BASES CELULARES Y

MOLECULARES DE LAS
NEOPLASIAS
HEMATOPOYÉTIACAS
( LEUCEMIAS)

M.C. ADRIANA GONZÁLEZ FLORES

 NEOPLASIAS HEMATOPOYETICAS
(LEUCEMIAS)
• La leucemia resulta de la expansión clonal no
controlada de células progenitoras inmaduras
linfoides o mieloides que están bloqueadas en
un estado particular de diferenciación como
consecuencia de una mutación.
 CÁNCER Y
CARCINOGÉNESIS
 CÁNCER

El cáncer es un conjunto
de enfermedades en las
que el organismo
produce un exceso de
células malignas, las
cuales tienen un índice
de crecimiento y división
más allá de los límites
normales
 CARCINOGÉNESIS

 La carcinogénesis, sea cual sea su naturaleza,

se define como la transformación de células
normales en células malignas, que poseen
crecimiento incontrolado, capacidad de
metástasis y todas las características
morfológicas y biológicas de las células
tumorales.
 ETAPAS DE LA CARCINOGÉNESIS

1.INICIACIÓN
2.PROMOCIÓN
3.PROGRESIÓN
 1. ETAPA DE INICIACIÓN
 Agentes carcinógenos genotóxicos se unen
irreversiblemente al ADN celular

MUTACIÓN

activación de supresión de
oncogén antioncogén
 2. ETAPA DE PROMOCIÓN

En esta etapa
ocurren
mutaciones
adicionales que
brindan ventaja
selectiva a la
célula: SELECCIÓN
CLONAL
 3. ETAPA DE PROGRESIÓN
Etapa que se caracteriza por la existencia de NEOPLASIA
MALIGNA, claramente establecida de forma irreversible, que
puede presentar características de mayor agresividad:
 Adquisición de capacidad metastásica, ya que
producen proteasas que dañan la matriz
extracelular y permite la migración
 Resistencia farmacológica
 Producen sus propios factores de crecimiento
 Producen factores de crecimiento que promueven
la angiogénesis
 No presentan apoptosis
 Evaden el sistema inmune
 Proceso de la
carcinogénesis
 CONCEPTOS IMPORTANTES
Son genes incluidos en el
genoma humano normalmente
que regulan el crecimiento y la
proliferación celular (CICLO
Protooncogenes CELULAR), que al mutarse y
convertirse en oncogenes,
pueden provocar la
transformación de una célula
normal en una célula cancerosa.

Son las versiones mutadas de

Oncogenes los protooncogénes o
sobreexpresados debidos a una
mutación
PROTOONCOGENES
 Oncogén RAS
RAS Codifica una proteína de unión con GTP (funciona
como un interruptor de apagado para una vía de
señalización clave en el control de la proliferación
celular)
Mutación de RAS codifica una proteína en la que no
puede estimularse la actividad de GTPasa
(Deja a la molécula en su forma activa unida a GTP
que envía señales de proliferación continua por la
vía )
 Genes que
controlan o
GENES SUPRESORES inhiben el
DE TUMORES
(ANTIONCOGENES)
crecimiento,
división celular y
diferenciación
celular.
GENES SUPRESORES DE TUMORES
GUARDIAN
CELULAR
FACTORES DE
TRANSCRIPCIÓN
 CAUSAS DE MUTACIONES DE LOS
PROTOONCOGENES
Factores genéticos: enfermedades hereditarias que cursan con
alteraciones cromosómicas (fragilidad o inestabilidad) como la
anemia de Fanconi o Sx de Down (aumento del riesgo 10-20
veces de leucemias linfoblásticas).

Factores infecciosos: VEB está relacionado con LAL-L3, el HTLV-1

está relacionado con la leucemia T del adulto.

Factores físicos: radiaciones ionizantes.

Factores químicos: alquilantes (melfalán, clorambucil), benceno

(Ej. industria del calzado), cloranfenicol, inmunosupresores
(post-trasplantados renales).
 La carcinogénesis química
es el mecanismo de
acción habitual de las
drogas utilizadas en la
quimioterapia.
MECANISMOS DE ACTIVACIÓN DE LOS
PROTOONCOGENES
MUTACIÓN PUNTUAL: Cambio de una base por otra.

