Bioprocesos I

Unidad 2

Prof. Carlos Omar Parra

Prof. María Victoria Acevedo
 Cinética enzimática simple

• Modelo desarrollado en 1913 basado en una reacción de un único

sustrato catalizado por una enzima.

𝑆→𝑃

• En modo de operación batch, donde el volumen se mantiene

constante, se conoce las concentraciones alimentadas de sustrato y
enzima.

𝑆0 = 𝐶𝑜𝑛𝑐𝑒𝑛𝑡𝑟𝑎𝑐𝑖𝑜𝑛 𝑖𝑛𝑖𝑐𝑖𝑎𝑙 𝑑𝑒 𝑠𝑢𝑠𝑡𝑟𝑎𝑡𝑜

𝐸0 = 𝐶𝑜𝑛𝑐𝑒𝑛𝑡𝑟𝑎𝑐𝑖𝑜𝑛 𝑑𝑒 𝑒𝑛𝑧𝑖𝑚𝑎 𝑎𝑙𝑖𝑚𝑒𝑛𝑡𝑎𝑑𝑎

• El modelo se basa en una cinética de saturación, según la cual, como

𝐸0 es mucho menor que 𝑆0 , entonces los sitios activos de cada enzima
van a estar ocupados por sustrato.
 Cinética de saturación

• Esquema de reacción simple que involucra la formación del complejo

enzima-sustrato como un paso reversible y la disociación del complejo con
formación de producto

• La velocidad de reacción que nos interesa analizar para la catálisis

enzimática es la velocidad de formación de producto, la cual esta dada por:
𝑑𝑃
𝑣= = 𝑘2 ∗ 𝐸𝑆
𝑑𝑡
𝐸𝑆 = 𝐶𝑜𝑛𝑐𝑒𝑛𝑡𝑟𝑎𝑐𝑖𝑜𝑛 𝑑𝑒 𝑐𝑜𝑚𝑝𝑙𝑒𝑗𝑜 𝑒𝑛𝑧𝑖𝑚𝑎 − 𝑠𝑢𝑠𝑡𝑟𝑎𝑡𝑜

• Para poder evaluar v se necesitaría una expresión para ES

• Para poder evaluar v necesitamos 0 = 𝑘1 ∗ 𝐸 ∗ 𝑆 − 𝑘−1 ∗ 𝐸𝑆 − 𝑘2 ∗ 𝐸𝑆
encontrar una expresión para ES
0 = 𝑘1 ∗ 𝐸 ∗ 𝑆 − 𝐸𝑆(𝑘−1 + 𝑘2 )

𝑑𝐸𝑆 𝐸𝑆 𝑘−1 + 𝑘2 = 𝑘1 ∗ 𝐸 ∗ 𝑆
𝑣= = 𝑘1 ∗ 𝐸 ∗ 𝑆 − 𝑘−1 ∗ 𝐸𝑆 − 𝑘2 ∗ 𝐸𝑆
𝑑𝑡
𝑘1 ∗ 𝐸 ∗ 𝑆 𝐸∗𝑆
𝐸𝑆 = =
𝐸 = 𝐶𝑜𝑛𝑐𝑒𝑛𝑡𝑟𝑎𝑐𝑖𝑜𝑛 𝑑𝑒 𝑒𝑛𝑧𝑖𝑚𝑎 𝑙𝑖𝑏𝑟𝑒 𝑘−1 + 𝑘2 𝑘−1 + 𝑘2
𝑘1

• Asumiendo que la enzima se encuentra 𝐸∗𝑆

ES =
saturada, en estado estable: 𝑘𝑚

Con:
𝑑𝐸𝑆
=0 𝑘−1 + 𝑘2
𝑑𝑡 𝑘𝑚 =
𝑘1
• Como la enzima no se consume, ni se • Despejando ES:
produce, se puede establecer la
siguiente relación de conservación de ES ∗ 𝑘𝑚 = 𝐸0 ∗ 𝑆 − 𝐸𝑆 ∗ 𝑆
la enzima: ES ∗ 𝑘𝑚 + 𝐸𝑆 ∗ 𝑆 = 𝐸0 ∗ 𝑆
ES ∗ (𝑘𝑚 + 𝑆) = 𝐸0 ∗ 𝑆
𝐸0 = 𝐸 + 𝐸𝑆
𝐸0 ∗ 𝑆
ES =
𝑘𝑚 + 𝑆
𝐸 = 𝐸0 − 𝐸𝑆

