Enzima catalasa

En el organismo existe un sistema de proteccin antioxidante formado por enzimas y compuestos de bajo peso molecular. Una de las enzimas que interviene en la proteccin y, en consecuencia, en el mantenimiento del balance oxidante/antioxidante es la catalasa (CAT).

La catalasa es una enzima hemoproteica, que se caracteriza por poseer una estructura tetramrica, en la cual casa subunidad contiene un grupo Hem (Fe+3). Esta presenta en la mayora de las bacterias aerbicas estrictas, facultativas y anaerbicas aerotolerantes.

La catalasa EC 1.11.1.6 s una enzima que se encuentra en organismos vivos y cataliza la descomposicin del perxido de hidrogeno en oxgeno y agua. La catalasa manifiesta actividad de peroxidasa, cataliza la oxidacin de sustratos acoplada a la reduccin del perxido de hidrogeno, para formar agua y oxigeno molecular.

el perxido de hidrogeno es muy toxico para las bacterias. Generalmente los miroorganismos que carecen de citocromos tambin carecen de catalasa, as la mayora de las bacerias anaerobias no la poseen (Rodrguez Cavallini, Evelyn, 2005, p 217)

Para Elmer Koneman (2008) El perxido de hidrogeno se forma como uno de los productos finales de oxidacin del metabolismo aerobio e los hidratos de carbono. Si se permite que se acumule, resulta letal para las clulas bacterianas. La catalasa convierte el perxido de hidrogeno en agua y oxigeno segn la siguiente reaccin: 2H2O2 2H2 + O2

La catalasa es una de las enzimas ms abundantes en la naturaleza y se encuentra ampliamente distribuida en el organismo humano, aunque su actividad vara en dependencia del tejido; sta resulta ms elevada en el hgado y los riones, ms baja en el tejido conectivo y los epitelios, y prcticamente nulo en el tejido nervioso.

Para Jos M. Macarulla (1994) La catalasa a nivel celular se localiza en las mitocondrias y peroxisomas, excepto en los eritrocitos, donde se encuentra el citosol. Esta enzima es una metaloproteina tetramerica, cuyo peso molecular se encuentra en el rango de 210-280 kD. Consta de 4 subunidades idnticas que se mantienen unidad por interacciones no covalentes. Cada subunidad contiene un grupo prosttico de protoporfirina IX y el contenido protohmico y el hierro representan un 1,1% y 0,09% respectivamente en el peso molecular total de la enzima.

Velocidad de reaccin
La velocidad de reaccin es la velocidad a la que la reaccin procede hacia el equilibrio. Para una reaccin catalizada por una enzima, la velocidad es usualmente expresada como la cantidad de producto producido por minuto. La velocidad de reaccin esta gobernada por la barrera de energa entre los reactivos y los productos, en general, la energa debe ser aadida a los reactivos para sobrepasar la barrera de energa. Esta energa adicionada se llama energa de activacin y es recuperada cuando los reactivos sobrepasan dicha barrera y desciende al nivel de la energa de los productos.

Las enzimas pueden acelerar la velocidad de una reaccin. Las enzimas con catalizadores biolgicos. Los catalizadores aceleran la velocidad de las reacciones rebajando la barrera de la energa de activacin entre los reactivos y los productos. Para observar un diagrama de la barrera de la energa de activacin de una reaccin no catalizada y de una reaccin catalizada.

La temperatura puede tener un efecto importante sobre la actividad de las enzimas y las velocidades de reaccin. A bajas temperaturas, el aporte de calor usualmente aumenta la velocidad de una reaccin enzimtica, porque los reactivos tienes mayor energa y pueden alcanzar l nivel de la energa de activacin con mayor facilidad. Sin embargo si la temperatura se eleva demasiado, es posible que se desnaturalice la enzima, provocando la desorganizacin de sus estructura terciaria y la prdida de su actividad cataltica. Objetivo Pretendemos medir por medio de un dispositivo casero la velocidad de reaccin del oxigeno liberado mediante el experimento de encontrar la enzima catalasa en el hgado al aplicarle agua oxigenada, y mediante varias repeticiones, los datos de cuatro repeticiones sers plasmados mediante tablas y grficas para poder sacar un resultado llamado tasa de reaccin y comprobar el correcto funcionamiento del dispositivo, ayudados de la ecuacin de Michaelis-Menten P=x2-x1/y2-y1

Metodologa: Material utilizado para la prctica: y y y y y y y y 2 frascos para anlisis de orina 40 cm de manguera transparente Plastilina 1 palito de madera Agua 1 jeringa Agua oxigenada Hgado de pollo previamente machacado

Procedimiento: Tomar los frascos de anlisis y hacer 2 hoyos en las tapas de ambos de manera que la manguera pueda pasar por ah. Cortar un pequeo fragmento de la manguera para ponerlo de un frasco a otro y sellar con plastilina las orillas para evitar la filtracin o la fuga de gases. En uno de los frascos poner otro fragmento de manguera de 5 cm aproximadamente y sellar de igual manera. En el otro frasco colocar lo que sobra de manguera y sujetarla al palito de madera para mantenerla en forma vertical y marcarle medidas; de igual manera la entrada de la manguera ser sellada. Pegar los frascos a una

superficie lisa como una tabla de madera para que no se muevan ni provoquen desniveles en el experimento. Llenar el frasco con la manguera larga de agua y en el otro frasco colocar 10gr de hgado picado.

