PR 1-2 CINÉTICA ENZIMÁTICA 1

1) La reacción [CO2],
v0, (mmol/L)/s
CO2(g) + H2O(ℓ) → H+(ac) + HCO3-(ac) mmol/L
1.25 0.028
catalizada por la enzima anhidrasa carbónica, se
2.50 0.048
ha estudiado a pH = 7.1 y a una temperatura de 0.5
5.00 0.080
°C. Para una concentración inicial de enzima de 2.8 20.00 0.155
x 10-9 mol/L, las velocidades iniciales en función de
la concentración de CO2 son:
a) Determinar gráficamente KM y Vmáx, y explicar su significado según datos.
b) Calcular el número de recambio (kcat) de la anhidrasa carbónica.

SOLUCIÓN: Construir la Figura 1/v0 vs 1/[S], luego determinar Vmáx, KM y kcat.

[CO2], mmol/L v0, (mmol/L)/s 1/v0, [(mmol/L)/s]-1 1/[S], [(mmol CO2)/L]-1
1.25 0.028 35.7143 0.80
2.5 0.048 20.8333 0.40
5 0.08 12.5000 0.20
20 0.155 6.4516 0.05

Figura N° 3. 1/v0, [(mmol/L)/s]-1 vs 1/[S], [(mmol CO2)/L]-1

50.00

1/v0 = 39.0024 (1/[S]) + 4.7365

R² = 0.9993
40.00

30.00
1/v0, [(mmol/L)/s]-1

20.00

10.00

𝟏
=4.7365 (mmol/L)/s
𝐕𝐦á𝐱

0.00
-0.20 0.00 0.20 0.40 0.60 0.80 1.00
1/[S], [(mmol CO2)/L]-1

Vmáx = 1/4.7365 = 0.2111 (mmol/L)/s

KM = 1/0.1214 = 8.2372 mmol CO2/L
Número de recambio: kcat

Vmáx 0.2111 x 𝟏𝟎−𝟑 (mol/L)/s

𝐤𝐜𝐚𝐭 = = =75,393
[E]T 2.8 x10−9 mol de anhidrasa carbónica/L

Son 75,393 moléculas de CO2/s convertidas en HCO3-1 por cada molécula de anhidrasa carbónica.
CINETICA ENZIMÁTICA. ACCIÓN DE LA CATALASA SOBRE EL PERÓXIDO DE HIDRÓGENO
2) A 37.0 °C, empleando como sustrato 30 mL de peróxido de hidrógeno de las 4 [S], % w H2O2/v v0, mL de O2/min
muestras señaladas en la primera columna de la tabla adjunta y en cada ensayo 10 7.2
se empleó una fuente de catalasa de ≅ 1.00 g que se descompone en O2(g) y 8 6.6
agua. 6 5.9
a) Construir la gráfica de Lineweaver-Burk con los datos de la tabla adjunta.
4 4.8
b) Hallar los parámetros cinéticos Vmáx y KM de la referida cinética enzimática
y explicar el significado de cada una.
c) Construir la gráfica v0 vs [S], mostrar la ecuación de Henry-Michaelis-Menten y a través de un ejemplo dar a conocer su
utilidad.

a) Figura L-B: [S], % w H2O2/v v0, mL de O2/min 1/[S], (% w H2O2/v)-1 1/v0, (mL de O2/min)-1
10 7.2 0.10000 0.13889
8 6.6 0.12500 0.15152
6 5.9 0.16667 0.16949
4 4.8 0.25000 0.20833
Figura N° 6. 1/v0, (mL de O2/min)-1 vs 1/[S], (%w H2O2/v)-
0.30 1

0.25
1/v0, (mL de O2/min)-1

0.20

0.15

0.10
Falta completar la
0.05 1/v0 = 0.45996 (1/[S]) + 0.09327
ubicación de R² = 0.99967

1/Vmáx y -1/KM y 0.00

-0.30 -0.20 -0.10 0.00 0.10 0.20 0.30 0.40
hallar Vmáx y KM.
1/[S], (%w H2O2/v)-1

b) Vmáx y KM: 𝟏 KM 𝟏 1
= ([𝐒]) + (𝛼) Ecuación general
𝐯𝟎 Vmáx Vmáx

𝟏 𝟏
= 0.45996 ([𝐒]) + 0.09327 (𝛽) Ecuación específica
𝐯𝟎

A partir de (α): 10.7216

Vmáx = 1/0.09327 = mL O2/min (a)
A partir de (β): 4.9315
KM =10.7216x0.45996= % w H2O2/v (b)
A partir de (β): KM=0.45996/0.09327= 4.9315 % w H2O2/v (b)
(a) Velocidad límite máxima alcanzable para altas concentraciones de H2O2.
(b) Con dicha concentración de H2O2 se alcanza la mitad de la Vmáx, igual a 5.3608 mL O2/min

c) Figura vo vs [S], señalando las ubicaciones de Vmáx y KM. Utilidad: Curva corregida (o) v0 corr. para [S] de 0 al 40
v0, mL Figura
de O2/min
N° 7, v , mL O /min vs [S], % w H O /v
0 2 2 2
[S],14% w [S], %w H2O2/v v0 corr., mL O2/min
H2O2/v
12 𝑽𝒎á𝒙 = 10.7216 mL O2/min
10 7.2 0 0 0
108 𝐕𝐦á𝐱 6.6 40 2 3.0981
v0, mL O2/min

= 𝟓. 𝟑𝟔𝟎𝟖 𝒎𝑳 𝐎𝟐/𝐦𝐢𝐧
𝟐
86 5.9 5 5.4032
4 4.8 0 7 6.2954
6 9 6.9313
10.7216 [𝐒]
4 𝐯𝟎 = 13 7.7773
4.9315 + [𝐒]
𝐊 𝐌 = 4.9315 % w H2O2/v 15 8.0729
2
20 8.6043
0 25 8.9581
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30 32 34 36 38 40
30 9.2106
[S], % w H2O2/v 35 9.3998
40 9.5470