• Reemplazando para v:
• Reemplazando en la expresión de ES:
𝑑𝑃 𝐸0 ∗ 𝑆
(𝐸0 − 𝐸𝑆) ∗ 𝑆 𝑣= = 𝑘2 ∗
ES = 𝑑𝑡 𝑘𝑚 + 𝑆
𝑘𝑚
 𝑘2 ∗ 𝐸0 ∗ 𝑆 • A diferencia del modelo de Monod para
𝑣= MO, acá la vm puede cambiar
𝑘𝑚 + 𝑆
dependiendo de la E0.
• km nos da una idea de la afinidad de la
𝑣𝑚 ∗ 𝑆
𝑣= enzima con el sustrato. A menor km mas
𝑘𝑚 + 𝑆 afinidad.
modelo de Michaelis-Menten
Con:
𝑣𝑚 = 𝑘2 ∗ 𝐸0 = 𝑣𝑒𝑙𝑜𝑐𝑖𝑑𝑎𝑑 𝑚𝑎𝑥𝑖𝑚𝑎

𝑘−1 + 𝑘2
𝑘𝑚 = = 𝐶𝑡𝑒 𝑑𝑒 𝑀𝑀
𝑘1
 Estimación de parámetros cinéticos de M-M
𝑣𝑚 ∗ 𝑆
𝑣=
𝑘𝑚 + 𝑆
• El tiempo de cambio de S en una
reacción enzimática en batch
• El modelo de M-M, puede ser
puede ser determinado de:
linealizado a la expresión:
𝑑𝑆 𝑣𝑚 ∗ 𝑆
1 𝑘𝑚 1 1 𝑣=− =
= ∗ + 𝑑𝑡 𝑘𝑚 + 𝑆
𝑣 𝑣𝑚 𝑆 𝑣𝑚

V=dP/dt S 1/v 1/S • Resolviendo la ED:

𝑆0
𝑆0 − 𝑆 + 𝑘𝑚 ∗ ln
𝑆
𝑡=
𝑣𝑚
 Ejercicio
• Se midió la velocidad inicial de una reacción
enzimática para diferentes concentraciones iniciales
de sustrato y se obtuvieron los siguientes datos:

S [g/L] v [g/L*s]
a) Calcule vm y km
3 10,4 b) Si la concentración alimentada de
5 14,5 enzima fue 1,785 g/L, cual es el valor
10 22,5 de k2?
30 33,8 c) Si se tiene otra enzima con km=12 g/L,
90 40,5 cual enzima recomendaría usar para
catalizar el proceso?
 Ajuste a la estimación de parámetros
cinéticos de M-M
• La linealización que venimos • Se recomienda entonces trabajar el
manejando se conoce como: siguiente ajuste a la linealización:

Grafica de Lineweaver-Burk Grafica de Hanes-Woolf

1 𝑘𝑚 1 1
= ∗ +
𝑣 𝑣𝑚 𝑆 𝑣𝑚 𝑆 1 𝑘𝑚
= ∗𝑆+
𝑣 𝑣𝑚 𝑣𝑚
• Esta linealización suele presentar
errores en el calculo de km V=dP/dt S S/v
cuando se manejan
concentraciones de sustrato muy
bajas.
 Ejercicio
La lactasa, también conocida
como B-galactosidasa, cataliza la Lactosa [M] v [M/min]

hidrolisis de la lactosa para 2,5 1,94

producir glucosa y galactosa en 2,27 1,91
suero de leche. Se han realizado 1,84 1,85
experimentos para determinar los 1,35 1,8
parámetros cinéticos de la 1,25 1,78
enzima. Los datos se listan en la 0,73 1,46
tabla anexada. Determine Vmax 0,46 1,17
y km. 0,204 0,779

