Manual BacterII

1
MANUAL DE PRACTICAS DEL

LABORATORIO DE BACTERIOLOGA II

AUTORES:
M. en C. REYNA DEL CONSUELO ALMIRAY PINZN
M.E.C. ANA BERTHA ESCOBEDO LOPEZ
M. en C. GLORIA LEN TELLO
M. en C. MARA SUSANA PERZ FERNNDEZ
M. en C. PATRICIA GUADALUPE SUREZ ALBORES
2013
BENEMRITA UNIVERSIDAD AUTNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS
LICENCIATURA: QUMICO FARMACOBILOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGA

2

NDICE

Prctica No. 1 Infecciones gastrointestinales (Coprocultivo)

3
Prctica No. 2 Infecciones de las vias urinarias (Urocultivo)

9
Prctica No. 3 Sensibilidad a los antimicrobianos mtodo de Kirby-Bauer
(antibiograma)

16
Prctica No. 4 Infecciones de vas respiratorias altas (Exudado farngeo y
nasofarngeo)

21
Prctica No. 5 Infecciones de vas respiratorias bajas (Cultivo de esputo)

26
Prctica No. 6 Bsqueda e identificacin de Mycobacterium tuberculosis

32
Prctica No. 7 Infecciones oculares

39
Prctica No. 8 Infecciones ticas

42
Prctica No. 9 Infecciones del aparato genital (Exudado cervico vaginal y exudado
uretral)

45
Prctica No. 10 Cultivo de heridas

551
Prctica No. 11 Diagnstico de enfermedades menngeas (Cultivo de LCR)

55
Prctica No. 12 Hemocultivo

60

3

PRCTICA No. 1
INFECCIONES GASTROINTESTINALES
COPROCULTIVO
Introduccin
El estudio de las bacterias responsables de cuadros clnicos gastrointestinales se realiza
fundamentalmente mediante el cultivo de la materia fecal (coprocultivo). Las enfermedades
diarreicas agudas representan una de las principales causa de defuncin en nuestro pas.
Las vas gastrointestinales son el hbitat natural de una extensa variedad de
microorganismos, la mayora de las bacterias de la flora entrica residente corresponden a
miembros de la familia Enterobacteriaceae (E.coli, Proteus etc.) aunque tambin son
abundantes Enterococcus faecalis, diversas especies de Staphylococcus, Mycobacterium y
especies anaerobias. Siendo de mayor relevancia diagnstica las enterobacterias patgenas como:
Shigella, Salmonella, Yersinia, Escherichia coli, esta ltima aunque se considera parte de la
flora algunos serotipos denominados enteropatgenos son capaces de producir gastroenteritis,
principalmente en lactantes en forma de brotes epidmicos. Adems de otros gneros de
importancia mdica como Vibrio, Campylobacter y Helicobacter que pertenecen a otras familias.
El objetivo principal de realizar el coprocultivo es que ste sirva como apoyo al
diagnstico clnico en caso de gastroenteritis.

Objetivo
El alumno aprender la tcnica para la realizacin del coprocultivo as como conocer las
diferentes pruebas bioqumicas que se utilizan para la identificacin de los patgenos intestinales.


4

Material
Placas de Petri con Agar Mac
Conkey
Placas de Petri con Agar S.S.
Placas de Petri con Agar, XLD
Placas de Petri con Agar Sulfito de
Bismuto
Placas de Petri con Agar Entrico de
Hecktoen.
Placas de Petri con Agar EMB
Placas de Petri con Agar Campy-
BAP
Placas de Petri con Agar TCBS.
Placas de Petri con Agar Gelosa
sangre de Carnero.
Caldo selenito o tetrationato en tubos
de 13x100 con 2 mL.
Agua peptonada Alcalina (APA) a
pH 9.
Solucin salina isotnica en tubos de
13x100 con 2mL.
Tubos con medio: TSI, LIA, MIO,
urea de Christensen, citrato de
Simmons para pruebas bioqumicas
Solucin de Iodo
Juego de colorantes de Gram.
Portaobjetos
Cubreobjetos
Colorante de Azul de Metileno
Gradillas
Aceite de inmersin.
Frasco con benzal
Algodn
Taxos de oxidasa
Tubos con caldo soya tripticasa
Bao mara
Marcador de vidrio.
Buffer de PBS

Desarrollo
Toma y transporte de muestra para coprocultivo
Las muestras se debern obtener al inicio del cuadro clnico antes de iniciar el tratamiento
antimicrobiano.
1. La muestra de heces se puede tomar directamente en un frasco limpio de boca ancha y
con tapa hermtica de preferencia debe usarse estril y desechable, cuando se trata de
lactantes la muestra se toma directamente del recto usando sonda K31 conectada a una
jeringa estril, e introducindole solucin salina isotnica. Si la muestra se toma en el
mismo laboratorio donde se va a procesar el aislamiento, no es necesario usar medio de
transporte hay que sembrar de inmediato.
2. En estudios de campo o cuando el laboratorio no est cercano, la muestra se toma con
un hisopo que debe quedar bien impregnado de materia fecal. El hisopo se coloca en un
medio de transporte como el de Cary-Blair o el de Stuart-Amies.
3. Slo en ocasiones extremas se puede refrigerar la muestra.

Procesamiento de la muestra
1. Hacer la observacin directa de las heces, si presenta moco, sangre o si son lquidas,
pastosas o de diferente color.

2. La tincin de Gram en frotes de materia fecal es importante para corroborar la presencia
de Campylobacter en sus formas vibrinicas y helicoidales, la presencia de clulas
indicativas de inflamacin, eritrocitos, etc.
3. La materia fecal se siembra directamente con un asa y la cantidad de muestra depende del
tipo de medio de cultivo utilizado. El mtodo usado es por la tcnica de estra cruzada
esterilizndola en cada seccin de la placa y separando la estra.
4. Las placas se incuban a 37 C durante 18 a 24 h
5. Al mismo tiempo de sembrar las placas, sembrar un tubo de enriquecimiento con muestra
fecal usando una cantidad pesada de inculo, como caldo tetrationato o caldo selenito. Si
se sospecha de Vibrio sembrar un tubo con agua peptonada alcalina (APA), incubar a
37C de 12 a 18 h y posteriormente sembrar en un medio selectivo.
6. 7.- Del tubo de enriquecimiento despus de incubado se siembran medios selectivos y
diferenciales y se identifican las colonias de inters.

DIAGRAMA DE TRABAJO

Heces
Agar Mac Conkey
Agar EMB
Azul de metileno
Agar ENDO
Agar XLD
Agar tergitol 7
SSI al 0.5%
Enriquecimiento
Caldo tetrationato
o
Caldo selenito
Agar SS
Agar verde Brillante
Agar sulfito de bismuto
Agar XLD
Identificacin
bioqumica

IDENTIFICACIN DE Vibrio cholerae

Reporte del coprocultivo
Realizar un informe del estudio para el mdico incluyendo los siguientes datos:
1. Nombre completo del Paciente.
2. Edad y sexo del mismo.
3. Tipo de cultivo.
4. Si la muestra contena microorganismos de la flora normal, o las bacterias patgenas a nivel
intestinal.

5. Las caractersticas principales de la muestra.
6. Sus observaciones con las diferentes tinciones.
7. Si existe algn comentario se le realiza al mdico con sus respectivas sugerencias.
8. Firma del responsable.

Cuestionario
1. Menciona la flora que podemos encontrar normalmente en una muestra de heces.
2. Cules son los principales patgenos que podemos encontrar en este tipo de muestra.
3. En una muestra slida, qu bacteria buscamos principalmente?
4. Qu factores intervienen para que un microorganismo pueda causar una infeccin
gastrointestinal?
5. Qu bacterias producen enterotoxinas?

PRCTICA No.2
INFECCIONES DE VAS URINARIAS
UROCULTIVO

Introduccin
Las infecciones de las vas urinarias son muy frecuentes y presentan una marcada resistencia al
tratamiento y muchas de ellas con tendencia a redicivar especialmente en las personas del sexo
femenino, considerndose riesgosas porque pueden evolucionar a enfermedades renales graves,
como pielonefritis, presentndose en algunos casos de manera asintomtica, o como enfermedad
aguda o crnica.
Las infecciones agudas son causadas generalmente por un solo microorganismo, mientras
que las crnicas por varios microorganismos. Las bacterias que con mayor frecuencia se aislan de
la orina de pacientes son E. coli, Staphylococcus, Proteus, Enterococcus faecalis, Salmonella,
Pseudomonas, Mycobacterium, ocasionalmente Neisseria gonorroheae o Candida albicans.

Objetivo
El alumno aprender las diferentes tomas de muestra de la orina, as como la tcnica para su
cultivo.

Material
Placas de Petri con Agar Mac Conkey.
Placas de Petri con Agar Sal y Manitol.
Placas de Petri con Agar sangre de carnero
Placas de Petri con Agar Thayer Martin.
Placas de Petri con Agar de DNAsa.

Tubos con medio de Biggy
Tubos con medios: TSI, LIA, MIO, Urea y Citrato para pruebas bioqumicas
Asa calibrada.
Juego de colorantes de Gram
Taxos de catalasa, oxidasa, PN, ESD. Bacitracina 0.04 U
Portaobjetos y cubreobjetos.
Placas estriles.
Pipetas estriles.
Tubos estriles.
Solucin Salina Isotnica.
Matraz con Agar Nutritivo estril.
Cuenta colonias.

