Universidad Interamericana de Panamá

Facultad Ciencias de la Salud

Escuela de Enfermería y Farmacia

Bioquímica
601-00006

“Actividad Enzimática”

Integrantes:

Burgess, Yazmin (8-841-1190)

Chan, Angela (8-963-1597)

Montenegro, Sthephany (2-745-1905)

Muñoz, Aurora (8-973-465)

Trejo, Manuel (6-720-861)

Zhu, Jennifer (8-975-1703)

Presentado para: Profesor Antonio Bruno

13 de marzo del 2021

Introducción:

Los enzimas son proteínas que catalizan reacciones químicas en los seres
vivos. Los enzimas son catalizadores, es decir, sustancias que, sin consumirse en una
reacción, aumentan notablemente su velocidad. Cada reacción química necesita una
enzima para que se realice, es decir, todo lo que se transforma lo hace gracias a una
enzima. Cada enzima actúa sobre una sustancia concreta, como una llave y una
cerradura.

Las enzimas son indispensables para la vida y catalizan alrededor de 4000 reacciones
químicas conocidas, siempre que sean estables las condiciones de pH, temperatura o
concentración química, ya que las enzimas, al ser proteínas, pueden también
desnaturalizarse y perder su efectividad.

La mayoría de las enzimas se componen de proteínas globulares de tamaño muy

variable: desde monómeros de 62 aminoácidos, hasta enormes cadenas de alrededor
de 2500. Sin embargo, apenas unos pocos de ellos son los involucrados directamente
en la catálisis de la reacción, conocidos como centro activo.

La secuencia en que se ensamblen todos estos aminoácidos determina la estructura

tridimensional de la enzima, lo cual dictamina también su funcionamiento específico. A
veces esta estructura también posee sitios para atraer cofactores, es decir, otras
sustancias cuya intervención es necesaria para producir el efecto buscado.

Las enzimas son altamente específicas, es decir, no reaccionan con cualquier cosa ni
intervienen en cualquier reacción. Tienen un cometido bioquímico muy puntual y
preciso, que llevan a cabo con un porcentaje bajo de errores.
Objetivos:

1. Observar las distintas reacciones que presentan las enzimas.

2. Comprobar la acción de la temperatura, el pH y sustancias sobre la actividad
enzimática.
3. Determinar la especificidad enzimática.
Materiales:

Reactivos y materiales:

 Catalasa
 Amilasa
 Peróxido de hidrogeno (H2O2)
 Hidróxido de sodio (NaOH)
 Ácido clorhídrico (HCl)
 Cloruro de sodio (NaCl)
 Lugol
 Biuret
 Lactosa
 Almidón
 Triptosa
 Buffer pH4
 Buffer pH7
 Buffer pH10
 Tubo de ensayo
 Hígado
 Papa
 Agua
 Agua destilada
 Saliva
 Pipeta Pasteur
 Pinzas
 Beaker
 Plancha de calentamiento
 Termostato
 Resumen del Procedimiento:

REACCIÓN CATALASA

Que es Procedimiento

Es una enzima que se encuentra en las Utilizando 3 tubos de ensayo junto al trozo
células de los tejidos animales (hígado) y de hígado, el tubo 1 se incuba en frio por 10
vegetales (papa y tomate). La función de minutos, el tubo 2 incubar a 100°c durante
esta enzima es catalizar la 10 minutos, y el tubo 3 incubar en baño
descomposición del peróxido de maría a 37°c durante 10 minutos es decir a
hidrogeno, compuesto producido durante (temperatura corporal) se colectan los 3
el metabolismo celular. tubos, agregándole 1ml de peróxido de
hidrogeno sin tocar la boquilla del tubo.

