliza en Tecnología
Farmacéutica
21
22
Introducción a la
Cromatografía
 SEPARACIONES CROMATOGRÁFICAS

• CROMATOGRAFIA: Se utiliza para mezclas homogéneas entre

sólidos, líquidos, gases y solidos - líquidos.
• Existen varios tipos de cromatografía como la cromatografía de
papel, hasta los mas sofisticados como la cromatografía de gases
la cual se desarrolla en equipos computarizados.

25
 Introducción
• Actualmente cromatografía es el nombre que se le da a
un grupo de técnicas utilizadas en la determinación de la
identidad de sustancias, en la separación de
componentes de las mezclas y en la purificación de
compuestos.
• Esta técnica es muy efectiva y por lo tanto se utiliza
tanto a nivel de investigación como a nivel industrial.

26
ORIGEN-1903

27
28
METODOS
CLASICOS

METODOS ISTRUMENTALES 29
30
31
 La fase estacionaria
retrasa el paso de los
componentes de la
muestra, de forma que
los componentes la
atraviesan a diferentes
velocidades y se
separan en el tiempo

(una muestra
constituida por
una mezcla que
contiene el
compuesto
deseado en el
disolvente)

Este método puede variar de técnica en técnica, pero

siempre se basa en el mismo principio: Todos los sistemas
de cromatografía contienen una fase estacionaria y una
fase móvil. 32
 FASE MÓVIL

FASE
ESTACIONARIA
34
 Fase móvil Fase
estacionaria

B
Fase
estacionaria
A
Fase
móvil
CROMATOGRAFÍA
PLANA
CROMATOGRAFÍA
EN COLUMNA
35
36
37
Diferentes fases móviles y fases estacionarias

38
 TÉRMINOS BÁSICOS EN CROMATOGRAFÍA
• Cromatógrafo Instrumento empleado para realizar una
separación cromatográfica.

• Cromatograma Representación gráfica de la

composición de los solutos que salen de una
columna cromatográfica en función del tiempo.

Eluir Proceso en el que la fase móvil se desplaza a lo

largo de la fase estacionaria transportando los
componentes a separar.

• Eluyente Disolvente aplicado al principio de una columna cromatográfica.

• Detector Aparato que registra una propiedad físicoquímica del material eluido.
• Tiempo de retención (tR ): Representa el tiempo transcurrido entre el instante de
inyección y el determinado cuando el pico correspondiente en el cromatograma
alcanza su máximo.
39
 1

2 3

40
1

41
42
43
44
45
2

46
3

47
3

48
CROMATOGRAFÍA DE GASES (GC)

La cromatografía de gases incluye todos los sistemas cromatográficos en

los que la fase móvil es un gas.

49
50
CROMATOGRAFÍA LÍQUIDA DE ALTA RESOLUCIÓN

Dentro de las
cromatografías cuya fase
móvil está constituida por
un líquido, destaca la
Cromatografía Líquida de
Alta Resolución (HPLC,
High Performance Liquid
Chromatography)

51
52
53
 HPLC
• Farmacia: antibiótico, sedantes, esteroides y analgésicos.
• Bioquímica: aminoácidos, proteínas, carbohidratos y lípidos.
• Alimentos: edulcorantes artificiales, antioxidantes, aflatoxinas y
aditivos.
• Compuestos industriales: aromáticos condensados, agentes
tensoactivos, agentes propulsores, y colorantes.
• Contaminantes: plaguicidas, herbicidas, fenoles, bifenilos
policlorados.
• Química forense: drogas, venenos, alcohol en la sangre y
narcóticos.
• Medicina Clínica:. Sales biliares, metabolitos de medicamentos,
extractos de orina y estrógenos

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 Cromatografía Gas Líquido
Análisis cualitativo y cuantitativo de
mezclas complejas

• Alimentos: para determinar especies volátiles, que en muchas

ocasiones son responsables de olores y sabores característicos,
para determinación de lípidos y ácidos grasos mediante procesos
de derivatización. Análisis de drogas junto con HPLC
• Para la determinación de alquitranes, pinturas, películas fibras
sintéticas mediante pirolisis.
• Para el seguimiento y el control de contaminantes en el medio
ambiente (polutantes del agua, contaminación atmosférica)
55
56
 Usos de la Cromatografía
La cromatografía de capa fina, la de papel, así
como la de gases o la de líquidos de alta
resolución, se emplean en la identificación
Analítica presuntiva de los componentes de la muestra.
Las dos primeras comparan el recorrido de la
muestra llamado (Rf) de los patrones y se
comparan con la de las muestras.

Se emplea para la separación de los

constituyentes de la muestra. Considerando que
siempre queremos obtener gran cantidad de
Preparativa productos puros, las placas o columnas que se
usan en estos procesos deben poseer más
cantidad de fase estacionaria que las empleadas
en los procesos analíticos.
58
 Cromatografía en Papel y Capa Fina (TLC)

Sembrado:

Puntiforme Banda

Forma de sembrado: Manual (capilares jeringas)

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Cualitativa

x x x x x x

Identificación Pureza Ausencia

Cuantitativa Preparativa

x x x x

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 Descendente
Ascendente
Simple
Circular
Horizontal
Desarrollo

Común
Múltiple Bidimensional
Continuo

a - distancia recorrida por el

a analito.
b Rf 
a b
b - distancia recorrida por el
x frente
61
62
 Fase Móvil

Polaridad
COOH Acidos carboxílicos
Alta OH Alcoholes
NH2 Aminas
SH Tioles
CHO Aldehidos
CO Cetonas
COOR Esteres
OCH3 Eteres
Baja Hidrocarburos No Saturados
Hidrocarburos Saturados

Saturación de la Cámara
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Cromatografía en capa delgada

64
Cromatografía de capa fina

65
 Revelado

Revelado Difiere de acuerdo al objetivo planteado

Técnica de bañado
Aplicación
Técnica de pulverización

Clasificación de reveladores

Destructivo H2SO4

I2
No Destructivo
Lámpara ultravioleta
66
 Revelado

H2SO4
Generales

Lámpara ultravioleta
Selectivo I2

Ftalato de anilina (azúcares)

Ninhidrina (Amino-ácidos)
Específico Resorcina (Cetosas)
Difenilamina + U.V. 254 (Clorados)

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 Cromatografía Cuantitativa

Estimación del área de la mancha (por medida, pesada)

Determinación indirecta (raspado y valoración)
Determinación directa (Densitómetro)

Detector Fuente de luz

Placa
cromatográfica

68
 Extracción Pigmentos

• 20 g de hojas verdes (espinaca, acelga, etc.) se cortan en finos trozos con tijera y
se colocan en el mortero.

• Se agregan 20 mL de acetato de etilo y se maceran por 5 minutos realizando un

movimiento giratorio con el pilón. La solución debe quedar de color verde intenso.

• Una vez pasado los 5 minutos se exprime el sólido (utilizar guantes) para extraer la
mayor cantidad de pigmentos posibles.

• La solución obtenida se filtra por gravedad (utilizando un embudo con papel de filtro o
algodón), recogiéndose en una ampolla de decantación.

• A la ampolla se le adicionan 10 mL de solución de cloruro de sodio al 0,1%, se extrae, se

separan las fases y se reserva la fase orgánica.

• El extracto de color verde intenso se seca con una punta de espátula de sulfato de sodio
anhidro.

• Finalmente se comprueba la cantidad de componentes por CCD.

69
Parte experimental

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Parte experimental

71
Parte experimental

72