Desarrollo
Toma de muestra
La muestra idnea es la primera miccin de la maana, ya que permite la multiplicacin de
bacterias durante la noche.
Tcnicas para mujeres
1. La paciente debe quitarse la ropa interior.
2. Se lavar las manos cuidadosamente con agua y jabn, las enjuagar con agua y las secar
con una toalla limpia.
3. Se separarn los labios mayores y menores, y los mantendr separados en todo momento
hasta que se haya recogido la orina.
4. Con una gasa enjabonada se lava bien la vulva pasndola de delante hacia atrs, se
repetir el proceso un total de 4 veces.
5. Enjuagar cuidadosamente con agua hervida para eliminar los restos de jabn.
6. Se indicar a la paciente que orine desechando los 20-25 primeros mililitros, tras lo cual y
sin interrumpir la miccin, se recoger el resto de la orina en el recipiente.
7. El frasco de boca ancha y estril debe sujetarse para que no tenga contacto con pierna,
vulva o ropa de la paciente. Los dedos no deben tocar el borde del frasco o su superficie
interior.

Tcnica para hombres
1. Lavado de las manos con agua y jabn.
2. Retraer completamente el prepucio, que se mantendr as en todo momento, hasta que se
haya recogido la orina.
3. Limpiar el glande con jabn neutro.
4. Eliminar los restos de jabn enjuagndolo con agua hervida.
5. Se pedir al paciente que orine desechando los primeros 20-25 mililitros y sin interrumpir
la miccin, recoger el resto de la orina en el recipiente estril.

Tcnica para nios
1. En nios y nias mayores la orina se recoge de forma similar a los adultos.
2. En nios y nias ms pequeos, la orina se recoger en colectores o bolsas estriles
especialmente diseadas para ellos de la siguiente forma:
a) Lavado cuidadoso de los genitales y rea perineal igual que en los adultos.
b) Colocar la bolsa de plstico o el colector.
c) Vigilar la bolsa cada 30 minutos y tan pronto como el nio haya orinado, deben
retirarse y enviarse al laboratorio para su procesamiento.
d) Si la miccin no se ha realizado en una hora, se repite la operacin colocando una
nueva bolsa.

Otros pacientes
1. En pacientes ingresados con imposibilidad de recoger la muestra por s mismos, se
realizar sondaje vesical por personal sanitario experto con las medidas aspticas
oportunas.
2. Orina de pacientes con catter permanente.
a) Se limpiar el catter con una gasa humedecida en alcohol o solucin yodada.
Dejar secar unos minutos.
b) Pinchar directamente con la aguja el catter, por la zona desinfectada, aspirando
entre 3-5 mL.

c) Para su transporte puede enviarse en la jeringa o pasar la orina a un recipiente
estril. Si no puede llevarse al laboratorio, se debe refrigerar a 4C.
d) Como regla general se considera que la muestra de sonda vesical no es una
muestra adecuada y que est justificado rechazar su procesamiento.

Aspiracin suprapbica
1. Este tipo de procedimiento solo puede ser realizado por personal mdico. Se usa para obtener
el diagnstico exacto en los recin nacidos y en los nios pequeos, es una forma de
demostrar el origen de la infeccin de la vejiga y la bacteriuria con microorganismos que se
originan ms all de la vejiga, as como la bsqueda de bacterias anaerobias.
2. Hacer una puncin directa en la vejiga a travs de la pared abdominal con aguja y jeringa.
3. Este tipo de mtodos se considera muy agresivo.

Transporte de la muestra
La orina debe llegar al laboratorio en el plazo de una hora. Cuando esto no sea posible debe
refrigerarse a 4C durante un tiempo mximo de 24 horas. El laboratorio debe controlar el
transporte, garantizndose que las muestras han sido refrigeradas desde el momento de su toma,

siendo admisible, si no puede garantizarse el transporte correcto, la utilizacin de algn
conservante (cido brico al 2% o el sistema comercial con brico-formiato).
Volumen mnimo de la muestra.
Es suficiente un volumen de orina de 5-10 mL, ver tabla

Recomendaciones sobre el volumen de orina

Mtodo del asa calibrada 10
-3

1. Se basa en el uso del asa calibrada para inocular un volumen conocido de orina en la placa.
2. Agitar la orina, y tomar una asada de orina con el asa calibrada procurando que solo entre la
rueda y se descarga en lnea rectas en el centro de la placa y se estra.
3. Se incuban las placas a 37C por 24 h.
4. Contar el nmero de colonias que se desarrollan en las placas y se calcula las unidades
formadoras de colonias por mL (UFC/mL).
5. Se identifica el microorganismo segn sus caractersticas.

Mtodo de dilucin con pipeta
1. Se coloca 0.1 mL de orina en 9.9 mL de solucin salina isotnica (dilucin 10
2
) se
homogeneiza el tubo perfectamente.
2. Con una pipeta estril se toman 0.1 mL de esta dilucin y se transfiere a un segundo tubo
conteniendo 9.9 mL de solucin salina isotnica (dilucin 10
4
).
3. Se toman 0.1 mL de cada uno de los tubos y se depositan en placas de medios de cultivo
seleccionados.
DETERMINACION
VOLUMEN
(mL)
COMENTARIOS
Bacteria 0,5-1 Primera orina de la maana.
Hongos >20 Primera orina de la maana.
Mycobacterias >20 Primera orina de la maana tres das consecutivos.
Anaerobios 1
Aspirado suprapbico, enviar en un sistema de transporte
para anaerobios
Virus 10-15
Primera orina de la maana, enviar con hielo y
transportar al laboratorio inmediatamente.
Parsitos. Orina de 24 horas.

4. La suspensin bacteriana se extiende rotando las placas suavemente, se incuba a 37C de 18-
24 h.
5. Se cuenta el nmero de colonias de acuerdo al factor de dilucin correspondiente.

Mtodo de vaciado en placa
1. Se coloca 1 mL de cada una de las diluciones arriba mencionadas dentro de cajas de Petri
estriles.
2. Se agrega el medio de cultivo fundido y enfriado a 45C se rota suavemente la placa para
que se homogeneice perfectamente y se deja solidificar el medio.
3. Se incuban las placas a 37C de 18-24 h.
4. Se cuenta el nmero de colonias.
5. De acuerdo al factor de dilucin se calcula las UFC/mL.

DIAGRAMA DE TRABAJO

Reporte
Una parte importante del urocultivo es la interpretacin del resultado. El criterio de 100,000 o
ms microorganismos por mL de orina para el diagnstico de la bacteriuria significativa es
primariamente de ndole operacional, cuando se emplea el mtodo del vaciado asptico para
Agar Mac Conkey
Agar sangre de carnero
asa calibrada 10
-3

Cent. 2000g/10 min
Sedimento
Cuantificacin
No. de colonias X 1000
No. de UFC/mL
Thayer Martin
(N. gonorrhoeae)
Agar Biggy
(Candida albicans)
Identificacin
bioqumica
Primera miccin
matutina
Chorro medio

recoger las muestras. Actualmente se utiliza el criterio de Kass para detectar una bacteriuria
verdadera.
La bacteriuria verdadera se caracteriza usualmente por cuentas que exceden sobradamente el
1000,000 de colonias por mL menos de 10,000 UFC/ mL se considera negativo. Sin embargo, es
muy importante el criterio del mdico de acuerdo al estado clnico de su paciente.

El reporte deber contener los siguientes datos:
Nombre del Paciente
Edad
Sexo
Fecha
Hora de la toma de muestra
Nombre del mdico
Tipo de estudio:
Resultado:
P/e: Se aslo E. coli 650,000 UFC/mL.
Negativo a las 48 h de incubacin
Firma del Responsable.

Cuestionario
1. Menciona a partir de qu rea del aparato urinario es estril.
2. Escribe los microorganismos que podemos encontrar como microflora residente en la
uretra.
3. Qu es la bacteriuria?
4. Por qu es importante realizar cultivos cuantitativos en una muestra de orina?
5. Por qu la orina debe procesarse lo ms pronto posible?

PRACTICA No. 3
SENSIBILIDAD A LOS ANTIMICROBIANOS METODO DE KIRBY-BAUER
ANTIBIOGRAMA

Introduccin
En los ltimos aos, las bacterias resistentes a los antimicrobianos, han causado varios brotes de
infecciones que produjeron muchas muertes. Por ello es necesario establecer programas
nacionales e internacionales de vigilancia de la resistencia de las bacterias a los antibiticos,
utilizando pruebas de sensibilidad fidedignas que proporcionen datos comparables. La
informacin microbiolgica y epidemiolgica disponible ayudar a los clnicos a seleccionar el
agente microbiano ms apropiado para tratar cada infeccin.

Plantear la necesidad de saber cul es el antimicrobiano que se debe utilizar para eliminar
el microorganismo que est provocando la infeccin, es de suma importancia en pacientes cuyas
terapias antimicrobianas han tenido poco xito, principalmente en pacientes hospitalizados.
Para esto es necesario conocer:
1. La susceptibilidad del microorganismo in vitro
2. La relacin de susceptibilidad entre el microorganismo y las bacterias de la misma especie.
3. Las propiedades farmacolgicas de los antimicrobianos, incluyendo su toxicidad,
distribucin, absorcin y excrecin.
4. Experiencia clnica en el tratamiento
5. Historia natural del proceso patolgico.
6. El estado inmune del husped

El papel que juega el laboratorio es de suma importancia, ya que al determinar la
susceptibilidad de los microorganismos in vitro, dar una pauta a seguir sobre cul debe ser el
antimicrobiano que se debe usar, sin dejar de considerar las diferencias en su actividad in vitro.
Para este tipo de estudios existen varios mtodos como son:
1. Dilucin seriada en tubo
2. Dilucin seriada en placa.
3. Difusin en discos de papel filtro
4. Sistemas automatizados
La seleccin del mtodo, va a depender de:
1. Nmero de pruebas que se procesen diariamente.
2. Tipo de microorganismo que se trata, del sitio que se aisl, tipo de patogenicidad, etc.
3. Equipo automatizado que se cuente.

