ENZIMOLOGÍA

VEGETAL Dra. María Inés Isla

FISIOLOGÍA VEGETAL

DOCENTE: DR. PEDRO LEZAMA ASENCIO

ALUMNA: FLORIÁN ALVARADO LEYDI
 Actúan en secuencias organizadas,
Extraordinaria catalizando cientos de
capacidad reacciones en una vía metabólica
catalítica
degradando o biosíntetizando nutrientes
para la supervivencia y proliferación
celular.

Aceleran
reacciones Alto grado de
SUSTANCIAS
Químicas especificidad
específicas

Algunas son reguladoras, pueden

¿QUÉ SON en condiciones
responder a varias señales metabólicas

LAS suaves de
temperatura y
cambiando de
acuerdo a éstas su actividad catalítica.
ENZIMAS? pH
 PRINCIPALES CARACTERÍSTICAS DE LAS
ENZIMAS
Tienen un peso molecular que oscila desde 12.000
hasta más de 1.000.000 Da.

Son proteínas Algunas requieren cofactores que pueden ser

cuya actividad Fe,Mg2+, Mn2+,Zn2+ o bien una molécula orgánica o
catalítica metalorgánica llamada coenzima, y a veces de ambos
depende de la (holoenzima).
estructura.
CLASIFICACIÓN DE LAS
ENZIMAS
 PRINCIPALES PROBLEMAS EN EL
MANEJO DE LAS ENZIMAS

EXTRACCIÓN PURIFICACIÓN
- Separar las enzimas de la compleja mezcla de proteínas, lípidos,
- Degradar el órgano, tejido o células que la contienen. azúcares y otras sustancias que se encuentran en el homogenato.
- Efectuarse siempre en frio.
- Para homogenizar un tejido fresco se utiliza una cierta cantidad
de líquido.
- Este líquido debe tener una composición adecuada para proteger
la enzima de posibles desnaturalizaciones.
- En el medio de extracción se agregan inhibidores de proteasas.
- Además, un buffer cuya composición, pH y concentración
mantenga lo mejor posible los niveles de la actividad enzimática
en estudio.
- Deberá controlarse la temperatura y el pH.
- Realizar el dializado o ultra filtrado del preparado.
- Se procede a detectar por acción de la reacción que cataliza por
espectrofotometría la desaparición del sustrato.
 PRINCIPIOS GENERALES DE LA ACCIÓN
CATALÍTICA DE UNA ENZIMA

• Las enzimas proveen un entorno específico llamado sitio activo en que está energéticamente favorecida una
determinada reacción. Es así como las enzimas pueden ser modificadas dentro de ciertos límites sin que pierdan su
actividad biológica.
• Esto nos indica que no toda la proteína enzimática participa en la catálisis sino que sólo parte de ella es la que
intervienen en la unión (sitio de ligamiento del o de los sustratos) y transformación de los sustratos (grupos
catalíticos).
FACTORES QUE INFLUYEN EN LA VELOCIDAD DE LAS
REACCIONES ENZIMATICAS

Temperatura

• Los principales factores

Presencia de
que afectan la velocidad activadores o
inicial de una pH
inhibidores
determinada reacción
son: FACTORE
S

Concentración de Concentración de
sustrato enzima
Efecto de la temperatura:
• Las enzimas alcanzan un punto en que todo nuevo aumento
de la temperatura provoca una disminución de la velocidad
de la reacción. Esto se debe a que a temperaturas altas las
enzimas se desnaturalizan.
Efecto del pH:
• La mayoría de los enzimas son muy sensibles a los cambios
de pH. Desviaciones de pocas décimas por encima o por
debajo del pH óptimo pueden afectar drásticamente su
actividad.
• Así, la pepsina gástrica tiene un pH óptimo de 2, la glucosa
6-fosfatasa lo tiene a pH 7,5 y la arginasa lo tiene a pH 10.
Efecto de la concentración de Efecto de inhibidores:
sustrato:
• Se define como inhibidores a cualquier sustancia capaz de reducir la
velocidad de una reacción enzimática.
• Los inhibidores enzimáticos se clasifican en dos grandes grupos:
reversibles e irreversibles de acuerdo a que la enzima recupere o no su
actividad original una vez eliminado el inhibidor.
• En el primer caso el inhibidor interactúa en forma reversible con algún
grupo esencial de la enzima formando un complejo enzima-inhibidor.
 REGULACIÓN DE
METABOLISMO VEGETAL
La actividad de las enzimas reguladoras es modulada a través de varios tipos de moléculas señales que generalmente
son pequeños metabolitos o cofactores. Existen dos clases principales de enzimas reguladoras.