TRANSLOCACIÓN: Común en las neoplasias. Puede haber

2 mecanismos:
1) Fusión de partes de 2 genes para formar un gen
quimérico que es disfuncional o que codifica una
proteína de fusión
2) Sobreexpresión de un gen normal

DELECIÓN (pérdida): Puede involucrar a una pequeña

parte del cromosoma, un brazo largo o corto o todo el
cromosoma o todo el cromosoma

ALTERACIONES EPIGENÉTICAS: Cambios que ocurren en

la transcripción: Metilación
GEN QUIMÉRICO
GENES QUIMÉRICOS
NEOPLASIAS HEMATOPOYÉTICAS
(LEUCEMIAS)
Y SU DIAGNÓSTICO
 NEOPLASIAS HEMATOPOYÉTICAS
Las neoplasias hematológicas forman un grupo de enfermedades que
provienen de la expansión clonal de células hematopoyéticas. Se
generan a partir de mutaciones

Diagnóstico
Citogenético/molecula
Morfológico Citoquímico Inmunológico r
SE PUEDEN CLASIFICAR CON BASE EN SU TIEMPO DE EVOLUCIÓN

NEOPLASIAS
HEMATOPOYÉTICAS

AGUDAS CRÓNICAS

Corto tiempo de Largo tiempo de

evolución. evolución.
Presencia de blastos Presencia de células
maduras
 MANIFESTACIONES CLÍNICAS
LEUCEMIAS AGUDAS
CANSANCIO, PALIDEZ, TAQUICARDIA, ANEMIA NORMO-
PÉRDIDA DE PESO Y APETITO NORMO
PETEQUIAS, EQUIMOSIS, TROMBOCITOPENIA
EPÍXTASIS, HEMORRAGIAS
Desbalance en
INFECCIONES RECURRENTES maduración y
funcionalidad de
leucocitos
MEGALIAS Y ADENOPATÍAS Infiltración de
células leucemicas a
Otros: fiebre, dolor
tejidos u órganos
óseo,CID, ETC
 Datos Bioquímicos
• Incremento de los niveles séricos de ácido úrico y
deshidrogenasa láctica.
• La presencia de blastos en el LCR < 5% de los pacientes.
DIAGNÓSTICO ASPIRADO DE MEDULA
ÓSEA
ASPIRADO DE MÉDULA ÓSEA
CRITERIOS DIAGNÓSTICOS
DIAGNÓSTICO

MORFOLOGÍA

CITOGENÉTICA
¿CÉLULA
BIOLOGÍA CITOQUÍMICA
PATOLÓGICA?
MOLECULAR

INMUNOFENOTIPO
 CLASIFICACIÓN FAB
• Clasificación FAB ( French-American-
British)

Basada en la morfología, la Citoquímica y el

nivel de maduración de los blastos.
CLASIFICACIÓN DE LEUCEMIAS AGUDAS FAB
A raíz del desarrollo de tecnologías como la citometría de
flujo y las técnicas moleculares, la clasificación de la FAB
resulta ineficiente

La clasificación de la Organización Mundial de la Salud

(OMS) de las leucemias agudas incorpora e interrelaciona
morfología, citogenética, genética molecular y
marcadores inmunológicos (fenotipo inmunológico) en
un intento por construir una clasificación aplicable
universalmente y válida para el pronóstico.
CLASIFICACIÓN DE L.
AGUDAS MIELOIDES
OMS
CLASIFICACIÓN DE L.
AGUDAS MIELOIDES
OMS
CLASIFICACIÓN OMS L. AGUDAS LINFOIDES
 CITOQUÍMICA

Fundamento no enzimático Fundamento enzimático

PAS: HIDRATOS DE MPO
CARBOONO
PERLS: Fe HEMOSIDERINA FOSFATASA ALCALINA
LEUCOCITARIA
NEGRO SUDAN B: LÍPIDOS ESTERASAS
FOSFATASA ÁCIDA
RESISTENTE A TARTRATO
MPO: Mieloperoxidasa
SBB: Negro Sudán
PAS: Acido peryódico Schiff
ANAE: Alfa naftil- acetato-
estererasa
ANAE/NAF: ANAE con
inhibición con NaF
CAE: Cloroaceato esterasa
 MIELOPEROXIDASA

La MIELOPEROXIDASA es una enzima segregada en el RER de donde

pasa al aparato de Golgi para quedar localizada en los gránulos primarios
o azurófilos de neutrófilos y de sus precursores, así como en gránulos
azurófilos de los monocitos.
La mieloperoxidasa en los gránulos eosinófilos es RESISTENTE A
CIANURO, mientras que la de neutrófilos y monocitos es sensible.
FUNDAMENTO:
Se basa en la acción oxidante de la enzima peroxidasa
sobre un sustrato en presencia de peróxido de hidrógeno,
generando un color azul o marrón según el sustrato.
Sustratos: bencidina, diaminobencidina, etc.
 RESULTADOS
El PRODUCTO DE REACCIÓN ES UN COLOR AZUL O MARRÓN Y GRANULAR.

