DETERMINACION DE AZUCARES Y GLUCOSA

Rodríguez A. Cod. 20201150105 ; Avendaño D. Cod. 20192150039

Ortega J. Cod. 20192150047 y Gutiérrez J. Cod. 20191150087

Universidad Distrital Francisco José de Caldas UDFJC; Facultad de Ciencias y Educación;

Proyecto Curricular de Licenciatura en Química; Correo institucional respectivamente:
amrodrigueza@udistrital.edu.co , dagavendanol@udistrital.edu.co ,

Pruebas de tubos
Prueba de Molish: La prueba de Molish, en la cual se utiliza el ácido sulfúrico concentrado
(H 2 SO 4 ) y el reactivo de molish, donde el ácido sulfúrico reacciona con el α−Naftol
formando un anillo de color verde claro cuando no hay glucósidos y un color rojo ladrillo
cuando la concentración de glucósidos es alta.
Prueba de Barfoed: Es una reacción para identificar monosacáridos, aunque algunos
disacáridos (los reductores) dan positiva la reacción, pero con más tiempo de
calentamiento, ya que así se hidroliza el disacárido. El fundamento radica en la reducción
del acetato cúprico a óxido cuproso.
La prueba de Seliwanoff es una prueba química que se usa para distinguir aldosas y cetosas.
Los azúcares son distinguidos a través de su función como cetona o aldehído. Si el azúcar
contiene un grupo cetona, es una cetosa, y si contienen un grupo aldehído, es una aldosa.
Esta prueba está basada en el hecho de que, al calentarlas, las cetosas son deshidratadas
más rápido que las aldosas.
La prueba de Bial es una prueba específica para pentosas. Por la formación de una
coloración verde botella brillante que se produce con el reactivo de Bial, que contiene
orcinol y cloruro férrico en ácido clorhídrico. Es una prueba para distinguir osas (y oligo-
sacáridos).
La glucosa es un azúcar que es utilizada como fuente de energía para el organismo, esta se
incrementa en la sangre al ingerir alimentos diferentes al agua, lo que se consume
desaparece de la sangre mediante el empleo de una hormona reguladora producida por el
páncreas conocida como insulina, cuando ocurre lo contrario se secreta otra hormona
llamada glucagón que permite mantener los niveles de glucosa en sangre

Resultados
Prueba de tubos

Figura 1.Pruebas de tubos

Determinación de glucosa
 Figura 2.Tubos sin muestra determinación de glucosa

Figura 3.Tubos con muestra determinación de glucosa

Curva de Calibración:
No Tubo %T Abs
1 49.8 0.302
2 45.8 0.339
3 23.0 0.638
4 11.9 0.924
5 32.2 0.492

Tabla 1.Valores sin muestra

 N° tubo %T Abs

1 75.1 0.124

2 87.3 0.058

3 94.8 0.023
Tabla 2.Valores con muestra de leche

Análisis de Resultados
Pruebas de tubos
Es una reacción general para carbohidratos que contienen más de 5 átomos de carbono, la
reacción se muestra en la figura 1.

Esta prueba al ser positiva (presenta formación de un anillo color púrpura en la muestra),
permitió identificar la presencia carbohidratos, como es el caso de los glúcidos, como en te
disacáridos (galactosa y glucosa) presentes en la muestra de leche entera. Tanto la galactosa
como la glucosa son disacáridos que presentan diastereoisómeros lo cual indica que estas
moléculas comparten la misma conectividad entre sus átomos, pero difieren en la
orientación espacial de al menos uno de sus átomos o grupos en el espacio tridimensional.

La formación de un anillo color púrpura en la muestra es indicativa de un resultado

positivo, lo que sugiere la presencia de carbohidratos con más de cinco átomos de carbono
que son capaces de reducir el reactivo de Benedict. Este resultado es típico para azúcares
reductores, como monosacáridos y algunos disacáridos, que contienen grupos aldehído o
cetona libres.
En el caso específico mencionado, la presencia de glucosa y galactosa en la leche entera dio
un resultado positivo en la prueba de Benedict. Esto se debe a que tanto la glucosa como la
galactosa son monosacáridos y, en forma de disacáridos como la lactosa, son capaces de
reducir el reactivo de Benedict debido a la presencia de un grupo aldehído libre en la
molécula de glucosa o galactosa.