Objetivo
Que el alumno realice la tcnica de difusin en disco de Kirby-Bauer para determinar la
susceptibilidad del patgeno in vitro ante determinados antimicrobianos

DIFUSIN EN DISCOS DE PAPEL FILTRO (Modificado de la FDA y la NCCLS del
mtodo original de Bauer, Kirby. Sherris y Turck 1966).
Utilizando discos de papel filtro con diferentes concentraciones del antimicrobiano, s obtiene
dimetros en la zona de inhibicin proporcionales a la concentracin. Para seguir este mtodo es
indispensable:
1. Efectuar el antibiograma a microorganismos de crecimiento rpido, por lo que no se
deber emplear en organismos de crecimiento lento, anaerobios obligados.
2. Siempre se realizar con cultivos puros y con cepas control.
3. El medio empleado es el de Mueller-Hinton cuyo pH final deber ser 7.2 a 7.4.
4. Los microorganismos control utilizados para realizar esta tcnica son: Staphylococcus
aureus (ATCC 25923) y Pseudomonas aeruginosa (ATCC 27853)
5. Verificar la calidad de los discos as como su fecha de caducidad.

6. Para probar la susceptibilidad de Haemophylus y Streptococcus se utiliza el medio
suplementado con sangre de carnero.

Material
1. Placas con medio de Mueller Hinton de 15 cm de dimetro
2. Placas con medio de Mueller Hinton con sangre de carnero
3. Tubos con 4 ml de caldo Mueller Hinton
4. Hisopos estriles
5. Pinzas
6. Sensidiscos para Grampositivos y Gramnegativos
7. Cepas control
8. Regla transparente
9. Alcohol
10.Tubo del Nefelmetro de McFarland al 0.5%
11.Solucin salina isotnica estril.

Desarrollo
1. Con un asa en punta se tocan 4 5 colonias morfolgicamente iguales y se inoculan en un
tubo con caldo Mueller Hinton.
2. Incubar a 35C hasta que aparezca una leve turbidez (2 a 5 h).
3. Se ajusta la turbidez tomando como referencia el tubo 0.5 del Nefelmetro de McFarland.
4. Se introduce el hisopo en el caldo de tal forma que se humedezca con la suspensin
bacteriana, se le quita el exceso de caldo en las paredes del tubo.
5. Sembrar el microorganismo en la placa de Mueller Hinton en tres direcciones para sembrar
uniformemente. Al final se pasa el hisopo en el borde de la placa.
6. Colocar los sensidiscos distribuidos en forma uniforme o en su defecto usando un dispensador
automtico, con una presin ligera.
7. Incubar la placa de Petri en forma invertida durante 18 h a 35C.
8. Se mide los halos de inhibicin con la regla.
9. La interpretacin de los dimetros de las zonas de inhibicin de las cepas se hace en base a las
tablas entregadas por el fabricante.

Diagrama de procedimientos

Reporte
1. Se informa la actividad de los antibiticos contra los microorganismos empleados.
2. Si la cepa es de microorganismos resistentes a la penicilina se debe probar su comportamiento
a otros antibiticos.
3. S el paciente es sensible a la penicilina se debe usar eritromicina y la tetraciclinas como otra
alternativa.
4. Se reporta el nombre de la bacteria con su gnero y especie as como su comportamiento al
antibiograma.
Cuestionario
1. Describe las diferentes tcnicas que se utilizan para la realizacin de los antibiogramas.
2. A qu microorganismo le realizas el antibiograma?
3. Cul es la tcnica que utilizaste en la prctica y qu nombre recibe?
4. Qu medio de cultivo utilizaste para esta tcnica?
5. Por qu se calibra la muestra a una turbidez de 0.5 y a cuntas bacterias equivale?

PRCTICA No. 4
TRACTO RESPIRATORIO SUPERIOR
EXUDADO FARNGEO Y NASOFARNGEO

Introduccin
El estudio del exudado farngeo y nasofarngeo es importante para el diagnstico de ciertas
infecciones consideradas dentro de las principales causas de morbilidad y mortalidad en todo el
mundo. Dentro de las principales bacterias patgenas causantes de infeccin estn los
estreptococos.

Tambin es muy importante conocer la flora normal en las vas respiratorias altas y bajas
para un buen reporte, ya que la orofaringe es un sitio expuesto y se debe distinguir a los
patgenos de los comensales con ayuda del cultivo.

El exudado farngeo y nasofarngeo son las muestras ms empleadas para el estudio
bacteriolgico de una infeccin de vas respiratorias superiores y es requisito importante que sean
tomadas en forma adecuada para garantizar resultados confiables y correctos.

Objetivo
Que el alumno aprenda a tomar la muestra para el aislamiento de bacterias de importancia mdica
de vas respiratorias altas

Toma y transporte de la muestra
Es muy importante la toma de la muestra al inicio del cuadro clnico antes de empezar cualquier
tratamiento.

1. Es importante indicarle al paciente que debe venir al laboratorio sin aseo bucal.
2. Sin haber ingerido ningn tipo de alimento.
3. No debe haber ingerido ningn antimicrobiano.
4. Se inclina la cabeza del paciente hacia atrs y se revisa con una lmpara la zona afectada
5. Se empuja la lenguas hacia abajo con un abatelenguas estril que permita mejor visin.
6. Se introduce un hisopo hacia las amgdalas, se frota suavemente la zona afectada.
7. Hay que evitar tocar la lengua, los dientes o la mucosa.

EXUDADO NASOFARINGEO

En la muestra indicada para la investigacin de Bordetella pertussis se puede tomar por
exudado o aspirado
1. Utilizar solamente hisopos de Dacrn o rayn con base de plstico o alambre
flexible. NO utilizar hisopos de alginato de calcio o con palillo de madera.
2. Introducir el hisopo por una de las narinas, aproximadamente 10 cm cuidando tocar solo
el extremo posterior del mango del hisopo y evitar tocar solo los cornetes.
3. Una vez tocado el fondo de la nasofaringe se frota suavemente y con movimiento rpido.

Aspirado:
1.- Desinfectar el lugar de la puncin con povidona.
2.- Introducir una aguja en el antrum maxilar por debajo del cornete inferior, o en el seno frontal
por debajo del marco supraorbital del ojo.
3.- Aspirar el lquido del seno. Cuando no se obtenga lquido, aplicar 1 mL de suero salino estril
y aspirarlo nuevamente.
4.-Inyectar una parte de la muestra en un medio de transporte para anaerobios y enviar el resto en
un contenedor estril o en la propia jeringa.

Transporte de la muestra
1. En caso que la muestra no se vaya a procesar de inmediato se deber depositar en medio de
transporte.
2. Es importante que el mdico nos indique en base al cuadro clnico de que proceso infecciosos
se sospecha, para conocer los requerimientos de cada una de las bacterias y sembrar las
muestras inmediatamente.

Material
1. Placas de Petri con. Gelosa sangre de carnero al 5%
2. Placas de Petri con medio de Sal y Manitol
3. Placas de Petri con Mac Conkey
4. Placas de Petri con medio de Thayer-Martin.
5. Placas de Petri con medio de Agar hemina bacitracina extracto de levadura (GHBL).
6. Placas de Petri con medio de Biggy
7. Tubos con medios TSI, LIA, MIO.CS. y Urea para pruebas bioqumicas
8. Tubos con caldo Soya Tripticasa
9. Matraz con 15 ml de agar de Soya tripticasa
10.Hisopos estriles
11.Abatelenguas estriles
12.Colorantes de Gram
13.Frasco con cloro

14.Sensidiscos de Bacitracina de 0.04 U
15.Sensidiscos de Optoquina
16.Sensidiscos de Novobiocina
17.Tubos con agar bilis esculina
18.Tubos de Caldo soya tripticasa con 6.5 % NaCl

Desarrollo
Es importante seguir el diagrama de trabajo que se indica en esta prctica. Aunque el uso
de agar sangre de carnero es obligado para la bsqueda de Streptococcus hemoltico.
1. Se toma la muestra como ya se indic anteriormente, se siembra en los medios: agar sangre de
carnero, Thayer Martin, Sal y Manitol etc.
2. Se incuban 24 h a 37C
3. Hacer frotes y teir por tcnica de Gram, Ziehl Neelsen, Giemsa para investigar asociacin
con fusoespirilar.
4. S en las tinciones se sospecha de Corynebacterium diphteriae se debe seguir un diagrama de
trabajo especfico para su identificacin as como el aviso inmediato a las autoridades de la
S.S.A.
5. Se debe leer todas las placas y se identifica a los microorganismos patgenos.
Es importante en nios menores de cinco aos la investigacin de Haemophilus influenzae.
Es de gran trascendencia epidemiolgica determinar la presencia de portadores de Neisseria
meningitidis.
Otro problema importante son los casos de Bordetella pertussis es importante sembrar las
muestras en medio de Bordet-Gengou y seguir un diagrama especfico para su identificacin
as como la notificacin de los casos a la S.S.A.

Reporte
El reporte al mdico es de acuerdo a nuestros resultados, es importante tomar en cuenta la edad y
sexo del paciente.
1. Se aisl Flora Normal
2. Se identific el siguiente microorganismo, se pone gnero y especie
3. Es posible encontrar ms de un microorganismo patgeno en un cultivo

4. De preferencia a estas muestras se les realiza antibiograma, si tiene ms de una bacteria
patgena a cada una se les realiza su antibiograma

DIAGRAMA DE TRABAJO

Cuestionario

1.- Cul es la importancia de realizar un cultivo farngeo?
2.- Qu indicaciones le das al paciente para una correcta toma de muestra?
3.- Menciona la flora normal de faringe.
4.- Menciona a los principales patgenos que podemos encontrar como posibles productores de
una faringitis.
5.- Cul es la importancia de buscar a Streptococcus pyogenes?