• Rara vez se conoce la
concentración de enzima en
una muestra
• La enzima es aislada de medios
con alto contenido celular, con
proteína no catalítica
• Por esto es usual que la
concentración de enzima se
reporte en unidades de
actividad enzimática
Actividad enzimática
• Unidad: cantidad de enzima que da
determina actividad catalítica
• 1U→ 1µmol P/min
• Actividad especifica: numero de
unidades por cantidad total de
proteína.
• Preparación cruda → 0,2 U/mg
• Preparación purificada → 10 U/mg
• Si la enzima se desnaturaliza no
presenta actividad
 Ejercicio
Para medir la cantidad de glucoamilasa en una preparación
cruda, se adiciona 1 mL de preparación cruda que contiene 8
mg de proteína a 9 mL de solución de almidón al 4,44%. Los
datos del experimento muestran que la reacción produce 0,6
µmol de glucosa/ml-min. Cual es la actividad especifica de la
preparación cruda?
 Solución
• Preparación cruda: 1 ml 8mg proteína
• Solución de almidón: 9 ml
• Volumen total: 10 ml
𝜇𝑚𝑜𝑙 𝑔𝑙𝑢𝑐𝑜𝑠𝑎 𝜇𝑚𝑜𝑙 𝑔𝑙𝑢𝑐𝑜𝑠𝑎
• Cantidad de glucosa: 10 𝑚𝐿 ∗ 0,6 = 6
𝑚𝐿∗𝑚𝑖𝑛 𝑚𝑖𝑛
• 1U→ 1µmol P/min
• Unidades de actividad enzimática: 6 U
6𝑈 𝑈
• Actividad especifica: = 0,75
8 𝑚𝑔 𝑚𝑔
6𝑈 𝑈
• Cantidad de enzima alimentada: = 0,6
10 𝑚𝐿 𝑚𝐿
 Enzimas alostéricas

𝐸 + 𝑆 ↔ 𝐸𝑆 + 𝑆 ↔ 𝐸𝑆2 + 𝑆 ↔ ⋯ ↔ 𝐸𝑆𝑛
• Son enzimas con mas de un sitio 𝐸 + 𝑛𝑆 ↔ 𝐸𝑆𝑛 → 𝐸 + 𝑛𝑃
activo • Haciendo el mismo análisis que para la
reacción simple:
• El enlace de un sustrato a la 𝑑𝑃
enzima vuelve aun mas afín a la 𝑣=
𝑑𝑡
= 𝑘2 ∗ 𝐸𝑆𝑛
enzima, lo que permite mayor 𝑑𝐸𝑆
𝑣= = 𝑘1 ∗ 𝐸 ∗ 𝑆 𝑛 − 𝑘−1 ∗ 𝐸𝑆𝑛 − 𝑘2 ∗ 𝐸𝑆𝑛
facilidad para enlazar otra 𝑑𝑡
molécula de sustrato • Asumiendo que la enzima se encuentra
saturada, en estado estable:
• Esto se conoce como enlace 𝑑𝐸𝑆
=0
cooperativo, y se produce de 𝑑𝑡
manera común en enzimas • Despejando 𝐸𝑆𝑛 :
reguladoras de metabolismo. 𝐸 ∗ 𝑆𝑛
𝐸𝑆𝑛 =
𝑘𝑚
 Enzimas alostéricas

• Teniendo en cuenta el principio • Reemplazando en v:

de conservación de la enzima: 𝑣𝑚 ∗ 𝑆 𝑛
𝑣=
𝐸0 = 𝐸 + 𝐸𝑆𝑛 𝑘𝑚 + 𝑆 𝑛
𝐸 = 𝐸0 − 𝐸𝑆𝑛
Con:
• Reemplazando en 𝐸𝑆𝑛 :
(𝐸0 − 𝐸𝑆𝑛 ) ∗ 𝑆 𝑛 𝑣𝑚 = 𝑘2 ∗ 𝐸0 = 𝑣𝑒𝑙𝑜𝑐𝑖𝑑𝑎𝑑 𝑚𝑎𝑥𝑖𝑚𝑎
𝐸𝑆𝑛 =
𝑘𝑚
𝑘−1 + 𝑘2
• Despejando 𝐸𝑆𝑛 : 𝑘𝑚 = = 𝐶𝑡𝑒 𝑑𝑒 𝑀𝑀
𝐸0 ∗ 𝑆 𝑛 𝑘1
𝐸𝑆𝑛 =
𝑘𝑚 + 𝑆 𝑛
 Enzimas alostéricas