 Tubos de ensayo Observación

 Trozo de hígado
 Peróxido de hidrogeno
Materiales
Se observan que en el tubo 1 y 3 hay acción
de la catalasa, en el 3 hay mayor acción por
Reactivos la temperatura corporal, y el tubo 1 la
reacción es más lenta, en el tubo 2 no hay
reacción debido a que se presenta una
desnaturalización completa de la catalasa.

Esto depende de las características que

sometamos el tejido que contiene la
catalasa.

.
 Identificación de la catalasa

Reactivos Materiales

 Peróxido de hidrogeno  Papa

 Hígado
Procedimiento
 Agua destilada
 Tubo de ensayo
Se rotulan 4 tubos con papa triturada, papa en cuadro,
hígado triturado, e hígado en cuartitos, y otro tubo con agua.  Agua
Se coloca el primer tubo papa en cuadritos y el segundo  Gradilla de madera
papa triturada. Se coloca en el tercer tubo hígado en
cuadritos y el cuarto tubo hígado triturado. En el tubo número
5 se coloca 1 ml de agua destilada.
Colocar 1 ml de agua oxigenada en cada uno de los tubos.

Resultados

¿Qué tubos esperas que den positivo?

El tubo de ensayo 2 y el tubo de ensayo 3
¿Qué muestras esperas que den un mayor burbujeo? ¿Por qué?
Esperaba que la muestra #3 (hígado triturado) diera un mayor burbujeo porque la catalasa que se
encuentra en la muestra estaba más expuesta.
¿En dónde es mas rico la catalasa hígado o papa?
La actividad catalítica es más abundante en el hígado, ya que el hígado contiene una alta cantidad de
peroxisomas, las cuales se encargan de romper los enlaces que se encuentras en el agua oxigenada.
 Reutilización de la catalasa

Materiales Reactivos

 Tubo de ensayo  Peróxido de hidrogeno

 Pipetas
Procedimiento

Con una pipeta sacamos 1 ml de sobrenadante donde se observa qué hay

presencia de catalasa, luego se coloca en un tubo limpio rotulando con una R o
reutilizando. Se añade 1 ml de agua oxigenada.

Resultado

Se esperaba que diera positivo ya que las enzimas se pueden

reutilizar. Las enzimas no son reactivos y no se gastan durante la
reacción. Una vez que una enzima se une a un sustrato y cataliza la
reacción, es liberada sin cambios, y se puede reutilizar en otra
reacción.
 Identificación de la amilasa

Materiales Reactivos

 Tubo de ensayo  Lugol

 Saliva  Almidón
 Biuret
 Lactosa
Procedimiento

Se coloca en un tubo de ensayo 2 ml de solución de almidón al 1% rotulado como almidón.

En otro tubo de ensayo se colocan 2 ml de la solución de almidón al 1%, se adiciona aproximadamente 2
ml de saliva, se agita y se deja reposar durante 25 minutos aproximadamente
Se agregan 2 gotas de Lugol a cada uno de los tubos.

Resultado

Reacción del almidón con la saliva

La saliva humana contiene entre 0 y 3 mg/ml de una enzima llamada amilasa la cual es capaz de
romper los enlaces que unen las moléculas de glucosa en el almidón. Entonces, con esta reacción se
espera que la amilasa degrade el almidón dando lugar a la formación de azúcares más sencillos.

Prueba de Lugol
Se realiza una prueba de Lugol para reconocer la presencia de almidón, porque esta sustancia
adsorbe el yodo produciendo una coloración azul intensa, coloración que desaparece al calentar,
porque se rompe la estructura que se ha producido, pero vuelve a aparecer al enfriar

¿Cuándo la prueba de Lugol es positiva?

La prueba de Lugol es positiva cuando se produce una coloración azul intensa.

¿Cuál es la temperatura y pH óptimo de la amilasa?