Caldo estreptosel
Agar Biggy
Agar sangre de
carnero
(CGP, BGN)

GHBEL
(H. influenzae)
Candida albicans
Agar sangre de
carnero

Medio de
transporte Stuart
Pruebas de identificacin
Colonias -hemolticas

PRCTICA No. 5
INFECCIONES DE VAS RESPIRATORIAS BAJAS
(CULTIVO DE EXPECTORACIN)

Introduccin
Las infecciones de las vas respiratorias inferiores son causa importante de enfermedad y muerte
a nivel nacional. Siendo la tuberculosis en sus diferentes cuadros agudos, una de las ms
frecuentes, se presentan tanto en gente joven y anciana, as como en pacientes inmunodeficientes
y a consecuencia principalmente del uso del tabaco.

De los principales agentes bacterianos asociados a neumonas sobresalen en primer
trmino Streptococcus pneumoniae, Klebsiella pneumoniae, Haemophilus influenzae; bacterias
del tipo anaerobio tienen un papel importante en algunas muestras, por lo que se recomienda la
bsqueda de Chlamydia pneumoniae y Mycoplasma pneumoniae que se asocia con neumonas
atpicas, Francisella tularensis, E.coli, Ps aeruginosa, levaduras del tipo de Candida albicans.

En las condiciones habituales de la clnica diaria, la expectoracin no es una muestra
representativa de la situacin existente en el tracto respiratorio inferior por su mezcla con
secreciones procedentes de todo el rbol traqueo-bronquial y con la flora saprfita de la
orofaringe. No obstante es un mtodo fcil y rpido cuya utilidad o relacin entre resultado
obtenido y verdadera etiologa depende en gran medida de su correcta obtencin, control de
calidad antes de iniciar su procesamiento, tipo de agente que se pretenda detectar y valoracin
adecuada del resultado.


Objetivo
Que el alumno conozca la metodologa para el manejo e identificacin de los agentes etiolgicos
de las vas respiratorias bajas a partir de esputo y otros productos .

Toma de muestra
1.- Enjuagar la boca con agua destilada estril o solucin salina.
2.- Obtener el esputo tras una expectoracin profunda, preferentemente matinal.
3.- De no producirse expectoracin espontnea, puede inducirse el esputo con nebulizaciones de
suero fisiolgico estril (15 mL durante 10 minutos), siendo til adems realizar un drenaje
postural o fisioterapia respiratoria.

LAVADO O CEPILLADO BRONQUIAL

1. Este tipo de muestras solo son tomadas por un mdico en condiciones aspticas.
2. Evitar la contaminacin con la flora de la cavidad oral.
3. Se recomienda solo en pacientes hospitalizados con SIDA, Cncer o enfermedad obstructiva
crnica (EPOC).
4. La muestra se debe procesar de inmediato una vez llegada al laboratorio.

Volumen mnimo

De 2 a 10 mL, si es posible.

Transporte y conservacin
Envo inmediato al laboratorio (no superior a 2 horas). Si no es posible, conservar en
refrigeracin 4C.

Observaciones

1.- Es preferible realizar la toma antes de instaurar el tratamiento antibitico.
2.- No es til para anaerobios.
3.- No son inoculables las secreciones de sospechosa procedencia.
4. - La expectoracin debe rechazarse hasta obtener un esputo de calidad suficiente (mas de 25
leucocitos polimorfonucleares por campo 100x, y de 10 clulas epiteliales por campo 100x).

Material
1. Placas de Agar sangre de carnero.
2. Placas de Agar de Mac Conkey.
3. Placas de Agar Cetrimida.
4. Placas de Agar de Sal y Manitol.

5. Placas de Agar de Thayer Martin.
6. Placas de Agar Levinthal.
7. Placas de gelosa sangre en base Columbia con cido nalidxico y colistina.
8. Tubos con medio de Biggy
9. Tubos con medios TSI, UREA, CS, LIA y MIO para pruebas bioqumicas
10. Portaobjetos
11. Cubreobjetos
12. Microscopio
13. Juego de colorantes de Gram.
14. Tinta China
15. Aceite de inmersin
16. Taxos de optoquina y bacitracina de 0.04 U y 10 U
17. Tubos estriles de plstico desechable.
18. Pipetas Pasteur estriles
19. Centrfuga.

Desarrollo
Todas las muestras de cepillado bronquial o de esputo se deben trabajar con las siguientes
medidas de seguridad: Uso de campana de seguridad, guantes desechables, cubrebocas y lentes
protectores o en su defecto mascarillas.

Seleccin de la muestra
1. La muestra se examina microscpicamente para identificar la presencia de sangre y material
purulento as como el color de la misma.
2. Se toma de la porcin ms purulenta o con restos de sangre y a partir de esta porcin se hace
una tincin de Ziehl-Neelsen, tincin de Gram y el examen en fresco el cual una vez puesto el
cubreobjetos se presiona de tal forma que la muestra se distribuya.
3. Observar todo el porta-objetos para determinar la distribucin de las clulas tipo.
4. Se examina por la ptica de Normarsky. Hay que seleccionar 10 campos representativos y en
ellos se cuentan el nmero y proporcin de leucocitos y de clulas epiteliales de descamacin.
Segn los resultados se clasifican de acuerdo a Welch y Kelly

CLASIFICACIN DEL ESPUTO SEGN WELCH Y KELLY

Clase de Grupo Clulas Leucocitos
Welch-Kelly Normansky Epiteliales

I 0 <25 <25
1 >25 <10
2 >25 10-25

II 3 >25 >25

III 4 10-25 >25
5 <10 >25
6 <25 >25

Tomado de: Welch DF.kellMT.J.Clin.Microbiol 1979, 9:520-524

5. Las muestras que sean de clase III sern cultivadas.
6. Las muestras que sean de clase I y II se rechazan, no se deben cultivar.
Nota. Es muy importante indicar el porqu del rechazo de la muestra al mdico y solicitar una
nueva muestra y se enva con la siguiente leyenda. La muestra no fue aceptada para el cultivo
debido a la presencia de ms de 25 clulas epiteliales por campo microscpico (100x).
7. Inocular la porcin sobrante del material purulento en los medios de cultivo adecuados por
estra cruzada, no olvidar hacer picadura en las placas de gelosa sangre de carnero para
certificar la hemlisis.
8. Incubar las placas con sangre a 35-37 C en atmsfera parcial de CO
2
.
9. Se identifican las bacterias de acuerdo a su gnero y especie.

Reporte
1. Proporcionar un informe preliminar despus de la observacin de los cultivos.
2. La flora normal presente en el cultivo no debe ser identificada ni reportada.
3. Si no se observan microorganismos al trmino de la incubacin y la identificacin de los
microorganismos patgenos ya se realiz .se debe enviar el informe final con fecha y firma del
responsable. Se debe informar el cultivo p/e Negativo a bsqueda de S. pyogenes.
4. Si no hay crecimiento despus de dos das el informe final es el siguiente: No hubo
crecimiento bacteriano a las 48 h de incubacin.

En el laboratorio se debe contar con pruebas rpidas para la identificacin de antgenos que
ayudan al mdico para establecer una terapia antimicrobiana adecuada y en el menor tiempo
posible.
En paciente con fibrosis qustica o en huspedes comprometidos es semejante; sin embargo, es
importante reportar todos los microorganismos independientemente la cantidad en que se
encuentra, y es muy importante realizarles el antibiograma aunque el mdico no lo solicite.

DIAGRAMA DE TRABAJO

37 C /CO2 24 48 h

Cuestionario
1.- Qu caractersticas debe tener una muestra de expectoracin para poderla procesar?
2.- Qu microorganismos pueden afectar las vas respiratorias bajas?
3.- Cul es el principal microorganismo que buscamos en una expectoracin?
4.- Mencione otras tcnicas que se pueden utilizar para identificar a Streptococcus pneumoniae?
5.- Cul es el fundamento de la tincin de Ziehl-Neelsen?
Muestra
(Esputo)
Agar Gelosa Sangre
Agar Gelosa Chocolate
Agar Mac Conkey
Agar Sal y Manitol
Agar Biggy

Examen en fresco
Tincin de Gram

BAAR

PRCTICA No. 6
BSQUEDA E IDENTIFICACIN DE
Mycobacterium tuberculosis

Introduccin
La tuberculosis en nuestro pas, es actualmente uno de los problemas ms importantes de salud en
los ltimos 5 aos y su resurgimiento se da a partir de la epidemia de VIH que ataca a todo el
mundo.
El diagnstico de las micobacterias se puede realizar en diferentes productos biolgicos
como son: esputo, orina, lavado gstrico, raspado larngeo, lavado o cepillado bronquial, materia
fecal, sangre menstrual, heridas.

Objetivo:
Que el alumno conozca el manejo de las diferentes muestras para el aislamiento de
Mycobacterium tuberculosis

Toma de muestra
Una parte muy importante para un buen resultado es la toma de muestra la cual deben cubrir
algunos requisitos indispensables como son:
1. Calidad de la muestra.
2. Cantidad.
3. Envase estril y desechable.

EXPECTORACIN
1. La muestra debe ser de preferencia la primera de la maana.

2. La muestra que son enviadas al laboratorio de preferencia se le agrega carbonato de sodio que
tiene la finalidad de disminuir el crecimiento de la flora asociada, y disminuir el mal olor.
3. En caso de nios se puede usar el hisopo larngeo o nasofarngeo.
4. No olvidar usar frasco estril biodegradable de boca ancha.

