T9-T10 ENZIMOLOGÍA

FACTORES QUE MODIFICAN LA ACTIVIDAD ENZIMÁTICA

La velocidad de una reacción catalizada por una enzimática depende de :
- La concentración de moléculas de sustrato (ecuación de Michaelis-Menten)
- La cantidad de enzima La Vo es proporcional a la concentración de enzimas , al menos
en un determinado rango .
- El pH
- La Tª
- La presencia de inhibidores

EFECTOS DEL pH
- Ph óptimo de actuación m, a valores superiore o
inferiores la velocidad disminuye
- pH del medio afecta :
- catálisis
- Unión de sustrato
- Conformación (estructura espacial ) de la
enzima

Succinato y centro activo de SDH

pH 7 : sise produce la unión pH2 : no hay interacción pH 13 : no hay interacción

EFECTOS DE LA Tª
Las enzimas poseen una temperatura óptima a la cual la
enzima presenta máxima eficiencia catalítica
Existen intervalo en el cual son estables
INHIBIDORES ENZIMÁTICOS
Inhibidores: pequeña moléculas químicas o iones que interfieren con las reacciones
ralentizando o deteniéndose
Importantes para el estudio de:
- Mecanismo de acción enzimática
- Especificidad de sustrato
- Naturaleza del centro activo
- .Identificación residuos fundamentales para la catálisis
Utilidad
- Determinación rutas metabólicas
- Medicina. Antibiótico
-
TIPOS

Reversibles: Unión no covalente de un inhibidor a la enzima

- Competitiva
- No competitiva
- Acompetitiva
Irreversibles: Unión covalente del inhibidor al enzima
Elementos naturales, toxinas específicas, venenos, iones, fármacos

inhibición reversible competitiva Unión del inhibidor al centro activo del enzima , compite con el
sustrato.

Kap= K con el inhibidor

Etanol → Acetaldehído

Formaldehído : Tóxico , te puedes quedar ciego

Una intoxicación por Metanol o por etilenglicol
se trata con Etanol .

Quimioterapia : metrotrexano , Tetrahidrofolato

- Inhibe síntesis de DNA
- Compite por la dihidrofolato reductasa

Agentes antibacterianos: Sulfamidas

- Compiten con el p-amino-benzoico, necesario para la síntesis de DA de bacterias.
Estatinas
- Inhiben HMG-COA reductasa, enzima limitante síntesis de colesterol.
Inhibición reversible no competitiva
Unión del inhibidor a un sitio del centro activo , no compite con el sustrato .
Nunca va a llegar a la velocidad máxima
ap= aparente
a= pendiente
azul = sin inhibidor
rojo = con inhibidor
Ic = varia la Km pero no la velocidad máxima
Inc= nunca llega a la velocidad máxima km es igual

INHIBICIÓN IRREVERSIBLE
Reaccionan con un grupo químico de la enzima , modificando covalentemente
Bloquean unión al sustrato
Inhiben actividad
Sus efectos dependen del tiempo de actuación el inhibidor
Por lo general son altamente tóxicos. Casi todos los inhibidores enzimáticos irreversibles son
sustancias tóxicas (naturales o sintéticas).
- Penicilina inhibe la síntesis de la pared bacteriana
- Aspirina inhibe la síntesis de PG
- Gases nerviosos: diisopropil fluorofosfato (DIFP), inhiben neurotransmisores
- Hg2+, Pb2+, CN, As

Fármacos antitumorales que actúan como análogos de la citidina .Inhibidores irreversibles del
metabolismo del DNA
- Citarabina
- Azacitidina
- Gemcitabina

REGULACIÓN DE LA ACTIVIDAD ENZIMÁTICA

1) Regulando la cantidad de enzima

presente en cada momento, bien aumentando/disminuyendo su síntesis, o
aumentando/disminuyendo su degradación o interviniendo a la vez sobre ambos fenómenos.
Regulación a largo plazo
Suele responder a cambios nutricionales y/o a la presencia de determinadas sustancias que
actúan a nivel de regulación génica.

2) Regulando o actuando sobre la actividad de las enzimas ya existentes en la célula lo que se

conoce como: Regulación a corto plazo. Este sistema de regulación permite dar respuestas
mucho más rápidas, prácticamente inmediatas, a los cambios experimentados por la célula, y
básicamente responde a algunos de los siguientes mecanismos:
- Mecanismos varios: inhibidores/activadores, variaciones de: pH, temperatura, ...,
disponibilidad de cofactores, etc.
- Mecanismos que implican cambios covalentes: Regulación por modificación covalente.
- Mecanismos que implican cambios conformacionales: Regulación alostérica.

Regulación alostérica
Son mayoritariamente proteínas oligoméricas, formadas por distintas subunidades (monómeros)
- Su actividad se regula en centro alostérico, a los que se unen distintos reguladores
(efectores o moduladores alostéricos) de manera reversible y no covalente

- Poseen sitios específicos de unión para el sustrato y para cada uno de los moduladores
alostéricos

- Suelen tener más de un modulador.

- cuando el regulador es el sustrato, el sitio de

regulación es el c. activo:
HOMOALOSTERISMO (Efector
HOMOTRÓPICO)

Efectores homotrópicos positivos: Cooperatividad positiva por el sustrato (la unión de la primera
molécula de sustrato favorece la unión de las siguientes)

- Como consecuencia se modifica la configuración del sitio activo de la enzima

aumentando o disminuyendo su actividad.

- Si el efector es una molécula distinta del sustrato: HETEROALOSTERISMO (Efector

HETEROTRÓPICO

Regulación alostérica:

a)Los enzimas alostéricos presentan b) alosterismo heterotrópico: pueden ser

cooperatividad positiva frente al sustrato activadores: estabilizan el estado R
(alosterismo homotrópico) y cinética inhibidores: estabilizan el estado T
sigmoidal.