Los eritrocitos y su progenie muestran una tinción citoplasmica difusa de color

marrón. Se considera negativa.
Los MIELOBLASTOS MAS PRIMITIVOS son negativos; la positividad aparece
progresivamente a medida que madura hacia promielocito con un patrón granular. EL
PROMIELOCITO Y EL MIELOCITO SON LAS CÉLULAS QUE MAS INTENSAMENTE SE
TIÑEN
TINCIÓN DE MIELOPEROXIDASA

MONOCITO

NEUTRÓFILO
Tinción de Wright Tinción de MPO

MISMO PACIENTE
RESULTADOS
MIELOPEROXIDASA EN LEUCEMIAS
 TINCIÓN WRIGTH CITOQUÍMICA CITOMETRIA DE FLUJO

M
M0 P
O

M
M1 P
O

M
M2 P
O

M
M3 P
O
 TINCIÓN WRIGTH CITOQUÍMICA CITOMETRIA DE FLUJO

M4

M5

M6

M7
 REACCIÒN DE PEROXIDASA
INMUNOFENOTIPO
El inmunofenotipo es un estudio que se realiza mediante un
citometro de flujo. Se puede realizar en cualquier espécimen
que permita tener una suspensión celular.
 ESTERASAS

FUNDAMENTO:
Son enzimas que hidrolizan los ésteres simples de
cadena corta en ácidos y alcoholes.

ESTERASA ESPECÍFICA ESTERASAS ESPECÍFICAS

 ESTERASAS
ESTERASAS ESPECÍFICAS: CLOROACETATO ESTERASA (CAE)

El sustrato es hidrolizado por la enzima cloroacetato esterasa, en

presencia de una sal diazóica dando como resultado un
azocolorante insoluble: el Naftol, el cual forma depósitos de color
rojizo en la zona de actividad enzimática

Ontogénicamente aparece después de la LAS LÍNEAS MONOCITICAS,

ERITROIDE Y LINFOIDE SON
MPO, por lo que es menos sensible para NEGATIVAS PARA CAE
los blastos muy inmaduros
 RESULTADOS EINTERPRETACIÓN (CAE)

El producto de la reacción es ROJO BRILLANTE.

Su positividad se restringe a las células de las
series de los neutrófilos y mastocitos.
La actividad de la CAE citoplasmática aparece a medida que los
mieloblastos maduran a promielocitos. La positividad en el
mieloblasto es rara, pero promielocitos y mielocitos se tiñen
intensamente, llenándose el citoplasma del color de la reacción.

En la L. promielocitica aguda las

células muestran una tinción
citoplasmica masiva

CAE +
 ESTERASAS INESPECÍFICAS

SUSTRATOS:
 α-NAFTIL-ACETATO ESTERASA (ANAE)
FUNDAMENTO: La actividad de de
la α-Naftil esterasa se detecta al
incubar la muestra en acetato de
α.naftil en un pH alcalino. Como
resultado de la actividad de la
esterasa hay una hidrólisis
enzimática de los enlaces de éster y
se liberan compuestos de naftol
libre, el cual se acopla
inmediatamente con una sal de
diazonio para formar pigmento
insoluble y visible en el sitio de la
acción de la enzima

La actividad enzimática se manifiesta en forma de gránulos

pequeños de color café rojizo o marrón disperso en toda la
célula positiva.
ANAE POSITIVO FUERTE: Monocitos y precursores monocíticos, macrófagos o
histiocitos.
ANAE NEGATIVO: en granulocitos.
 ACIDO PERYÓDICO DE SCHIFF

Se basa en la ruptura de los

enlaces -C-C- presentes en los
carbohidratos por la acción del
ácido peryódico, potente
agente oxidante, liberándose
grupos aldehído que al
combinarse con el reactivo de
Schiff dan un compuesto de
color rojo púrpura intenso.
 RESULTADOS
SERIE GRANULOCÍTICA BASÓFILOS NORMALES: SERIE ERITROIDE NORMAL:
NORMAL: (+) Difusa en (+) Con patrón lacunar o NEGATIVA
toda la serie mieloide (- ) hasta en un 50%

ERITROLEUCEMIA: (+)
PLAQUETAS: (+) Con PATRÓN LACUNAR
patrón DIFUSO
PAS POSITIVO EN LLA
Leucemia / linfoma linfoblástico B con
anomalías genéticas recurrentes
Leucemia / linfoma linfoblástico
B con t(9;22)(q34.1;q11.2); BCR-ABL 1

Linfoblasto de estirpe B con vacuolas

citoplasmáticas. En el cuadrante
superior derecho se observa otro
linfoblasto del mismo paciente en el
que se demuestra que las vacuolas
contienen material PAS positivo
 DIAGNÓSTICO INMUNOLÓGICO
• El diagnóstico inmunológico se fundamenta en la detección
de antígenos celulares (de membrana o intracelulares) que
caracterizan a una población de células por medio del uso de
anticuerpos monoclonales altamente específicos y de la
Citometría de Flujo.