ORINA

1. Se debe obtener en un frasco estril y de boca ancha, despus de lavado estricto de genitales.
2. Se puede usar orina de 24 h o la primera de la maana.
3. En este tipo de muestras es posible que el mdico lo solicite en forma seriada.

LAVADO GASTRICO
1. Este tipo de muestras solo las efecta un mdico
2. Se utiliza una sonda gstrica estril y desechable
3. El contenido del lavado gstrico se pone en un frasco estril
4. Se trabaja el sedimento.
5. Este tipo de muestras se deben trabajar el mismo da que se toman

LAVADO O CEPILLADO BRONQUIAL y PLEURAL.
1. Este tipo de muestras es tomado por el mdico en sala de operaciones bajo condiciones de
asepsia.
2. Este tipo de muestras se reciben en un frasco estril con un volumen de acuerdo al aseo que le
realizaron al paciente.
3. Se deben procesar el mismo da que se reciben.
4. Se trabaja con el sedimento de la misma.

Material que se utiliza para el lavado o cepillado bronquial

HECES
1. Se recibe la muestra en un frasco estril y desechable.
2. Se prepara una suspensin gruesa de materia fecal y solucin salina.
3. Se agrega un volumen igual de ter. Se agita y se centrifuga a 3000 rpm/5 min.
4. Se elimina el sobrenadante.
5. Se utiliza la capa gelatinosa
6. Se realiza la tincin de BAAR.

7. El resto de la materia fecal se trata con NaOH al 4% se siguen los pasos igual que el esputo.

LIQUIDO CEFALORRAQUIDEO.
1. Este tipo de muestras las obtiene el mdico en forma asptica
2. Se reciben en tubos estriles.
3. Se centrifuga la muestra
4. Del sedimento se realizan las tinciones y se siembra
5. La muestra se debe trabajar en forma inmediata el da que se recibe

TEJIDOS
1. Se recibe en un frasco estril de boca ancha.
2. Se toman fragmentos de tejidos y se trituran en un mortero estril
3. Se hacen frotes delgados
4. Las dems muestra se siembra en forma directa.

Material
1. Tubos estriles de tapn de rosca de plstico biodegradable con capacidad de 40 ml guantes
desechables
2. Cubrebocas o en su defecto mascarilla
3. Frascos estriles
4. Agitador vortex
5. Equipo de Ziehl-Neelsen
6. Equipo de Auramina Rodamina

7. NaOH al 4%
8. Pipetas Pasteur estriles
9. Frasco con fenol al 10%
10.Pinzas
11.Tubos con medio de Lowenstein - Jensen
12.Microscopio
13.Aceite de inmersin
14.Portaobjetos.

Desarrollo
BACILOSCOPIA DIRECTA DEL ESPUTO
1. Hacer un frote de la porcin purulenta, se puede usar un aplicador de madera.
2. Extender la muestra en forma uniforme.
3. El aplicador se desecha dentro del frasco de la muestra.
4. Se deja secar el frote al aire.
5. Se fija al calor.
6. Se tie por la tcnica que se tenga para la bsqueda de BAAR.

INTERPRETACION.
El nmero de bacilos es de suma importancia ya que se relacionan con el grado de infectividad
del paciente. La lectura se realiza como lo muestra el esquema de tal forma que se observa toda la
preparacin.

Informe de las baciloscopias para BAAR
Tomado de International 4 Union Againts Tuberculosis 1977
No. de bacilos Reporte de Resultados
Negativo No se observan BAAR en 100 campos
De 1 a 9 BAAR Informar el nmero de bacilos en 100 campos
Positivo + Menos de un bacilo x campo observados en 100 campos
Positivo ++ De 1 a 10 bacilos por campo en promedio en 50 campos observados
Positivo +++ Ms de 10 bacilos por campo en 20 campos observados

CONCENTRACION Y CULTIVO DEL ESPUTO
Dado las caractersticas de las muestras es importante seguir estas indicaciones para prepararlas y
poder as sembrarlas en el medio selectivo.

Mtodo de Petroff modificado
1. Se toman 2 mL del esputo y se transfieren a un tubo de tapn de rosca de plstico desechable y
se mezclan con un volumen igual de NaOH al 4% con rojo de fenol.
2. El tubo se agita en un vortex durante 20 seg. Se incuba a 37 C por 15 min.
3. Se centrifuga a 3,000 r.p.m. durante 15 min. (Por ningn motivo se debe abrir la centrifuga si
no se ha detenido completamente).
4. Se decanta cuidadosamente el sobrenadante.
5. El sedimento se neutraliza con HCl 1N o con H
2
SO4 al 8%. El procedimiento de
neutralizacin debe ser muy cuidadoso de tal forma que el pH final no sea inferior a 6.5 , ni
superior a 7.2.
6. Se siembra 7 o 8 gotas del sedimento con pipeta Pasteur estril en dos tubos con medio de
Lowenstein-Jensen.
7. El sedimento se toma con pipeta Pasteur y se hacen dos frotes que se tien con los mtodos
existentes en el laboratorio para la bsqueda de BAAR puede ser la tincin de Ziehl - Neelsen
o de auramina rodamina.
8. Los tubos se deben incubar a 37C ,dejndolos en posicin horizontal con la tapa floja durante
24 a 48 hasta que se evapore el inculo .Posteriormente se ajusta la tapa con fuerza para evitar
que la muestra se evapore , se incuba durante 60 das.
9. Semanalmente se revisan los tubos hasta la octava semana. S no hay desarrollo se informa
como negativo. Un cultivo se da como negativo despus de 60 das de incubacin.
10.Si hay crecimiento, se identifica a M. tuberculosis las caractersticas del crecimiento son
masas pequeas, de superficie mate y consistencia crea. Tie diferentes tonos desde amarillo
muy plido hasta anaranjado rojizo.
11.Los resultados se informan ya que se haya identificado con las pruebas especiales para el
gnero y la especie.

TRATAMIENTO DE LA ORINA
1. Se recibe la muestra en un frasco estril de boca ancha de preferencia la primera orina de la
maana.
2. Se centrifuga la muestra a 3000 r.p.m. por 30 min.
3. Decantar el sobrenadante y depositarlo en el frasco original, cuidar de limpiar la boca del tubo
con fenol al 10%. Se hace el frote del sedimento.
4. El resto del sedimento se trata con NaOH al 4%, Agregando una cantidad semejante al
sedimento.
5. Se deja 15 min a 37C
6. Se siguen los mismos pasos que para la tcnica del esputo para sembrar el sedimento con
pipeta Pasteur estril.
7. Se realiza del sedimento la baciloscopia.
Reporte
En caso de tener BAAR se reportan como se indic en la tabla, es importante correlacionarlo
con el cultivo.

Cuestionario
1. Importancia mdica de Mycobacterium tuberculosis?
2. En la bsqueda de Mycobacterium tuberculosis para su cultivo qu tratamiento debes
darle a la muestra?
3. En qu condiciones debes trabajar a Mycobacterium tuberculosis y por qu?
4. Menciona algn medio selectivo para Mycobacterium tuberculosis, cunto tiempo
necesita incubarse y qu pruebas necesitas hacer para su identificacin.
5. Menciona un mtodo diferente al cultivo convencional para diagnosticar tuberculosis

PRCTICA No. 7
INFECCIONES OCULARES

Introduccin
Las infecciones oculares se manifiestan comnmente por el constante lagrimeo. Los
microorganismos aislados con mayor frecuencia dependen de la edad del paciente y su localidad.
Considerndose dentro de los pacientes de mayor riesgo a los recin nacidos por las posibles
secuelas irreversibles que pueden originarse en ellos.

Objetivo
Que el alumno conozca la metodologa para el manejo de este tipo de muestra e identifique las
bacterias que atacan principalmente este sitio

Toma de muestra cultivo ocular
1.- Indicar al paciente que debe abstenerse de aplicar soluciones antispticas en ambos ojos.
2.- Con un hisopo mojado en suero fisiolgico frotar sobre la conjuntiva.
3.- Identificar de que ojo procede la muestra.
4.- El transporte deber ser inmediato. Cuando no sea posible, se colocarn los hisopos en medio
de transporte tipo Stuart-Amies, que se mantendr a temperatura ambiente. Para Chlamydia se
utilizar un medio de transporte especfico ("2-SP").


Material
1. Hisopos estriles de alginato de calcio o de dacron.
2. Guantes estriles y desechables,
3. Placas de Gelosa sangre de carnero.
4. Placas de sal y manitol.
5. Placas de agar Mac Conkey.
6. Placas de Thayer -Martin.
7. Placas con medio de Levinthal Agar chocolate
8. Placas con Agar DNAsa
9. Tubos con Biggy.
10.Tubos con medios:TSI, LIA, MIO, Citrato y Urea para pruebas bioqumicas
11.. Reactivo de oxidasa.
12.Taxos de optoquina y bacitracina.
13.Equipo para bsqueda de Chlamydia.

Desarrollo
1. La muestra se toma del sito de dao y se siembra en los medios de cultivo indicados.
2. Es importante incubar las placas en las condiciones que requieran.
3. Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincin de Gram.
4. Se identifica el crecimiento segn el diagrama.
5. Para bsqueda de Chlamydia se realiza por medio de tinciones o en su defecto por mtodos de
inmunofluorescencia.

Reporte
Debido al tipo de muestra es importante reportar cualquier bacteria identificada para su
tratamiento inmediato.
1. Se reporta el resultado teniendo cuidado de indicar de que ojo procede la identificacin.
2. Es importante realizar el antibiograma en este tipo de muestra

DIAGRAMA DE TRABAJO

Cuestionario
1. Esquematiza la anatoma del ojo.
2. Menciona las diferentes tcnicas que se utilizan para la toma de muestra segn el
problema que se presenta en el ojo.
3. Qu flora podemos encontrar en el ojo?
4. Cules son los principales patgenos que podemos aislar?
5. Qu indicaciones le das al paciente para la toma de muestra?

