Material

• Gradillas.

• Mechero

• Trípode

• 2 varillas de vidrio

• 3 Tubos de ensayo 13x100

• 2 Pinzas de madera.

• 2 Beakers de 100 ml.

• 1 frasco gotero con peróxido de hidrógeno

• 5 ml de almidón al 1%. (chuño y agua destilada)

• 1 frasco gotero de Lugol.

• Trocitos de hígado de pollo.

• Trocitos de papa

• Arena fina.

• 3 vasos

Procedimiento:

Determinación de la enzima:

1. Primero, nos ponemos los implementos de bioseguridad, dentro de los

cuales están el guardapolvo, los guantes quirúrgicos, la gorra quirúrgica

y la mascarilla. Todo esto se lleva a cabo antes de la realización de la

actividad enzimática y de manipular los materiales, soluciones, entre

otros.

2. Después lavamos la papa, pelamos, y tenemos a la mano los siguientes

materiales: papa, hígado y arena fina. Luego cortamos en cubitos súper

pequeños el hígado y la papa, aproximadamente de 3 a 5 mm. Después

 los ubicamos en los tubos de ensayo, para entonces necesitamos tres

tubos de ensayos. Se llena solo la cuarta parte del tubo de ensayo, si

hay inconveniente, nos podemos ayudar con la bagueta.

3. Luego colocamos los tubos de ensayos ya listos en la gradilla, para

después con la pipeta polietileno graduada poder extraer 2ml de agua

oxigenada. Es aquí donde le agregaremos 2ml de agua oxigenada a

cada tubo de ensayo. Se puede apreciar aquí como aumenta la llama,

como una combustión que sucede gracias al oxígeno.

4. Ahora en la determinación de catalasa podemos observar cómo se

evidencia en el hígado y en menor proporción en la papa, está se

aprecia en el burbujeo que sucede al añadir el agua oxigenada. En el

caso de la arena fina, podemos ver qué no tiene la enzima, ya que no

presenta burbujeo (es inerte).

5. Entonces, vemos como la enzima (catalasa) está presente en las células

animal y vegetal, que se llevó a cabo.

Desnaturalización de la enzima (catalasa):

1. Primero trozamos pedacitos de hígado y papa, aproximadamente de

5mm, como en el anterior experimento. Luego colocamos en los tubos

de ensayo, los trozos correspondientes, para este experimento, solo

necesitamos dos tubos de ensayo. Es decir, en uno tendremos hígado y

el otro la papa, la cantidad es menor a la cuarta parte del tubo de

ensayo.

2. Después colocamos un baekaer con agua en la hornilla de laboratorio o

cocinilla eléctrica, es aquí donde colocaremos los tubos de ensayo

 (papa e hígado). Cuando visualicemos que ya se esté sancochando lo

sacamos.

3. Luego, echamos 2ml de agua oxigenada con la pipeta polietileno

graduada. En este nuevo experimento podemos ver que no hay

reacción como en el primer experimento, ya que, al perder la estructura

terciaria, pierde también la función y como consecuencia su función

catalítica, por lo que no podremos descomponer el agua oxigenada y no

se observará ningún tipo de reacción en la papa e hígado hervido, es

decir, no degrado.

Hidrólisis del almidón por acción de la amilasa:

1. Con los mismos protocolos de bioseguridad, en primer lugar, se debe

recolectar saliva, aproximadamente 10 cucharaditas o 20ml, esta

cantidad la medimos aproximadamente con el baekaer glass.

2. Para la recolección de saliva, la persona que lo dará, tendrá que lavarse

y enjuagarse la boca, después de esto, retener la mayor cantidad de

saliva y expulsarlo en el baekaer glass. Luego, separamos en un vasito,

la mitad de los 20ml de saliva. Después la saliva que está en el baekaer

glass la ponemos a calentar a baño maría en la cocinilla eléctrica.

Preparación de solución de almidón:

En un vaso ponemos aproximadamente 70ml de agua, luego

diluimos en él media cucharadita de almidón (harina de chuño),

luego lo agitamos bien or 1 minuto.

3. Luego en 3 vasos pequeños colocamos tres cucharaditas de la solución

de almidón preparada. Después agregamos al primero 2 gotitas de Lugol,

 al segundo toda la saliva a temperatura normal que reservamos, y al

tercero ponemos la saliva caliente. A los otros vasos que no recibieron

Lugol lo dejamos reposar 5 minutos, después de este tiempo, colocamos

2 gotas de Lugol al vaso 2 y 3.

4. Las conclusiones que hemos visto es que el almidón solo se pinta con el

Lugol, la que tiene saliva caliente también, sin embargo, la que tiene la

saliva a temperatura normal no se pinta o cambia de color. Entonces la

enzima esta desnaturalizada en el almidón y en la saliva cocida, hizo una

función enzimática. No hay acción de la amilasa salival.

Cuestionario
¿Por qué ocurre burbujeo en el ensayo de reconocimiento de la

catalasa?

En primera estancia, la catalasa es una enzima antioxidante, que al

tener contacto con peróxido de hidrogeno se encarga de destruirlo. Por lo tanto,

el burbujeo ocurre porque el hígado contiene grandes cantidades de enzimas y

al tener contacto con el agua oxigenada, separa el oxígeno del peróxido de

hidrogeno. Siendo así que se libera un gas, produciendo las burbujas.

La papa tiene pocas cantidades de catalasa, es por ello que en la

práctica se observó un burbujeo lento, mientras que en la arena no hubo

presencia de burbujas, dado a que no contiene catalasa.

¿Qué función cumple el lugol en el ensayo?

 La función del lugol se basa en identificar la presencia de almidón. La

saliva contiene la enzima amilasa, que el almidón descompone en azucares

simples. Por lo tanto, al añadir unas dos gotas de lugol en la saliva

desnaturalizada, observaremos que el lugol se unirá al almidón, formando una

coloración azul violeta intenso. Esto resulta ser una prueba simple que se

puede utilizar para determinar la actividad de la amilasa en la saliva.