ANTÍGENOS
CELULARES AC
(CD) MONOCLONAL

GENOTIPO
FENOTIPO
 DIAGNÓSTICO INMUNOLÓGICO

CD = CLUSTER OF DIFERENTIATION
Protocolos para la identificación de moléculas de superficie en
las células.
Esta nomenclatura fue establecida en 1982
 Antígeno = CD

CD71

Anticuerpo utilizado:
Anti CD71 conjugado
con un fluorocromo
La expresión de los CD nos pueden informar
distintos aspectos sobre la célula

LINAJE O ESTIRPE CELULAR

MADURACIÓN

ACTIVACIÓN
 CD (antígenos) de Linaje
LINAJE LINFOIDE T CD3, CD2
LINAJE LINFOIDE B CD19, CD20, CD79a
LINAJE MIELOIDE CD13, CD33, MPO
a. DIFERENCIACIÓN CD14
MONOCÍTICA
a. DIFERENCIACIÓN CD15
GRANULOCÍTICA
LINAJE PLAQUETARIO CD41, CD42a, CD61
LINAJE ERITROIDE CD71 CD235a
 CD (antígenos) de Inmadurez
CD34 Célula madre
CD117 Célula mieloides
HLA-DR Células activadas
Tdt (Desoxinucleotidil Blastos Lifoide B o T
transderasa terminal)
CD45 Pan leucocitario
HEMATOPOYESIS: FENOTIPO NORMAL
MEADURACIÓN
LINFOIDE B

MEADURACIÓN
LINFOIDE T
MEADURACIÓN
MIELOIDE
(NEUTROFILOS)

MEADURACIÓN
MIELOIDE
(MONOCITO-
MACROFAGO)
MEADURACIÓN
ERITROIDE
AC MONOCLONAL
CONJUGADO CON
FLUOROCROMOS
L. AGUDA LINFOBLASTICA COMUN
DE PRECURSORES B (II)

CD10+, CD19+, CD20+/- CD34+/-,

CD45+/-, CD79a+ Y HLA-DR+
L. AGUDA LINFOBLASTICA
T

CD2+, CD3-, CD3c+/-,

CD4+, CD5+, CD7+,
CD34-, CD45+/-
 CLASIFICACIÓN
INMUNOLÓGICA
LEUCEMIAS
AGUDAS LINFOIDES

CLASIFICACIÓN
INMUNOLÓGICA
LEUCEMIAS
AGUDAS
MIELOIDES
EL FENOTIPO INMUNOLOGICO
• El informe de un fenotipo consiste en
describir las características de expresión
antigénica de la población neoplásica y
clasificarla por ESTIRPE CELULAR Y GRADO DE
MADUREZ, sin embargo no se puede utilizar
el fenotipo inmunológica par hacer
diagnóstico. Es una prueba complementaria.
CITOGENÉTICA Y BIOLOGÍA
MOLECULAR
CITOGENÉTICA

Parte de la genética que estudia los cromosomas

y las enfermedades relacionadas causadas por
un número o una estructura anormales de los
mismos.

Se realiza en MÉDULA ÓSEA CON HEPARINA

Se estimula la mitosis, cuando
están en metafase, lisis celular

CARIOTIPO
Metafase
NORMAL CROMOSOMA
FILADELFIA
CITOGENÉTICA:
Estudio de los cromosomas, su estructura y patrón
hereditario

CITOGENÉTICA
CONVENCIONAL CARIOTIPO

CITOGENÉTICA FISH
MOLECULAR PCR

Se fundamenta en la capacidad que poseen los ácidos

nucleicos para hibridarse y permite detectar secuencias
especificas de adn
 HIBRIDACIÓN IN SITU POR FLUORESCENCIA
(FISH)

La técnica consiste en preparar SONDAS

cortas secuencias de DNA de una
sola hebra, llamadas SONDAS, que
son complementarias de las
secuencias de DNA que se quieren
marcar y examinar.
Son secuencias cortas de ADN de
una sola hebra, que son
complementarias de las
secuencias de ADN que se
quieren marcar y examinar.

Es muy utilizada en la detección de

anomalías cromosómicas.

Alta sensibilidad y especificidad

FUNDAMENTO
 APLICACIONES DE FISH

• Detecta anomalías: Aneuploidía, la pérdida de una región cromosómica,

un cromosoma entero o para monitorizar la progresión de una aberración.

• En el diagnóstico de una enfermedad genética.

• FISH se puede aplicar a la investigación como: el mapeo de genes,

identificación de nuevos oncogenes que contribuyen a diversos tipos de
cáncer.
ANORMALIDADES CROMOSOMICAS
 APÉNDICE
Nomenclatura de alteraciones
cromosómicas

EJEMPLO:
Translocación recíproca: t (8;21)(q24;q32)
Indica que los cromosomas involucrados son el 8 y 21 y los puntos de ruptura
estan 8q24 y 21q32