Muestra
Inocular :
Agar sangre
Agar chocolate
Agar sal y manitol
Agar Mac Conkey
Agar Dextrosa Sabouraud
Tincin de Gram
Medio de
transporte Stuart

Prctica No. 8

INFECCIONES TICAS

Introduccin
Dentro de las infecciones que pueden generar complicaciones ms frecuentes estn la de los
odos ya sean por su forma crnica o aguda. El cuadro inicial puede asociarse a infecciones
respiratorias mal cuidadas, en nios por la introduccin de objetos extraos p/e botones, frijoles
etc.

Objetivo
Que el alumno conozca la metodologa para el manejo de este tipo de muestra, e identifique las
bacterias que pueden causar dao en odo

Toma de muestra.
1. Se le indica al paciente que se abstenga de aplicarse gotas de antimicrobianos.
2. Se introduce el hisopo teniendo cuidado de no lastimar, indicando el paciente hasta donde
soporta el hisopo.
3. Se diferencia los tubos del odo derecho e izquierdo.
4. En las infecciones crnicas se limpia el odo con solucin de cloruro de benzalconio 1:1000
para eliminar la flora contaminante.
5. Cuando se trata de perforaciones del tmpano debe ser tomada por el otorrinolaringlogo


Material
1. Guantes estriles desechables.
2. Hisopos delgados de alginato de calcio o de dacron.
3. Gasas estriles.
4. Placas de gelosa sangre de carnero.
5. Placas de Sal y Manitol.
6. Placas de Mac Conkey
7. Placas de agar de Levinthal
8. Placas con agar DNAsa
9. Tubos con medios TSI, LIA, MIO, CS y Urea.
10.Taxos de optoquina
11.Taxos con bacitracina.
12.Tubos con Biggy
13.Colorantes de Gram
14.Tubos con O/F con glucosa al 1%
15.Reactivo para catalasa
16.Reactivo para oxidasa.

Desarrollo
Despus de la toma de muestra es importante sembrarla en los medios de cultivos indicados y en
forma inmediata. Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincin de Gram y reportarla. La
identificacin se realiza en base al diagrama.

Reporte
En el reporte al mdico se debe indicar:

1. El resultado por separado de cada odo
2. Como se encontraba este cuando se le tomo la muestra.
3. Si se encontr algn objeto extrao.
4. Es importante realizarle el antibiograma en caso de que el cultivo se encuentre positivo.
5. S no se asla ningn microorganismo se reporta como negativo a las 72 h de incubacin.

DIAGRAMA DE TRABAJO

Cuestionario
1.- Esquematiza la anatoma del odo.
2.- De las diferentes partes del odo, menciona que flora podemos encontrar en cada una de ellas.
3.- Cules son los principales patgenos que puedes encontrar en el odo?
4.- Menciona las diferentes tcnicas que utilizas para la toma de muestra .
5.- Qu indicaciones le das al paciente para la toma de muestra de odo?

Muestra
Inocular :
Agar sangre
Agar chocolate
Agar sal y manitol
Agar Mac Conkey
Agar Dextrosa
Sabouraud/Biggy
Medio de
transporte Stuart

BENMERITA UNIVERSIDAD AUTNOMA DE PUEBLA

PRCTICA No.9
INFECCIONES DEL APARATO GENITAL
(EXUDADO CERVICO VAGINAL, VULVAR Y URETRAL)

Introduccin
Las enfermedades de transmisin sexual (ETS) son un problema importante en Salud Pblica.
Los principales agentes asociados a las ETS incluyen virus, bacterias, hongos, protozoarios y
ectoparsitos, los cuales estn involucrados en varios sndromes, por lo que la participacin del
laboratorio en el diagnstico es relevante. Sin embargo los microrganismos tambin pueden
introducirse en el aparato genital ya sea instrumentacin, es decir, presencia de aparatos extraos
al cuerpo los cuales pueden causar inflamacin o irritacin y favorecer la infeccin. Adems la
madre puede contagiar al nio durante el embarazo o durante el parto.

En general, la identificacin de las bacterias productoras de ETS no siempre es a travs de
cultivos, en algunos casos se requiere de tcnicas inmunolgicas. Como el caso de Treponema
pallidum ya que no existe ningn medio sinttico para su aislamiento; o Chlamydia trachomatis
que por ser una bacteria intracelular obligada requiere de clulas vivas para su multiplicacin, de
tinciones especiales o bien tcnicas de hibridacin para su identificacin.

Las infecciones agudas pueden extenderse por continuidad en el aparato genital y originar
secuelas graves en tanto que la infeccin puede tener caractersticas metastsicas y transmitirse
por va sangunea a otros rganos y tejidos.

Objetivo

Aprender a tomar una muestra de aparato genital y a procesarla en el laboratorio

Desarrollo
Este tipo de muestras requiere de condiciones especiales en cada caso y se deben tomar en
cuenta, las siguientes recomendaciones:
1.- Es importante tomarlas cuando la sintomatologa existe y obligatoriamente en los contactos
de la pareja sexual.
2.- El paciente no debe estar en tratamiento antimicrobiano.
3.- Es importante que se cuente con el material adecuado como son. hisopos de alginato de calcio,
de dacrn o tratados con soluciones amortiguadoras.
4.- Este tipo de muestras se deben sembrar en los medios de cultivo adecuados y en forma
inmediata.
5.- En caso de no tener los medios se debe utilizar medios de transporte y crecimiento.
6.- Existen casos de mujeres y en hombres donde es necesario muestrear otros sitios anatmicos,
sobre todo en los pacientes que refieren contacto oro-genital, ano-genital y oro-anal.

Exudado vaginal
1.- Con la paciente en posicin ginecolgica se introducir un espculo "sin lubricante" (si es
necesario para lubricar utilizar agua templada).
2.- Recoger la muestra bajo visin directa, con un hisopo, de la zona con mayor exudado, o en su
defecto, del fondo del saco vaginal posterior e introducirlo a un medio de transporte Stuart-Amies
(figura xx).
3.- Repetir la operacin con un segundo hisopo, hacer un extendido sobre un portaobjetos y
colocar el hisopo en un tubo con SSI, para la posterior observacin en fresco.
4.- Retirar el espejo y de la secrecin que qued en el espculo medir pH y hacer la reaccin de
aminas con KOH al 10%, se reporta positiva si desprende un olor caracterstico a pescado el
cual se debe a aminas voltiles.
5.- Cuando se sospeche la infeccin por Neisseria gonorrhoeae, Chlamydia trachomatis
Mycoplasma hominis o Ureaplasma urealtycum, deber enviarse muestra endocervical.
6.- Mantener la muestra a temperatura ambiente, o preferentemente, en estufa 35-37C hasta su
procesamiento, que deber ser antes de 3-6 horas.

Figura .Toma de muestra vaginal

Observacin en fresco

Las observaciones en fresco son de gran utilidad sobre todo en mujeres en las cuales existe
secrecin vaginal y en el caso de tricomoniasis, vaginosis bacteriana y candidiasis, as como en
la tricomoniasis en pacientes masculinos.

1. La muestra es recolectada en un tubo con solucin salina isotnica.
2. Se toma una gota de esta muestra y se coloca en un portaobjetos y se cubre con un
cubreobjetos.
3. Se observa al microscopio en objetivo de 40x y con poca iluminacin.
4. Se reporta si se observan Trichomonas vaginalis, levaduras, clulas clave, leucocitos y
lactobacilos.

Desarrollo
Exudado uretral
1. Limpiar cuidadosamente la mucosa circundante con gasas estriles.
2. Introducir un hisopo uretral fino suavemente con un movimiento de rotacin hasta
penetrar unos 2 cm dentro de la uretra (3-5 cm para la investigacin de Chlamydia
trachomatis). (figura) 3.- Repetir operacin con un segundo hisopo.
3. Un hisopo ser destinado al examen microscpico y el otro para al cultivo
4. La muestra deber procesarse como mximo en un plazo de 6-12 h.

5. Cuando no haya suficiente exudado, puede estimularse mediante un masaje suave
prosttico-vesicular.

Aislamiento

Las muestras se deben sembrar directamente en el medio de cultivo en forma adecuada. En el
caso de Thayer - Martin se debe sembrar en forma de Z con el hisopo proveniente de la toma de
muestra de crvix y posteriormente se estra con el asa en el laboratorio.
Las placas de agar sangre carnero, de Thayer Martin y de agar chocolate se incuban en atmsfera
parcial de CO
2
a 37C. Despus del tiempo de incubacin se deben revisar las placas y es
importante realizarles la tincin de Gram a los crecimientos. De acuerdo al crecimiento se
efectan las pruebas de identificacin como se muestra en el diagrama.

Figura .Toma de muestra uretral

DIAGRAMA DE TRABAJO

V

Agar Mac Conkey
Biggy

Gardnerella vaginalis
Candida albicans
Identificacin
bioqumica
Medio de
transporte
Stuart
Agar Sangre de
Carnero
Agar Sangre
Humana
Streptococcus
Staphylococcus

Thayer-Martin
Neisseria
gonorrhoeae
Enterobacterias
Tincin de Gram
Agar Chocolate
Solucin salina
isotnica
Observacin en
fresco
Trichomonas
vaginalis

Reporte
En el reporte se deber informarle al mdico lo siguiente:
1.- Edad del paciente.
2.- Sexo.
3.- Tipo de muestra.
4.- Fecha en el que se realiz el estudio
5.- Caractersticas del endocervix: si hay lceras, cantidad de flujo, olor, etc.
6.- pH Vaginal
7.- Tincin de Gram.
8.- Examen en fresco
9.- Resultado del cultivo
10.- Antibiograma (en caso de haberlo realizado)
Bsqueda de Chlamydia trachomatis.
Bsqueda de Treponema pallidum.
Firma del responsable.