𝑣𝑚 ∗ 𝑆 𝑛
𝑣=
𝑘𝑚 + 𝑆 𝑛
• El coeficiente de cooperatividad (n)
puede ser determinado de la siguiente
linealización:
𝑣
𝑙𝑛 = 𝑛 ∗ 𝑙𝑛𝑆 − 𝑙𝑛𝑘𝑚
𝑣𝑚 − 𝑣
• con n<1 se dice que hay cooperatividad
negativa, la unión del sustrato a un nuevo
sitio activo es mas difícil entre mas
moléculas de sustrato estén unidas a la
enzima
 Cinética de inhibición enzimática

• Inhibidores enzimáticos:
Compuestos que se pueden unir a
Irreversibles
las enzimas y disminuir su actividad.
• Inhibidores irreversibles: forman Inhibidores
enzimáticos
complejos muy estables con la Competitivo

enzima reduciendo la actividad

No competitivo
enzimática. Ej: metales pesados
Reversibles
• Inhibidores reversibles: Se pueden Acompetitivo
disociar mas fácilmente de la
enzima después de unirse. Sustrato
 Inhibición competitiva

• Los inhibidores competitivos son 𝑑𝑃

𝑣= = 𝑘2 ∗ 𝐸𝑆
análogos al sustrato 𝑑𝑡
• Haciendo el balance para los dos complejos de
• Compiten por el sitio activo. enzimas, y despejando se tiene:

𝑑𝐸𝑆
0= = 𝑘1 ∗ 𝐸 ∗ 𝑆 − 𝑘−1 ∗ 𝐸𝑆 − 𝑘2 ∗ 𝐸𝑆
𝑑𝑡
𝐸∗𝑆
𝐸S =
𝑘𝑚

𝑑𝐸𝐼
0= = 𝑘3 ∗ 𝐸 ∗ 𝐼 − 𝑘−3 ∗ 𝐸𝐼
𝑑𝑡
𝐸∗𝐼
𝐸I =
𝑘𝐼

• Con I = concentración de inhibidor

 Inhibición competitiva

• Teniendo en cuenta el principio de • Reemplazando en ES:

conservación de la enzima: 𝐸0 −𝐸𝑆
𝐼 ∗𝑆
𝐸0 = 𝐸 + 𝐸𝑆 + 𝐸𝐼 1+
𝑘𝐼 𝐸0 −𝐸𝑆 𝑆
𝐸 = 𝐸0 − 𝐸𝑆 − 𝐸𝐼 𝐸S = = 𝐼
𝑘𝑚 𝑘𝑚 1+𝑘
• Reemplazando EI: 𝐼

𝐸 = 𝐸0 − 𝐸𝑆 − 𝐸𝐼
𝐼
𝐸S ∗ 𝑘𝑚 1 + = 𝐸0 ∗ 𝑆 − 𝐸𝑆 ∗ 𝑆
𝐸∗𝐼 𝑘𝐼
𝐸 = 𝐸0 − 𝐸𝑆 −
𝑘𝐼 𝐼
𝐼 𝐸S(𝑘𝑚 1 + + 𝑆) = 𝐸0 ∗ 𝑆
𝐸 1+ = 𝐸0 − 𝐸𝑆 𝑘𝐼
𝑘𝐼
𝐸0 − 𝐸𝑆 𝐸0 ∗ 𝑆
𝐸= 𝐸S =
𝐼 𝐼
1+ 𝑘𝑚 1 + +𝑆
𝑘𝐼 𝑘𝐼
 Inhibición competitiva