La amilasa es completamente estable a una temperatura de 60°C y tiene un pH óptimo entre 5.0-7.0.
Discusión:

Preguntas del Video 1:

A. Identificación de catalasa

Tabla de índice de reacción

Tubo 1 Tubo 2 Tubo 3 Tubo 4 Tubo 5

Control Papa en Papa Hígado en Hígado

(Agua) cuadritos triturada cuadritos triturado

índice de 0 1 2 3 4
reacción

0= No hay reacción.

1= Reacción muy lenta y con pocas burbujas.

2= Reacción lenta y con burbujas.

3= Reacción rápida con bastantes burbujas.

4= Reacción muy rápida con muchas burbujas.

1. ¿Qué tubos esperas que den positivo?

El tubo de ensayo 2 y el tubo de ensayo 3

2. ¿Qué muestras esperas que den un mayor burbujeo? ¿Por qué?

Esperaba que la muestra #3 (hígado triturado) diera un mayor burbujeo porque
la catalasa que se encuentra en la muestra estaba más expuesta.

3. ¿El hígado y la papa son ricos en catalasa? ¿En cual de los dos es más
abundante su actividad?
Tanto la papa como el hígado tienen altas cantidades de catalasa, significa que
es un poderoso antioxidante, que evita la oxidación de los productos químicos.
La actividad catalítica es mas abundante en el hígado, ya que el hígado contiene
una alta cantidad de peroxisomas, las cuales se encargan de romper los enlaces
que se encuentras en el agua oxigenada.
4. ¿Cuál es la función de la catalasa hepática?
La función de la catalasa hepática es descomponer el peróxido de hidrogeno en
H2O y O2.

- Reutilizando la enzima:
1. ¿Esperas que dé positivo nuevamente?
Si ya que las enzimas se pueden reutilizar. Las enzimas no son reactivos y no se
gastan durante la reacción. Una vez que una enzima se une a un sustrato y
cataliza la reacción, es liberada sin cambios, y se puede reutilizar en otra
reacción.
- Usemos calor y pH:
Qué resultados obtendríamos si hiciéramos el siguiente experimento
Usar calor y pH.
Hígado en cuadros + 1mL NaOH
Hígado en cuadros + 1mL HCL
+ 1mL H²O²
Resultados
Hígado triturado Hígado triturado
HCL 1N 1ml No ocurre reacción
NaOH 1N No ocurre reacción 1ml
H²O² 1ml 1ml

1-Esperaría que la reacción fuese la misma?

No ocurre la misma reacción.
¿Cuál sería el índice de la reacción?
R: El índice de reacción sería devastador ya que si mezclamos ácido clorhidrato
con agua oxigenada ocurre la formación de cloro elemental y ocurre un medio
ácido.
2-Cuál es el pH óptimo de la catalasa?
R: está en torno a 7,5 y cuando el pH de la solución es muy básico o muy ácido (
1,4/ 11,76) es cuanto la proteína pierde su actividad enzimatica.
 3-Como crees que en un aumento de pH (básico -NaOH) una disminución
(acido-HCL) afecta a la estructura de la catalasa y luego a su funcion?

Reutilización de la catalasa
* Con una pipeta sacar 1mL del sobrante de uno de los tubos donde Ud.
Considere que se observó la presencia de catalasa en experimento anterior y
coloquen en un tubo limpio, titulado como R reutilizado.
* Añadir un 1mL de agua oxigenada
* Observamos la reacción
¿Espera que se positivo nuevamente? ¿Esperarías que la reacción fuese la
misma? ¿Cuál sería el índice de reacción?
Si debe tener la misma reacio y ser positiva ya que las enzimas se reutilizan y
una vez se une un sustrato y cataliza la reacción es quebrada sin cambios.
¿Cuál sería el índice de reacción?
2-Cual es la temperatura óptima de la catalasa?
R: es de 37 a 40 grados C. Con un máximo en 37 grados C.
3- Como crees que la temperatura de 100 grados C. Afecta la estructura de la
catalasa y luego su función.
R: A temperaturas baja se desactivaría la acción, a mayor temperatura ocurre la
aclaración y a temperaturas altas desnaturaliza la enzima o catalasa, no hay
reacción y se presenta una desnaturalización completa de la catalasa por el
aumento del calor.
- Identificación de la Amilasa:
1. ¿Qué resultado espera obtener luego de la reacción del almidón con la
saliva?