La referencia a los diastereoisómeros indica que tanto la glucosa como la galactosa son
isómeros entre sí, específicamente diastereoisómeros. A pesar de que comparten la misma
conectividad entre sus átomos, difieren en la orientación espacial de al menos uno de sus
átomos o grupos en el espacio tridimensional. Esto puede ser relevante en contextos
bioquímicos o de química orgánica para comprender cómo estas moléculas interactúan con
otras moléculas en sistemas biológicos o reacciones químicas.

Fig.1 Glucosa y galactosa, diastereoisómeros

PRUEBA DE BARFOED

Es una reacción para identificar monosacáridos, aunque algunos disacáridos (los

reductores) dan positiva la reacción, pero con más tiempo de calentamiento, ya que así se
hidroliza el disacárido. El fundamento radica en la reducción del acetato cúprico a óxido
cuproso.

En la determinación de azúcares reductores se obtuvieron los resultados en los respectivos,

según el tubo de cada mezcla:

En el tubo 4 (blanco) se pudo observar que la mezcla no reaccionó en ningún momento,

sino que permaneció del color azul del reactivo.
En el tubo 1 glucosa se observó que hubo una reacción rápidamente (3 minutos), puesto
que contiene el monosacárido de la glucosa; presentó un rojo ladrillo en el fondo del tubo
luego de hervir en el baño maría. La observación de una reacción rápida, ocurriendo en
solo 3 minutos, es consistente con las propiedades de la glucosa como un monosacárido
reductor. Dado que la glucosa es un azúcar simple con un grupo funcional aldehído, puede
reaccionar rápidamente con el reactivo de Benedict en condiciones adecuadas. La
observación de una reacción rápida y positiva en la prueba de Benedict para la glucosa
demuestra la utilidad de esta prueba en la identificación de carbohidratos reductores

En el tubo 2 (problema) la sacarosa obtuvo una reacción lenta (16 minutos), puesto que
contiene un disacárido compuesto de glucosa y fructosa; presentó unas burbujas rosas
oscuras al fondo del tubo luego de hervir en el baño maría.
La sacarosa es un disacárido formado por la unión de una molécula de glucosa y una de
fructosa. La observación de una reacción lenta puede explicarse por la estructura de la
sacarosa, que es más compleja que la de los monosacáridos simples. La presencia de un
enlace glucosídico puede limitar la disponibilidad de los grupos reactivos necesarios para la
reacción con el reactivo de Benedict. La presencia de burbujas rosas oscuras al fondo del
tubo después de hervir en el baño maría es un resultado inesperado y podría indicar una
reacción atípica o un resultado no típico de la prueba de Benedict. Este fenómeno no es
comúnmente asociado con la prueba de Benedict y podría requerir una investigación
adicional para comprender su significado.
La presencia de una reacción lenta seguida de un resultado no típico en la prueba de
Benedict podría indicar la necesidad de utilizar pruebas adicionales para confirmar la
presencia de sacarosa en la muestra.

En el tubo 3 (patrón)maltosa se observó una reacción lenta (16 minutos), puesto que
contiene el disacárido de la maltosa compuesto de dos glucosas; presentó un rojo al fondo
del tubo luego de llegar al punto de ebullición en el baño maría. La maltosa es un
disacárido formado por dos unidades de glucosa unidas por un enlace glucosídico. La
reacción lenta puede atribuirse a varios factores:

● Complejidad estructural: La maltosa es un disacárido más grande y estructuralmente

más complejo que los monosacáridos simples como la glucosa. La presencia de un
enlace glucosídico puede dificultar la disponibilidad de los grupos reactivos
necesarios para la reacción con el reactivo de Benedict.
● Velocidad de reacción: Debido a la estructura más compleja de la maltosa, puede
requerir más tiempo para que el reactivo de Benedict reaccione con los grupos
reactivos presentes en la molécula de maltosa y forme el precipitado característico
de color rojo.
● Concentración de la solución: La velocidad de la reacción también puede estar
influenciada por la concentración de la solución de maltosa. Si la concentración de
 maltosa es baja, la velocidad de reacción puede disminuir, lo que resulta en una
observación de reacción más lenta.

La formación de un color rojo en el fondo del tubo sugiere un resultado positivo en la

prueba de Benedict. Este color rojo indica la formación de óxido cuproso, que es el
resultado de la reducción del reactivo de Benedict por los grupos reductores presentes en la
maltosa.