• Reemplazando en v: • El efecto neto de la inhibición competitiva

𝐸0 ∗ 𝑆 es un aumento en el valor de 𝑘𝑚𝑎𝑝 , lo que
𝑣 = 𝑘2 ∗
𝐼 reduce la velocidad de rxn
𝑘𝑚 1 + +𝑆
𝑘𝐼
𝑣𝑚 ∗ 𝑆 • Este efecto se puede combatir con altas
𝑣= concentraciones de S
𝐼
𝑘𝑚 1 + +𝑆
𝑘𝐼
𝑣𝑚 ∗ 𝑆
𝑣=
𝑘𝑚𝑎𝑝 + 𝑆
Con:
𝐼
𝑘𝑚𝑎𝑝 = 𝑘𝑚 1+
𝑘𝐼
 Ejercicio
Al representar por el método Lineweaver-Burk los datos obtenidos con una
enzima se encontró la siguiente información:

a) Calcular la vm y la km de dicha enzima en ausencia y en presencia de

inhibidor
b) De que tipo de inhibición se trata? Calcule kI
c) En ausencia de inhibidor y con una concentración inicial de sustrato de 0,1
M, que cantidad de sustrato se habrá consumido al cabo de 4 min de
reacción?
 Inhibición no competitiva

• Los inhibidores no competitivos no son 𝑣=

𝑑𝑃
= 𝑘2 ∗ 𝐸𝑆
análogos al sustrato 𝑑𝑡
• Haciendo el balance para los dos complejos de
• Se enlazan a sitios afines diferentes al sitio
enzimas, y despejando se tiene:
activo, reduciendo así la actividad de la
enzima. 𝐸∗𝑆
𝐸S =
𝑘𝑚

𝐸∗𝐼
𝐸I =
𝑘𝐼

• Para el complejo ESI, siguiendo un proceso similar

se encuentra que:

𝐸∗𝑆∗𝐼
𝐸SI =
𝑘𝑚 ∗ 𝑘𝐼
 Inhibición competitiva

• Teniendo en cuenta el principio de • Reemplazando en ES:

𝐸0 −𝐸𝑆
conservación de la enzima: 𝐼
1+ +
𝑆 𝐼
∗
∗𝑆
𝑘𝐼 𝑘𝑚 𝑘𝐼 𝐸0 −𝐸𝑆 𝑆
𝐸0 = 𝐸 + 𝐸𝑆 + 𝐸𝐼 + 𝐸𝑆𝐼 𝐸S = = 𝐼 𝑆 𝐼
𝑘𝑚 𝑘𝑚 1+𝑘 +𝑘 ∗𝑘
𝐸 = 𝐸0 − 𝐸𝑆 − 𝐸𝐼 − 𝐸𝑆𝐼 𝐼 𝑚 𝐼
𝐼 𝐼
• Reemplazando EI y ESI: 𝐸S ∗ 𝑘𝑚 + 𝑘𝑚 ∗ + 𝑆 ∗ = 𝐸0 ∗ 𝑆 − 𝐸𝑆 ∗ 𝑆
𝐸∗𝐼 𝐸∗𝑆∗𝐼 𝑘𝐼 𝑘𝐼
𝐸 = 𝐸0 − 𝐸𝑆 − − 𝐼 𝐼
𝑘𝐼 𝑘𝑚 ∗ 𝑘𝐼 𝐸S 𝑘𝑚 + 𝑘𝑚 ∗ + 𝑆 ∗ + 𝑆 = 𝐸0 ∗ 𝑆
𝐼 𝑆 𝐼 𝑘𝐼 𝑘𝐼
𝐸 1+ + ∗ = 𝐸0 − 𝐸𝑆 𝐸0 ∗ 𝑆
𝑘𝐼 𝑘𝑚 𝑘𝐼 𝐸S =
𝐸0 − 𝐸𝑆 𝐼 𝐼
𝐸= 𝑘𝑚 1 + +𝑆 1+
𝐼 𝑆 𝐼 𝑘𝐼 𝑘𝐼
1+ + ∗ 𝐸0 ∗ 𝑆
𝑘𝐼 𝑘𝑚 𝑘𝐼 𝐸S =
𝐼
1+ ∗ (𝑘𝑚 + 𝑆)
𝑘𝐼
 Inhibición no competitiva