Cuestionario
1. Qu indicaciones debes darle al paciente para la toma de muestra crvico vaginal?
2. Para qu utilizas el tubo con solucin salina y otro con medio Stuart?
3. Cul es la importancia de determinar el pH vaginal?
4. En qu consiste la prueba del KOH y para qu es til?
5. Menciona cules son los microorganismos que podemos encontrar como flora normal en
vagina.

BENMERITA UNIVERSIDAD AUTNOMA DE PUEBLA

PRCTICA No. 10
CULTIVO DE HERIDAS

Introduccin
Uno de los fenmenos que se observan con ms frecuencia en las enfermedades infecciosas es la
formacin de un exudado purulento a raz de la invasin bacteriana de una cavidad, tejido u
rgano del cuerpo. Clnicamente puede ir desde un sencillo o inocuo grano hasta uno o varios
abscesos con mltiples bolsas de pus. El exudado est constituido por microorganismos
invasores, leucocitos, principalmente polimorfonucleares y una mezcla de humores orgnicos y
fibrina. En algunos casos, el exudado puede recubrir la superficie del rgano, en otros, el exudado
puede estar tabicado por capas de fibrina y una red de clulas tisulares (ntrax). Incluso hay casos
en que el exudado proviene de una herida abierta, que por ello suelta lquido espeso o pus.

Uno de los principales problemas de pacientes fracturados, quemados u operados que se
encuentran en unidades hospitalarias son las infecciones que pueden adquirir en estos
nosocomios. En este tipo de infecciones pueden estar involucrados muchas bacterias, hongos y
virus diferentes, adems estas infecciones pueden estar involucrados uno o ms agentes causales.
Dada la diversidad de agentes etiolgicos y la complejidad de estas infecciones, el mdico a
menudo describe al microbilogo el aspecto de la lesin para ayudar en el diagnstico.

Objetivo
Aprender a tomar una muestra de herida y a procesarla en el laboratorio

Desarrollo
Toma de muestra de lesiones en la piel
1. Lavar cuidadosamente la superficie de la herida.
2. Recoger el pus mediante jeringa y aguja, aspirando preferentemente de zonas profundas.

3. Cuando la muestra sea insuficiente, instilar suero o solucin de Ringer lactato y aspirarlo
nuevamente en la jeringa. Para muestras lquidas se recomienda intentar obtener de 1-10
cm.
4. Cuando los procedimientos anteriores no sean factibles podr efectuarse un frotis de las
partes profundas de la herida con un hisopo.
5. La muestra se puede enviar en la misma jeringa de la extraccin, debidamente
identificada si puede procesarse antes de 2 horas y si no usar medio de transporte.

Toma de muestra de exantemas
1. Aspirar directamente con jeringa y aguja el contenido de las lesiones. Cuando no sea
suficiente, colocar una pequea cantidad de suero salino estril y aspirarlo.

Toma de muestra de abscesos cerrados
1. Desinfectar la piel. Limpiar la zona con alcohol, de forma concntrica comenzando por el
centro. Abarcar una zona de unos 10 cm.
2. Repetir la operacin con povidona. En pacientes con hipersensibilidad al iodo, en lugar de
povidona se utilizar alcohol dos veces consecutivas.
3. Dejar secar al menos 1 minuto para que la povidona ejerza su accin antisptica.
4. Realizar una puncin-aspiracin del absceso con jeringa y aguja.
5. Introducir una pequea parte de la muestra en el medio de transporte para anaerobios.
6. Desinfectar la superficie de goma del tapn con povidona e inyectar con la misma jeringa,
parte de la muestra. No debern utilizarse nunca los medios que hayan adquirido una
coloracin azul.
7. Dejar el resto de la muestra en la jeringa y remitirla as, o bien, traspasarla a un
contenedor estril.

Toma de muestra de fistulas
1. Limpiar cuidadosamente la superficie cutnea con alcohol y luego con povidona. Aspirar
el exudado de la parte profunda de la fstula con jeringa y aguja aproximadamente de 1 a
5 mL.

Procesamiento de la muestra
1. Realizar tinciones de Gram y Ziehl -Neelsen .
2. A partir de la muestra sembrar diferentes medios de cultivo de acuerdo al diagrama
3. En el medio de tioglicolato se eliminar el oxgeno, hirviendo durante 10 min. .
4. Todo el material se incuba a 37C durante 24 a 48 h
5. Las placas se deben revisar y a cualquier crecimiento se efecta la tincin de Gram, se
procede a identificar de acuerdo al gnero y especie
6. Es importante que en este tipo de muestras se realice el antibiograma.

REPORTE

En este tipo de muestras se debe reportar la tincin de Gram directa lo ms pronto posible para
iniciar tratamiento.

Se reporta el crecimiento como positivo en caso de cualquier crecimiento y negativo cuando no
existe crecimiento.
DIAGRAMA DE TRABAJO

Muestra
Agar Mac Conkey
Agar Sangre de Carnero
Agar Chocolate
Agar Sal y Manitol
Agar Biggy

Tincin de
Gram
Hisopo Jeringa
Tioglicolato
Anaerobios

Cuestionario
1. De qu microorganismos se encuentra constituida la flora normal de piel?
2. Menciona las diversas maneras en que podemos causarnos una herida y qu probables
microorganismos podramos aislar.
3. Escribe los pasos a seguir para la toma de una muestra de una herida infectada.
4. En qu casos es recomendable el cultivo de un tejido y cul es el mtodo utilizado?
5. En la bsqueda de anaerobios qu microorganismos buscaras y que medios utilizaras
para su cultivo?

PRCTICA No. 11
DIAGNSTICO DE ENFERMEDADES MENNGEAS
CULTIVO DE LQUIDO CEFALORRAQUDEO (LCR)
Introduccin
Aunque desde hace mucho tiempo se daba por hecho que la funcin primordial del lquido
cefalorraqudeo (LCR) era la de proteccin del sistema nervioso central (SNC) y la regulacin de
su volumen, en 1926 Cushing propuso la idea de que el LCR representaba la tercera
circulacin. Desde entonces se ha confirmado y ampliado su proposicin.
Cushing plantea que el LCR constituye por s mismo el medio interno del SNC, ya que lo
provee de la matriz acuosa de los componentes exactamente necesarios para su adecuado
funcionamiento, por otro lado, acta como linfa cerebral ya que su continua circulacin permite
la remocin permanente de materiales nocivos y de desecho.
An ms recientemente, se ha comprobado el papel que juega el LCR en el transporte a
travs del encfalo mediante diversas molculas activas como hormonas y aminas de accin
neutral.
Dentro de las patologas que ms comnmente se presentan a este nivel est la meningitis,
que es la inflamacin de las membranas que recubren el SNC, es decir, las delgadas membranas
que cubren totalmente al cerebro y la mdula espinal y una de sus causas puede ser por infeccin,
bsicamente debido a que los microorganismos responsables de esta forma clnica pueden
alcanzar al SNC a travs de la va hematgena (bacteriemia o septicemia) o invadir directamente
el cerebro (otitis, fracturas de crneo, etc.).
El diagnstico del SNC se apoya en el examen integral del LCR en esta tarea, tanto el
mdico como el qumico son responsables de la utilidad del examen. El mdico desde la toma de

la muestra, la medicin de la presin intracerebral, entre otras y el qumico como realizador
directo de los anlisis citoqumicos y microbiolgicos del LCR.

Objetivo
El alumno conocer la metodologa a seguir para la realizacin del cultivo del LCR.

Material
1. Placas con gelosa sangre de carnero.
2. Placas con agar de Mac Conkey ,
3. Placas con Agar de Sal y Manitol
4. Placas con Medio de Thayer- Martin (sin inhibidor).
5. Tubos con medio de Lowenstein-Jensen
6. Tubos con TSI, LIA, MIO, Citrato. Urea para pruebas bioqumicas
7. Tubos con base de CTA conteniendo glucosa, sacarosa, maltosa, fructuosa al 1%.
8. Portaobjetos.
9. Cubreobjetos.
10.Aceite de Inmersin.
11.Tinta china (Marca Pelikan)
12.Equipo de tincin de Gram
13.Taxos de bacitracina y optoquina.
14.Reactivo de Kovacs.
15.Pipetas Pasteur estril.
16.Centrfuga.

Metodologa
Toma de muestra
El LCR se obtendr antes de instaurar cualquier teraputica antibitica.
LCR obtenido por puncin lumbar:
1. Se localiza la zona elegida para la puncin lumbar mediante palpacin de los espacios
intervertebrales una vez colocado el paciente en la posicin adecuada.

2. Se desinfecta con alcohol al 70% una zona de 10 cm de dimetro en el rea elegida, la
aplicacin del desinfectante se hace de forma concntrica del centro a la periferia. Se
repite la operacin con povidona yodada que se deja secar durante un minuto.
3. Realizar la puncin entre los espacios intervertebrales L3-L4, LA-L5 o L5-S1, siguiendo
las normas de la ms estricta asepsia (ver fig.9).
4. Al llegar al espacio subaracnoideo retirar el estilete y dejar salir libremente el lquido
cefalorraqudeo que se recoger en tres tubos sin conservantes con tapn de rosca.
Generalmente el primer tubo para el estudio bioqumico, el segundo para el estudio
microbiolgico y el tercero para investigacin de clulas (este suele ser el ms transparente
aunque la puncin haya sido traumtica). No obstante, el tubo ms turbio se enviar a
Microbiologa.