En el tubo 4 (problema) lactosa se observó una reacción lenta (10 minutos), puesto que
contiene el disacárido de glucosa compuesto de galactosa y glucosa; presenta un color
verde en todo el tubo luego del calentamiento en el baño maría. El análisis del resultado
obtenido en el tubo 4 puede ser mejorado considerando los siguientes aspectos:

Explicación de la reacción lenta: Al igual que en el caso de la maltosa, la lactosa es un

disacárido compuesto por dos unidades de monosacáridos: galactosa y glucosa. La
observación de una reacción lenta puede atribuirse a la estructura más compleja de la
lactosa en comparación con los monosacáridos simples. La presencia de un enlace
glucosídico puede dificultar la disponibilidad de los grupos reactivos necesarios para la
reacción con el reactivo de Benedict.

● Interpretación del color verde en el tubo: La formación de un color verde en todo el

tubo después del calentamiento en el baño maría indica un resultado negativo en la
prueba de Benedict. Este cambio de color sugiere que no se ha producido la
reducción del reactivo de Benedict por los grupos reductores presentes en la lactosa.
● Posibles razones de la ausencia de reducción: La lactosa es un disacárido que
contiene un enlace glucosídico entre la glucosa y la galactosa. Es posible que este
enlace dificulte la capacidad de la lactosa para reducir el reactivo de Benedict.
Además, la presencia de una mayor proporción de galactosa en la lactosa en
comparación con la glucosa podría influir en la capacidad de la muestra para
reaccionar con el reactivo de Benedict.
● Confirmación de la presencia de lactosa: Aunque la prueba de Benedict resultó
negativa, es importante tener en cuenta que la lactosa es un disacárido reductor. Por
lo tanto, se puede confirmar la presencia de lactosa en el tubo 4, pero es posible que
la concentración o las condiciones de reacción no fueran óptimas para observar una
reacción positiva en esta prueba específica.

PRUEBA DE SELIWANOFF

Es específica para cetosas que contengan 5 o más átomos de carbono, pero se usa casi
exclusivamente para identificar fructosa
En la determinación de y reconocimiento de fructosa el color rojo es característico de esta
prueba ya que se forma en aquellos azúcares que tenían cetosas, debido a que este es lo
único que esta prueba puede reconocer, puesto que poseen el grupo cetona, esto se
comprobó debido a que al calentar los tubos que contenían las muestras las cetosas se
deshidrataron más rápido que las aldosas evidenciándose el cambio característico del color
.En la prueba de seliwanoff (resorcinol) con glucosa no presenta el color rojo
característico de esta reacción es negativa por lo que no se trata de una cetosa.

En la prueba de Seliwanoff (resorcinol) con fructosa al presentar el color rojo característico

de esta reacción es positiva indicando la presencia de una cetosa.

En la prueba de Seliwanoff(resorcinol) con sacarosa al presentar el color rojo característico

de esta reacción es positiva identificándose una cetosa.

Se verificó que la sacarosa hidrolizada (al estar separada la glucosa de la fructosa) en la

prueba de Seliwanoff fue positiva por la evidencia de la formación de una coloración rojo

PRUEBA DE BIAL

Es una prueba específica para pentosas. La positividad se reconoce por la formación de una
coloración verde botella brillante.

En la prueba para determinar e identificar pentosas por medio de la prueba de BIAL no se

contó con la ribosa, se procedió a realizar la prueba con fructosa y sacarosa. Tanto la
fructosa como la sacarosa al no ser pentosas no dan una coloración positiva, sin embargo
las hexosas al reaccionar con el reactivo de Bial originan una coloración verde, café o
café-rojiza, razón por lo cual en la fructosa se observó una coloración café –rojiza oscura y
en la sacarosa una coloración similar pero clara. Se resalta la especificidad de la prueba de
Bial para pentosas y cómo puede ocurrir una reacción positiva incluso con azúcares que no
son pentosas, como en el caso de las hexosas.
En este caso, la falta de ribosa como muestra limitó la capacidad de realizar la prueba
directamente en una pentosa. Sin embargo, al probar fructosa y sacarosa, que son hexosas y
no pentosas, se esperaba que no dieran una coloración positiva. La observación de una
coloración café-rojiza oscura en la fructosa y una coloración similar pero clara en la
sacarosa indica que, a pesar de no ser pentosas, estas hexosas aún reaccionaron con el
reactivo de Bial para producir un cambio de color. Esto muestra la importancia de
interpretar los resultados en el contexto adecuado y considerar otras posibles explicaciones
para los cambios de color observados.
.