• Reemplazando en v:
𝐸0 ∗ 𝑆 • El efecto neto de la inhibición no
𝑣 = 𝑘2 ∗ competitiva es una disminución en el valor
𝐼
1+
𝑘𝐼
∗ (𝑘𝑚 + 𝑆) de 𝑣𝑚𝑎𝑝 , lo que reduce la velocidad de rxn
𝑣𝑚 ∗ 𝑆 • Este efecto no se puede combatir con
𝑣=
𝐼 altas concentraciones de S
1+ ∗ (𝑘𝑚 + 𝑆)
𝑘𝐼
𝑣𝑚𝑎𝑝 ∗ 𝑆
𝑣=
𝑘𝑚 + 𝑆
Con:
𝑣𝑚
𝑣𝑚𝑎𝑝 =
𝐼
1+
𝑘𝐼
 Inhibición acompetitiva

• Los inhibidores acompetitivos no tienen afinidad a

la enzima libre, pero si al complejo enzima-sustrato
• Se enlazan a sitios afines que se activan cuando la 𝑑𝑃
𝑣= = 𝑘2 ∗ 𝐸𝑆
enzima se une al sustrato, reduciendo así la 𝑑𝑡
actividad de la enzima. • Haciendo el balance para los dos
complejos de enzimas, y despejando
se tiene:

𝐸∗𝑆
𝐸S =
𝑘𝑚

𝐸𝑆 ∗ 𝐼
𝐸SI =
𝑘𝐼
 Inhibición acompetitiva

• Teniendo en cuenta el principio de • Reemplazando en ES:

conservación de la enzima: 𝐼
𝐸0 − 𝐸𝑆 ∗ 1 + 𝑆
𝑘𝐼
𝐸0 = 𝐸 + 𝐸𝑆 + 𝐸𝑆𝐼 𝐸S =
𝐸 = 𝐸0 − 𝐸𝑆 − 𝐸𝑆𝐼 𝑘𝑚
𝐼
𝐸S ∗ 𝑘𝑚 = 𝐸0 ∗ 𝑆 − 𝐸𝑆 ∗ 1 + 𝑆
• Reemplazando EI y ESI: 𝑘𝐼
𝐼
𝐸𝑆 ∗ 𝐼 𝐸S ∗ (𝑘𝑚 + 1 + 𝑆) = 𝐸0 ∗ 𝑆
𝐸 = 𝐸0 − 𝐸𝑆 − 𝑘𝐼
𝑘𝐼 𝐸0 ∗ 𝑆
𝐼 𝐸S =
𝐸 = 𝐸0 − 𝐸𝑆 ∗ 1 +
𝑘𝐼
𝐼
𝑘𝑚 + 1 + 𝑆
𝑘𝐼
 Inhibición acompetitiva

• Reemplazando en v:
𝑣 = 𝑘2 ∗
𝐸0 ∗ 𝑆 • El efecto neto de la inhibición
𝑘𝑚 + 1 +
𝐼
𝑆 acompetitiva es una disminución tanto en
𝑘𝐼
𝑣𝑚 el valor de 𝑣𝑚𝑎𝑝 , como de 𝑘𝑚𝑎𝑝 , lo que
𝐼 ∗𝑆 reduce la velocidad de rxn
𝑣𝑚 ∗ 𝑆 1+
𝑘𝐼
𝑣= =
𝐼 𝑘𝑚
𝑘𝑚 + 1 + 𝑆
𝑘𝐼 𝐼 +𝑆
1+
𝑘𝐼
𝑣𝑚𝑎𝑝 ∗ 𝑆
𝑣=
𝑘𝑚𝑎𝑝 + 𝑆
Con:
𝑣𝑚 𝑘𝑚
𝑣𝑚𝑎𝑝 = 𝑦 𝑘𝑚𝑎𝑝 =
𝐼 𝐼
1+ 1+
𝑘𝐼 𝑘𝐼
 Inhibición por sustrato

• En algunos casos a latas 𝑣=

𝑑𝑃
= 𝑘2 ∗ 𝐸𝑆
concentraciones de sustrato, 𝑑𝑡
• Haciendo el balance para los dos complejos de
este causa inhibición, si la enzimas, y despejando se tiene:
enzima cuanta con sitios afines
diferentes al sitio activo 𝐸S =
𝐸∗𝑆
𝑘𝑚