La saliva humana contiene entre 0 y 3 mg/ml de una enzima llamada amilasa la

cual es capaz de romper los enlaces que unen las moléculas de glucosa en el
almidón. Entonces, con esta reacción se espera que la amilasa degrade el
almidón dando lugar a la formación de azúcares más sencillos.

2. ¿Por qué hacer una prueba de lugol? ¿Cuándo la prueba de lugol es

positiva?
Se realiza una prueba de lugol para reconocer la presencia de almidón, porque
esta sustancia adsorbe el yodo produciendo una coloración azul intensa,
coloración que desaparece al calentar, porque se rompe la estructura que se ha
producido, pero vuelve a aparecer al enfriar. La prueba de lugol es positiva
cuando se produce una coloración azul intensa.

3. ¿Cuál es la temperatura y pH óptimo de la amilasa?

La amilasa es completamente estable a una temperatura de 60°C y tiene un pH

óptimo entre 5.0-7.0

4. ¿Para qué se usa una prueba de amilasa en sangre y orina?

La prueba de amilasa en la sangre se usa para diagnosticar o vigilar problemas

del páncreas como pancreatitis (inflamación del páncreas). Los resultados de
amilasa en la orina pueden ayudar a diagnosticar trastornos del páncreas y de
las glándulas salivales. Una o ambas pruebas pueden usarse para vigilar los
niveles de amilasa en personas tratadas por trastornos pancreáticos o de otro
tipo.

5. ¿Cuándo un paciente requiere una prueba de amilasa en sangre o en orina?

El médico indica un análisis de amilasa cuando sospecha que puede haber un

problema en el páncreas, como una pancreatitis (inflamación del páncreas),
cálculos o una obstrucción en el conducto que transporta la amilasa y otras
sustancias del páncreas al intestino delgado. Los síntomas relacionados con una
afección pancreática suelen ser dolor abdominal, fiebre, pérdida del apetito o
náuseas.
El análisis de amilasa también puede utilizarse para controlar a los pacientes
con fibrosis quística (una afección genética en la cual una mucosidad espesa
obstruye las vías pulmonares y los conductos del sistema digestivo, lo que causa
infecciones en los pulmones y problemas para absorber nutrientes. En la fibrosis
quística, los niveles de amilasa en la sangre pueden aumentar cuando la
mucosidad obstruye los conductos pancreáticos que transportan las enzimas
que el intestino delgado necesita para digerir la comida correctamente.
 Preguntas de Discusión:

1. ¿Cuál es el efecto de la temperatura sobre la actividad enzimática?

R. En general, los aumentos de temperatura aceleran las reacciones químicas:
por cada 10ºC de incremento, la velocidad de reacción se duplica.
2. ¿Cuál es el efecto de las temperaturas altas sobre las enzimas?
R. Cuando está en una mayor temperatura la acción de la catalasa será más
rápida y esta se encuentra una óptima en temperaturas más altas y cuando las
temperaturas son extremadamente altas se desnaturaliza la enzima.
3. ¿Cuál es el efecto del cloruro de mercurio y del nitrato de plomo sobre la
enzima?
R. El cloruro de mercurio es un inhibidor enzimático irreversible así que por esta
razón la catalasa no reacciona de ninguna manera con el peróxido de
hidrogeno y el nitrato de plomo, el cual es una reacción más lenta de la
catalasa con el peróxido de hidrógeno, precipitan a la proteína (catalasa) al
ser metales pesados.