1: las enzimas alostéricas que funcionan a través de la 2: las enzimas reguladoras que funcionan por
unión reversible y no covalente de un metabolito modificación covalente reversible.
regulador llamado modulador.

3: Algunas enzimas son activadas o inhibidas por

proteínas de control que se les unen y afectan su
actividad.

4: Otras son activadas por ruptura proteolítica que, a

diferencia de otros mecanismos, es irreversible.
Ejemplos en el metabolismo vegetal
 REGULACIÓN POR MODIFICACIÓN QUÍMICA:

Además, la
carbamilación está
favorecía por pH
alcalino y altas
concentraciones de
Mg que favorecen la
formación del
complejo (estas
condiciones
aumentan durante la
iluminación).
 Modulación redox de la actividad enzimática:

• Se conoce un cierto
número de enzimas
vegetales que son
activadas o inhibidas por
su estado de oxidación o
al menos por la presencia
de ciertos oxidantes o
reductores en sus
soluciones.
 CONTROL METABÓLICO POR LA CARGA
ENERGETICA DEL ADENILATO
• La producción de ATP debería estar regulada de modo que sea igual a su velocidad de movilización. Consecuentemente, con estas
ideas se encontró que la existencia celular de adenilado, esto es la suma del total de ATP, ADP y AMP contenida en la célula es
constante. Por tanto la utilización de ATP produciría cantidades equivalentes de AMP y ADP según el tipo de reacción con que se
esté consumiendo el ATP.
• Por otra parte, hay una enzima que interrelaciona a los tres componentes del adenilado, posibilitando un equilibrio directo entre ellos.
Esta enzima es la adenilato quinasa que cataliza la reacción:

• La carga energética del adenilato será igual a 1 cuanto todo el adenilato esté como ATP, y será igual a 0 si está totalmente convertido
en AMP. Las enzimas que forman ATP (por ej. la fosfofructoquinasa) son activas a bajos valores de carga energética y poco activas a
altos valores. Las enzimas que utilizan el ATP (por ej. la ADP-glucosa pirofosforilasa) con fines biosintéticos, en cambio, son menos
activas a bajos valores de carga energética y muy activas a altos valores.
 Enzimas de vegetales superiores moduladas por la carga
energética del adenilato:

La 3-fosfoglicerato quinasa de cloroplastos y de citoplasma de hojas de arveja son reguladas por cambios de la carga energética del
adenilato. El AMP inhibe tanto la actividad de formación del 3-fosfoglicerato (reacción de formación de ATP) como la deformación de 1,3-
difosfoglicerato (reacción de consumo de ATP). En cambio el ATP inhibe la formación de 3-fosfoglicerato.

Estudios efectuados con cloroplastos y citoplasma de Elodea demostraron que a la luz, la carga energética es muy alta (mayor que 0,9),
mientras que es baja en la oscuridad (del orden de 0,67 en cloroplastos y de 0,76 en el citoplasma), lo que sugiere que la dirección de la
reacción de la 3-fosfoglicerato quinasa puede estar siendo regulada durante la fotosíntesis y en la oscuridad.

Estudiando la fosfofructoquinasa vegetal se encontró que ni el ADP ni el AMP son inhibidores de la enzima. El ATP y el citrato son
inhibidores, y sus inhibiciones son parcialmente suprimidas por el Pi. Además, el Pi es un potente inhibidor de las ADPglucosa
pirofosforilasas de algas y plantas superiores, por lo cual también debería considerarse el Pi en el estudio de los efectos de la carga energética
del adenilato en las plantas.
 Regulación por compartimentalización
Compartimentalización efectuada por
complejos multienzimáticos:
• Los complejos multienzimáticos poseen una eficiencia
catalítica aumentada con respecto a la acción que tendrían
sus enzimas componentes si estas estuvieran libres en la
solución.
• La mayor eficiencia catalítica de las enzimas complejadas
sería debido a la canalización del flujo de metabolitos los
que pueden ser directamente transferidos en el complejo de
enzima a enzima o bien puede deberse al decrecimiento del
período de difusión de los intermediarios.
Compartimentalización por
membranas:
• La biosíntesis de ácidos grasos es exclusivamente
cloroplastídica y la bio síntesis de estos compuestos en
tejidos no verdes parecería, también, efectuarse en plástidos.
• Otras enzimas que se encuentran en los plástidos son las
enzimas sintetizantes de los terpenos y las de varios
pigmentos, así como las enzimas que llevan al N de los
nitratos a nivel de los aminoácidos.
• Se acepta que los cloroplastos contienen las enzimas del
ciclo reductor de las pentosas fosfato, pero debemos
considerara que hay enzimas citosólicas que catalizan
reacciones similares a las del ciclo en la glicólisis y en la via
oxidativa de las pentosas fosfato.