𝐸S ∗ 𝑆
𝐸𝑆2 =
𝑘𝑆𝐼

• Con:
• 𝐸𝑆2 = concentración del complejo enzima-doble
sustrato
• 𝑘𝑆𝐼 = cte de inhibición por sustrato
 Inhibición por sustrato

• Teniendo en cuenta el principio de • Reemplazando en ES:

conservación de la enzima:
𝐸0 −𝐸𝑆 1+
𝑆
∗𝑆 𝑆2
𝑘𝑆𝐼 𝐸0 ∗𝑆 −𝐸𝑆 𝑆+
𝑘𝑆𝐼
𝐸0 = 𝐸 + 𝐸𝑆 + 𝐸𝑆2 𝐸S = =
𝑘𝑚 𝑘𝑚
𝐸 = 𝐸0 − 𝐸𝑆 − 𝐸𝑆2
𝑆2
𝐸S ∗ 𝑘𝑚 = 𝐸0 ∗ 𝑆 − 𝐸𝑆 𝑆 +
𝑘𝑆𝐼
• Reemplazando ES2:
𝑆2
𝐸S 𝑘𝑚 + 𝑆 + = 𝐸0 ∗ 𝑆
𝐸S ∗ 𝑆 𝑘𝑆𝐼
𝐸 = 𝐸0 − 𝐸𝑆 −
𝑘𝑆𝐼 𝐸0 ∗ 𝑆
𝑆 𝐸S =
𝐸 = 𝐸0 − 𝐸𝑆 1 + 𝑆2
𝑘𝑆𝐼 𝑘𝑚 + 𝑆 +
𝑘𝑆𝐼
 Inhibición por sustrato

𝑆2
• 𝑆𝑖 ≪ 1 → 𝑛𝑜 ℎ𝑎𝑦 𝑖𝑛ℎ𝑖𝑏𝑖𝑐𝑖ó𝑛
𝑘𝑆𝐼
• Reemplazando en v: • Se puede calcular la concentración de
sustrato que da la máxima velocidad
𝐸0 ∗ 𝑆 cuando hay inhibición
𝑣 = 𝑘2 ∗
𝑆2
𝑘𝑚 + 𝑆 + 𝑑𝑣
𝑘𝑆𝐼
=0
𝑑𝑡
𝑣𝑚 ∗ 𝑆
𝑣=
𝑆2 𝑆𝑚 = 𝑘𝑚 ∗ 𝑘𝑆𝐼
𝑘𝑚 + 𝑆 +
𝑘𝑆𝐼
 Inhibición por sustrato

𝑣𝑚 ∗ 𝑆
𝑣=
𝑆2 • En el caso de inhibición por sustrato
𝑘𝑚 + 𝑆 +
𝑘𝑆𝐼 los parámetros cinéticos se hallan
utilizando regresión cuadrática en la
• Para calcular los parámetros cinéticos, se grafica de Hanes-Woolf
debe buscar la linealización:

1 𝑘𝑚 1 1 1
= ∗ + + ∗𝑆
𝑣 𝑣𝑚 𝑆 𝑣𝑚 𝑣𝑚 ∗ 𝑘𝑆𝐼

• Multiplicando por S, para Hanes-Woolf:

𝑆 𝑘𝑚 1 1
= + ∗𝑆+ ∗ 𝑆2
𝑣 𝑣𝑚 𝑣𝑚 𝑣𝑚 ∗ 𝑘𝑆𝐼
 𝑣𝑚 ∗𝑆
• 𝑣= 𝑆𝑣2= 𝑣𝑚 ∗ 𝑆 𝑣𝑚𝑎𝑝 ∗ 𝑆
𝑘𝑚 +𝑆+ 𝑣=
𝑘𝑆𝐼 𝑘𝑚𝑎𝑝 + 𝑆 𝑘𝑚𝑎𝑝 + 𝑆