4. Investigar el pH óptimo de la pepsina, la amilasa salival, la fosfatasa alcalina y

las hidrolasas lisosómicas.
R.

pH
óptimo

Pepsina 2o3

Amilasa salival 6.9

Fosfatasa alcalina 9 o 10

Hidrolasa 4o5
lisosómica

5. Escribir 4 reacciones en que se genere H2O2 en la célula.

R. RH2 + O2 ——-> R+ H2O2

2 O2 + 2 H ——> H2O2 + O2

FMNH2 + O2 ——> H2O2 + O2

O2 + O2 + 2H ——> H2O2 + O2
Conclusiones:

Las enzimas son moléculas orgánicas que actúan como catalizadores de reacciones
químicas, es decir, aceleran la reacción. Estas enzimas cambian la velocidad de
reacción sin afectar su equilibrio, porque la enzima hace que la reacción química se
desarrolle más rápidamente. En estas reacciones, las enzimas actúan sobre moléculas
llamadas sustratos, y estos sustratos se convierten en diferentes moléculas llamadas
productos mientras que el sitio activo es la región más específica de la enzima donde
se unen con uno o más sustratos específicos. Existen factores que influyen de manera
más directa sobre la actividad enzimática como el pH, la temperatura y los cofactores.

La catalasa descompone el peróxido de hidrógeno en agua y oxígeno. El pH óptimo de

la catalasa está en torno a 7,5 y cuando el pH de la disolución es muy básico o ácido la
proteína pierde su actividad enzimática. El oxígeno liberado en la reacción producirá
burbujas, lo que indica que la prueba es positiva, mientras que en una reacción
negativa no ocurre ningún burbujeo y por lo tanto no habrá ningún cambio.

La amilasa es una enzima que se produce, sobre todo, en las glándulas salivales y el
páncreas, y que ayuda a descomponer los carbohidratos y los almidones en azúcar.
Esto es importante porque, con el tiempo, el azúcar se convierte en glucosa, la cual
estimula todos los procesos del organismo. Un análisis de amilasa mide la cantidad de
amilasa presente en la sangre. Una cantidad elevada de amilasa en sangre puede ser
un signo de que el páncreas está lesionado, irritado u obstruido.
Referencias Bibliográficas:

- La actividad enzimática. (2014). Brix Medical Science.

http://www.brix-lab.com/index.php/es/investigacion-2/119-la-actividad-enzimatica

- Briceño, K. (2018, 31 enero). 8 Factores que afectan la actividad enzimática.

Lifeder. https://www.lifeder.com/factores-actividad-enzimatica/

- Prueba de amilasa. (20 de Febrero de 2020). medlineplus. Recuperado el 15 de

Marzo de 2021, de

https://medlineplus.gov/spanish/pruebas-de-laboratorio/prueba-de-amilasa/

#:~:text=La%20prueba%20de%20amilasa%20en,en%20la%20sangre%20o

%20despu%C3%A9s

- QUÉ SON LAS ENZIMAS. (2 de Abril de 2012). conasi. Recuperado el 14 de

Marzo de 2021, de https://www.conasi.eu/blog/consejos-de-salud/que-son-las-

enzimas/
Anexos:

Reactivos y materiales, entre ellas las enzimas en estudio.

 Catalasa: La catalasa es una enzima perteneciente a la categoría de las

oxidorreductasas que cataliza la descomposición del peróxido de hidrógeno en
oxígeno y agua.

 Amilasa: La amilasa, es una enzima hidrolasa que tiene la función de catalizar

la reacción de hidrólisis de los enlaces 1-4 entre las unidades de glucosa al
digerir el glucógeno y el almidón para formar fragmentos de glucosa y glucosa
libre.

Reactivos

 Peróxido de hidrogeno (H2O2): Es el único agente germicida compuesta sólo

de agua y oxígeno. Al igual que la capa de ozono, mata organismos patógenos
por oxidación.
 Hidróxido de sodio (NaOH): Es un hidróxido cáustico usado en la industria en
la fabricación de papel, tejidos y detergentes. Además, se utiliza en la industria
petrolera en la elaboración de lodos de perforación base agua.