Modo de funcionamiento: Tomar 10ml de agua oxigenada con la jeringa y meterla en el extremo de la manguera del frasco que contiene el hgado picado, agregar lentamente 2ml de agua. Al agregar el agua oxigenada sta reaccionara con la enzima catalasa que se encuentra en el hgado de pollo, rompiendo as los enlaces del H2O2 liberndolos en forma de agua (H2O) y oxigeno (O2). Al salir el oxgeno de esta reaccin catalizadora buscara una via de escape, y al estar selladas hermticamente las salidas sta tendera a salir por la manguera que conecta al otro frasco, ah llegara y creara una presin en l, haciendo que el agua que se encontraba ah busque una ruta de escape del mismo modo que el oxigeno la busc en el otro frasco; el agua saldr por la manguera larga que tiene las medidas en ella y ah podremos ver la cantidad de oxigeno liberado en la reaccin en los intervalos de tiempo establecidos previamente.

Ttulo: Velocidad de reaccin enzimtica de la enzima catalasa Introduccin Por medio de un dispositivo casero pretendemos medir la velocidad de reaccin del oxigeno liberado mediante la reaccin de la enzima catalasa en el hgado al aplicarle agua oxigenada, y mediante varias repeticiones, los datos sern plasmados en tablas y graficas para poder obtener una tasa de reaccin y comprobar el correcto funcionamiento del dispositivo, todo este procedimiento es basado en la ecuacin de Michaelis-Menten P= x2-x1/y2-y1 Materiales: * 2 frascos de anlisis de orina * 40 cm de manguera transparente * Plastilina * 1 palito de madera * Agua *1 jeringa * 3 Hgados de pollo * 1 botella de agua oxigenada (H2O2)

Hiptesis: Vaso 1. El hgado, junto con el H2O2 van a reaccionar soltando oxgeno, lo que provocar una presin que empujar nuestra mano y calentar el fondo del vaso. Vaso 2. Al poner a reaccionar hgado molido con agua oxigenada, la enzima catalasa actuar ms rpido. Vaso 3. La reaccin ser mucho menor pues se le habrn restado propiedades al hgado debido a la coccin. Metodologa: 1. En el vaso 1, colocar una parte del hgado, vaciarle un poco de agua oxigenada y tapar inmediatamente con una mano la boca del vaso. 2. Cortar otro trozo de hgado casi del mismo tamao que el anterior, licuarlo, colocarlo en el vaso, verterle agua oxigenada y observar lo que sucede. 3. Hervir agua y colocar un pedazo de hgado nuevo, dejarlo all de 2 a 3 minutos. Sacar el trozo de hgado del agua, depositarlo en el vaso y agregar agua oxigenada. Observa la reaccin Vaso 1 Vaso 2 Vaso 3 Discusin. Durante el experimento Discusin. En este experimento utilizando el hgado crudo se pudo utilizamos el hgado molido, y de notar una reaccin de una igual manera que con el hgado velocidad acelerada, ya que la crudo se le agreg agua oxigenada. enzima catalasa se encontraba en El proceso de esta reaccin fue la parte externa del hgado y al ms rpido, ya que al estar molido entrar en contacto con el agua el agua oxigenada entra en oxigenada y sta al cubrir todo el contacto ms directo con la enzima hgado ocurra la reaccin catalasa y en mayor cantidad, rompiendo los enlaces de H2O2. provocando una reaccin ms Liberando el oxgeno y acelerada que la del hgado crudo. demostrndolo en la presin Tambin hubo liberacin de causada en el agua del otro energa trmica al fondo del frasco. recipiente y marcando una La velocidad y fue mayor en el velocidad de reaccin con las mismo intervalo de tiempo en medidas anteriormente puestas en comparacin con el hgado crudo. determinado intervalo de tiempo. El resto de la energa liberada fue expulsada en forma de calor en el fondo del frasco. Bibliografa: Horton, H. (1995). Bioqumica, Ed. Omega, Mxico. Discusin. En esta ocasin el experimento fue utilizando hgado cocido previamente. Al agregar el agua oxigenada no hubo reaccin alguna. Esto se debe a que debido a que fue previamente cocido las enzimas debieron haber muerto durante el proceso de coccin. La reaccin fue nula.

Conclusin: El experimento que llevamos acabo de la medicin del oxgeno liberado gracias al rompimiento de los enlaces de la enzima catalasa fue un xito yq que comprobamos que si funciona correctamente el dispositivo, de acuerdo con las grficas y los intervalos de tiempo, los cuales se diferencian entre 2 a 5 cm, no rebasando este lmite, por lo cual deducimos que el margen de error es mnimo, por lo que concluimos que la hiptesis se cumpli en cada caso.

Autoevaluacin: Delgado Loredo Ral Ricardo Flores Weyerstalh Alfredo Gallardo Rivera Jos Luis Rodrguez Leyte Leslie Yajarumi 10 10 10 10

Todos trabajamos equitativamente y satisfactoriamente, cumpliendo con los requisitos, cada uno de los integrantes del equipo.

Referencias:

Rodriguez Cavallini, Evelyn, 2005, Bacteriologa General, Editorial Universidad De Costa Rica. Elmer Koneman, Stephen Allen, 2008, Koneman diagnostico microbiolgico, Ed. Mdica Panamericana. Jos M. Macarulla, 1994, Bioqumica Humana, Ed. Reverte.