𝑣𝑚𝑎𝑝 ∗ 𝑆 𝑣𝑚 ∗ 𝑆
𝑣=
𝑣= 𝑆2
𝑘𝑚 + 𝑆 𝑘𝑚 + 𝑆 +
𝑘𝑆𝐼
 Ejercicio
La hidrolisis de la urea mediante ureasa es una reacción que
puede mostrar inhibición. Datos experimentales para diferentes
concentraciones de inhibidor se presentan en la siguiente tabla:
S
0,2 M 0,02 M a)Determine la constante de M-M
1/v I 1/v I y la velocidad máxima para esta
0,22 0 0,68 0 reacción
0,33 0,001 1,02 0,001 b)Que tipo de inhibidor se utilizo en
0,51 0,0027 1,5 0,0022 el experimento? Justifique su
0,76 0,005 1,83 0,0032 respuesta.
0,88 0,0061 2,04 0,0037
c) Cual es el valor de kI?
1,1 0,008 2,35 0,005
1,15 0,0093 2,74 0,0059
 Enzimas inmovilizadas
• Es la restricción de movilidad de una • Principio: imita la unión de algunas
enzima en un lugar fijo enzimas a la membrana intracelular
Ventajas: • Principales métodos de inmovilización:
• Reutilización de la enzima: No se atrapamiento e inmovilización
necesitan procesos de recuperación y superficial
purificación de enzima
• Mejor ambiente para su actividad
enzimática >estabilidad
• La purificación del producto es más
sencilla
• Se puede usar en un amplio rango de
reactores
• La reacción se puede parar rápidamente
 Atrapamiento
• Es el confinamiento físico de una
enzima en un espacio pequeño
• Puede ser en una membrana o
en una matriz
• Matrices: pueden ser dispuestas
en una fibra o una membrana
• Matrices blandas: usan alginato,
agar, carrageninas, colágeno,
poliacrilamida, como material de
soporte
• Matrices sólidas usan carbón
activado, cerámicos porosos,
tierras diatomeas como material
de soporte
 Atrapamiento
Microencapsulación
• Se forman esferas huecas
microscópicas
• Las esferas contienen la enzima
y están sujetas a una
membrana porosa polimérica

Atrapamiento en membranas:
• Membranas de fibra hueca de
nylon, polisulfona y poliacrilato
son las más usadas
 Desventajas Atrapamiento
Ejemplos • Filtración de la enzima a la
• Leche * Pruebas de glucosa solución, se mejora a menor
deslactosada para la diabetes tamaño de poro
• Limitaciones difusionales, se
mejoran disminuyendo el
tamaño de partícula de las
capsulas/matrices
• Reducción de la actividad
enzimática o estabilidad
Glucosa oxidasa • Bajo control de las
microcondiciones ambientales,
se disminuye con la
optimización del proceso
 Inmovilización superficial
• Adsorción: Retención de la enzima en la • Materiales Orgánicos: Celulosa (CMC,
superficie de una partícula de soporte DEAE-celulosa), almidón, carbón
por fuerzas débiles (Van der Waals, activado y resinas de intercambio
fuerzas de dispersión) iónico.
• El sitio activo de la enzima adsorbida, • Las superficies deben ser pretratadas
generalmente conserva su actividad. La física o químicamente para hacer una
adsorción se estabiliza con inmovilización efectiva
glutaraldehído
Materiales usados:
• Materiales inorgánicos: alúmina, sílica,
vidrio poroso, cerámicas, bentonita,
arcilla, tierras diatomeas
 Inmovilización superficial
• Unión covalente: Retención de la enzima
en la superficie de una partícula de
soporte por enlaces covalentes
• Las enzimas se unen gracias a sus grupos
funcionales (amino, carboxilo, hidroxilo..)
que no están en el sitio activo
• Proceso: inhibir la enzima con un inhibidor
competitivo, realizar la reacción que
permite la unión covalente
Criterios para seleccionar el material de
soporte:
• Capacidad de unión: es función de su
densidad de carga, porosidad, grupos
funcionales, hidrofobicidad
• Estabilidad y retención de la actividad
enzimática
Comparación entre los métodos
Enzimas inmovilizadas uso
industrial