 Ácido clorhídrico (HCl): Es una disolución acuosa del gas cloruro de

hidrógeno. Es muy corrosivo y ácido. Se emplea comúnmente como reactivo
químico y se trata de un ácido fuerte que se disocia completamente en
disolución acuosa.

 Cloruro de sodio (NaCl): Es la sal común o sal de mesa, denominada en su

forma mineral como halita. Es una de las sales responsable de la salinidad del
océano y del fluido extracelular de muchos organismos.

 Lugol: Es una disolución de yodo molecular I₂ y yoduro potásico KI en agua

destilada.
 Biuret: Es el que indica la presencia de proteínas, péptidos cortos y otros
compuestos con dos o más enlaces peptídicos en sustancias de composición
desconocida. Está hecho de hidróxido potásico y sulfato cúprico, junto con
tartrato de sodio y potasio.

 Lactosa: Es un disacárido formado por la unión de una molécula de glucosa y

otra de galactosa. Se conoce también como azúcar de la leche.

 Almidón: Es una macromolécula que está compuesta por dos polímeros

distintos de glucosa, la amilosa y la amilopectina. Es el glúcido de reserva de la
mayoría de los vegetales.

 Triptosa: Es la fuente de nitrógeno, vitaminas, minerales y aminoácidos.

  Buffer pH4: Es una de las soluciones tampón más utilizadas, es
extremadamente estable y representa el punto intermedio en el rango ácido de
la escala de pH, ideal para aquellos que requieren una lectura precisa de ácido,
particularmente aquellos donde se espera que el pH sea ácido.

 Buffer pH7: Es una solución tampón alcalina. Las soluciones tampón alcalinas
se hacen comúnmente a partir de una base débil y una de sus sales.

 Buffer pH10: Es una de las soluciones tampón más utilizadas, es

extremadamente estable y representa el punto intermedio en el rango alcalino de
la escala de pH, ideal para aquellos que requieren una lectura precisa,
particularmente aquellos donde se espera que el pH sea alcalino.

Materiales

 Tubo de ensayo: Se utiliza para contener líquidos y sólidos, los

cuales se mezclan para preparar soluciones o se someten a diferentes pruebas
como a variaciones de temperatura.
 Hígado: Es uno de los órganos más importantes en cuanto a la actividad
metabólica del organismo, regula la mayoría de los niveles de sustancias
químicas de la sangre y secreta una sustancia denominada bilis.

 Papa: Es una especie herbácea perteneciente al género Solanum de la familia

de las solanáceas.

 Agua: Es una sustancia cuya molécula está compuesta por dos átomos de
hidrógeno y uno de oxígeno.

 Agua destilada: Es aquella sustancia cuya composición se basa en la unidad

de moléculas de H2O y ha sido purificada o limpiada mediante destilación.

 Saliva: Es un fluido líquido de reacción alcalina complejo, algo viscoso

producido por las glándulas salivales en la cavidad bucal.
 Pipeta Pasteur: Es similar a un cuentagotas, generalmente formada por un tubo
de vidrio con borde cónico. Sirve para hacer la transferencia de pequeñas
cantidades de líquidos.

 Pinzas: Sirven para sujetar los tubos de ensayo mientras se calientan o

manipulan.

 Beaker: Es un recipiente de vidrio borosilicato transparente de boca ancha y

forma cilíndrica. Es utilizado para calentar y mezclar sustancias y para formar
precipitados.

 Plancha de calentamiento: Es un pequeño aparato de sobremesa, portátil y

autónomo, que posee uno o más elementos de calefacción eléctrica, y que se
emplea para calentar recipientes con líquidos, de forma controlada.
 Termostato: Es un instrumento diseñado para el monitoreo y control de la
temperatura en laboratorios e industrias.