Conclusiones
La formación de un anillo color púrpura en la muestra de leche entera indica la presencia de
carbohidratos, específicamente glúcidos como la galactosa y la glucosa. La presencia de
galactosa y glucosa en la muestra de leche entera indica que estos son disacáridos que
presentan diastereoisómeros. Esto significa que comparten la misma conectividad entre sus
átomos, pero difieren en la orientación espacial de al menos uno de sus átomos o grupos en
el espacio tridimensional. La prueba de Molisch es útil para detectar la presencia de
carbohidratos que contienen más de 5 átomos de carbono en una muestra. Su resultado
positivo en la muestra de leche entera demuestra la utilidad de esta prueba para la
identificación de carbohidratos en diversos tipos de muestras biológicas.

La Prueba de Barfoed es efectiva para identificar la presencia de monosacáridos y algunos

disacáridos reductores en una muestra. Los resultados muestran que la reacción es más
rápida en presencia de monosacáridos como la glucosa (tubo 1), mientras que los
disacáridos reductores como la sacarosa, maltosa y lactosa (tubos 2, 3 y 4 respectivamente)
presentan una reacción más lenta. Se observa que el tiempo de calentamiento necesario para
que los disacáridos reductores reaccionen y den un resultado positivo es mayor que para los
monosacáridos. Esto se debe a que los disacáridos necesitan ser hidrolizados para liberar
los monosacáridos antes de que puedan reaccionar con el reactivo de Barfoed. os resultados
positivos se identifican por un cambio de color en la solución, siendo rojo ladrillo para la
glucosa (tubo 1), rojo para la maltosa (tubo 3), y verde para la lactosa (tubo 4). Estos
cambios de color indican la reducción del acetato cúprico a óxido cuproso, lo que confirma
la presencia de azúcares reductores.

La Prueba de Seliwanoff es específica para detectar cetosas que contienen 5 o más átomos
de carbono, aunque se utiliza principalmente para identificar fructosa debido a su alta
reactividad con el reactivo de resorcinol. El color rojo característico que se forma en la
prueba es indicativo de la presencia de cetosas en la muestra. Este cambio de color se debe
a la reacción entre la cetosa presente y el reactivo de resorcinol. La falta de cambio de color
rojo en la prueba con glucosa indica que no se trata de una cetosa, confirmando así la
naturaleza de aldosas de este azúcar. Los resultados positivos en las pruebas con fructosa y
sacarosa, donde se observó un cambio de color rojo, confirman la presencia de cetosas en
ambas muestras. Esto es consistente con la composición química de la fructosa y la
sacarosa, que contienen una cetona como grupo funcional. La positividad de la prueba de
Seliwanoff con la sacarosa hidrolizada confirma que la sacarosa se descompone en glucosa
y fructosa durante la hidrólisis, lo que demuestra la presencia de ambas cetosas en la
mezcla.

La Prueba de Bial es específica para identificar pentosas, que son azúcares que contienen
cinco átomos de carbono en su estructura. Esta prueba ofrece una manera confiable de
distinguir pentosas de otros tipos de azúcares. La positividad en la prueba se reconoce por
la formación de una coloración verde botella brillante. Este cambio de color es indicativo
de la presencia de pentosas en la muestra analizada. Los resultados de la prueba con
fructosa y sacarosa, que no son pentosas, no mostraron una coloración positiva. Esto
confirma la especificidad de la Prueba de Bial para pentosas y su capacidad para
diferenciarlas de otros tipos de azúcares. Aunque la Prueba de Bial es específica para
pentosas, se observó una reacción con las hexosas (fructosa y sacarosa), lo que resultó en
una coloración café-rojiza oscura. Esta reacción puede deberse a algunas características
estructurales compartidas entre las pentosas y las hexosas.

Bibliografía
● ALEMANY, M.; FONT, S. Prácticas de Bioquímica. Madrid: Editorial Alambra.
1985.
● Berg, J. M., Stryer, L., & Tymoczko, J. L. (2007). Bioquímica. Reverté.
● Valdés, F. (2006). Determinación de glucosa. Actas dermo-sifiliográficas, 97(9),
557-568.in
● Campbell, M. K., Farrell, S. O., Reyes, A. C., Gasco, J. H. C., Talavera, J. B.,
Bonilla, A. C., & Muñoz, G. R. (2004). Bioquímica (Vol. 4). Thomson.
● Carreón-Camacho, D. P. (2022). La bioquímica en la producción de leche.
Con-Ciencia Boletín Científico de la Escuela Preparatoria No. 3, 9(18), 16-22.