Fig. 9. Toma de muestra de LCR

Volumen mnimo
1. Para el estudio bacteriolgico rutinario es suficiente 1 mL, aunque es preferible disponer
de volmenes superiores.
2. Para hongos o micobacterias se necesitan al menos 2 mL adicionales ms por cada uno de
los estudios, siendo deseable llegar a los 10 mL.
3. Para estudio de virus se necesita al menos 1 o 2 mL ms.

Transporte
El producto debe enviarse inmediatamente al laboratorio, pues alguno de los agentes etiolgicos
como S. pneumoniae, pueden lisarse rpidamente a partir de una hora tras su recogida. Si no es
posible se mantendr en estufa a 35-37C y una parte se incubar en un frasco de hemocultivo
que se mantendr en idnticas condiciones hasta su procesamiento en el laboratorio. Si no se

dispone de estufas se mantendr a temperatura ambiente. Nunca deber refrigerarse pues se
puede afectar la viabilidad de N. meningitidis y H. influenzae.
En el LCR no se estudian rutinariamente anaerobios. En caso de solicitar una
investigacin se enviar en un medio de transporte de lquidos para estudio de anaerobios o en
hemocultivo de anaerobios.
Las muestras para el estudio de virus se enviarn en hielo, si el envo se retrasa ms de 24
horas, se deber de conservar a -70C.

Observaciones
Como la meningitis suele surgir por un proceso bactermico se solicitarn simultneamente
hemocultivos, pudiendo ser as mismo estudiadas las posibles lesiones metastsicas cutneas.
Es necesario que el mdico seale claramente las investigaciones solicitadas (bacterias
habituales, micobacterias, anaerobios, hongos o virus).

Diagrama de trabajo

LCR
Agar Mac Conkey
Agar Gelosa Sangre
Agar Gelosa Chocolate
Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Agar Lowenstein-Jensen
Centrifugar 10-20 min.
1000-1500 r.p.m.

Sedimento Tinciones

Cuestionario
1. Describe las caractersticas fsicas y qumicas de un LCR normal.
2. Cules son los valores del LCR en caso de existir alguna alteracin dependiendo del
microorganismo presente?
3. Indica las tinciones que se le pueden realizar al LCR para su pronto diagnstico.
4. Qu tcnicas se utilizan para el cultivo del LCR?
5. Cules son los principales patgenos que puedes encontrar en el LCR?

PRCTICA No. 12
HEMOCULTIVO
Introduccin
El cultivo de sangre o hemocultivo es uno de los estudios ms solicitados en el laboratorio clnico
ya que de alguna manera apoya el diagnstico de las infecciones sistmicas que presentan en su
evolucin una etapa de bacteriemia o septicemia.
La presencia de microorganismos en la sangre refleja una infeccin activa y diseminada
en los tejidos. Esta situacin puede originarse por:
a) BACTERIEMIA: Es un trmino que denota la presencia de bacterias en sangre, este
puede ser transitorio como un resultado de un fenmeno comn como por ejemplo el
cepillarse los dientes, en la evolucin de algunas enfermedades, en infecciones de vas
urinarias o en infecciones de heridas. La bacteriemia persistente o recurrente, es la
presencia continua de una bacteria en la sangre e implica un fenmeno, que en algunas
enfermedades da manifestaciones clnicas.
b) SEPTICEMIA: Se caracteriza por la presencia de bacterias en sangre y tejidos
acompaado por ataque al estado general, las bacterias se estn multiplicando en forma
activa y liberando toxinas, originando manifestaciones clnicas de diversa magnitud (local
o sistmica).
c) PIEMIA: Formacin de diversos abscesos de tipo purulento de origen bacteriano.

En pacientes inmunocomprometidos como son recin nacidos, personas de la tercera edad,
as como inmunosuprimidos se pueden presentar focos spticos y poner en peligro su vida.


Una de las caractersticas de este tipo de infecciones es la aparicin de un cuadro febril en
el husped acompaado como consecuencia de la liberacin del pirgeno endgeno por los
fagocitos, posterior a la ingestin de material txico, endotoxinas, productos de degradacin
tisular, pirgeno exgeno.

Objetivos
1. El alumno aprender los pasos a seguir para realizar la toma de muestra de la sangre.
2. El alumno conocer los diferentes medios de cultivo utilizados para realizar un
hemocultivo.
3. El alumno desarrollar el procedimiento para llevar a cabo un hemocultivo, as como el
aislamiento e identificacin del patgeno.

Material
1. Medio bifsico Ruiz Castaeda (frasco para hemocultivo)
2. Jeringas estriles y desechables de 5 o 10 mL
3. Agujas estriles calibre 21.
4. Torniquete y torundas con alcohol
5. Frasco con tintura de Iodo
6. Equipo de tincin de Gram
7. Placas de gelosa sangre de carnero
8. Placas de agar de Mac Conkey
9. Placas de Sal y Manitol.
10.Placas de Thayer- Martin.
11.Pruebas bioqumicas: TSI , MIO , LIA, citrato y urea
12.Microscopio.
13.Sensidiscos de Bacitracina y Optoquina.
14.Taxos de oxidasa

Metodologa
Toma de muestra y transporte

Este tipo de muestra est indicado en casos de fiebre, hipotermia, sensacin de enfriamiento,
escalosfros, postracin, hipotensin, fiebre prolongada e intermitente con soplo cardiaco
perceptible. Es importante la toma de muestra cuando el paciente se encuentra al inicio del
periodo febril, antes de llegar al pico. El nmero e intervalos de los cultivos dependen del cuadro
clnico del paciente as como de su gravedad.
Es importante saber el tipo de frasco para Hemocultivo que se puede actualmente usar ya
que muchas de ellas contienen sustancia que anulan la accin de los antimicrobianos as como el
complemento y la fagocitosis.
Puede usarse mdula sea lo que aumentara las posibilidades de obtener un buen diagnstico.
1. Se selecciona el sitio de toma de muestra, debe evitarse tomar muestras de catter
intraarteriales o intravenosos permanentes a menos que la sangre no pueda obtenerse por
venopuncin.
2. El sitio de venopuncin debe limpiarse vigorosamente con torundas impregnadas de etanol al
70% o con tintura de iodo en alcohol.
3. Hay que esperar que seque sin soplar.
4. Por ningn motivo se debe tocar el sitio despus de que fue desinfectado.
5. Los frascos para hemocultivo o tubos de cultivo se deben limpiar del tapn con alcohol-iodo.
6. Se inserta la aguja en la vena y se extrae la sangre, el volumen depende de la edad y marca de
la botella usada. El volumen recomendado es: Nios de 1 a 3 mL, adultos de 5 ml en adelante.
7. Una vez tomada la sangre, se inyecta a la botella con una aguja nueva. Se debe mezclar bien
en forma homognea para evitar que se coagule.
8. La botella inoculada se mantiene horizontalmente con la parte slida hacia abajo durante 20
minutos.
9. Se incuba la botella a 37C durante 6 semanas. En forma vertical.

Fig. Toma de muestra sangunea

Actualmente existen diversas opciones para cultivar la sangre estas pueden ser:

Hemocultivo lquido
1. Se toma la muestra como se indic anteriormente, se le aade suficiente volumen de tal
manera que alcance una proporcin de 1:10 de sangre a medio.
2. Se incuba a 37C en condiciones aerobias.
3. Se hace una inspeccin de las botellas cuando menos una vez al da durante 3 das y luego 2 a
3 veces por semana hasta completar 21 das.

Botella de Cultivo Bifsico.
Se emplea la botella de Ruz Castaeda modificada o medios bifsicos comerciales. (Ver Fig. 10)
1. Se toma la muestra de sangre como se indic anteriormente.
2. Se inocula la sangre en la botella e incubar a 37C durante 7 das o dejar hasta 45 das en caso
que se sospeche de Brucella.
3. Incubar en atmsfera de CO
2
al 5 - 10%.
4. Se inspeccionan los frascos a diario y se buscan colonias en la superficie del medio como
seal de un cultivo positivo.
5. En caso de cultivo positivo hay que realizar la tincin de Gram.
6. Se realizan las resiembras en los medios indicados.
7. En ausencia de crecimiento visible se efectan resiembras a las 48 h, y luego cada semana
hasta completar los 21 das, aunque puede continuar por 45 das, y slo despus de este tiempo
se puede descartar y considerar negativo.

Botellas Bactec

Botellas BacT/Alert
Fig. 10

Mtodo de Lisis
1. Se toman los tubos que contienen sustancias hemolizantes.
2. Se concentran los microorganismos por centrifugacin a 3000 rpm durante 30 min.
3. Se inocula el sedimento en las diferentes placas de cultivo.

Mtodo de Fluorescencia
1. Se toma la muestra como se indic anteriormente.
2. Se inoculan las botellas de acuerdo al tipo de paciente, este tipo de botellas tiene medios de
cultivo para bacterias aerobias, anaerobias y hongos., estn adicionados de resina cuyo
objetivo principal es capturar l o los antimicrobianos que pueden estar presentes en la
muestra.
3. Se incuban en un aparato especial (Bactec 9050) que se mantiene a 37C y rotando
suavemente.
4. En cuanto se presenta desarrollo bacteriano, el equipo cuenta con un sensor de fluorescencia
la que se va aumentando por el incremento de CO
2
producido por el propio metabolismo
bacteriano; esto lo realiza cada 10 min. Una alarma avisa al qumico, la posicin de la botella
con produccin de CO
2
.
5. Se realizan las resiembras en los medios ya descritos.

Reporte
Es poco frecuente encontrarse dos o ms especies bacterianas diferentes en un cultivo de sangre,
en la mayora de los casos se trata de alguna contaminacin y esto sucede principalmente por una
mala toma de muestra.
S no hay crecimiento a los 45 das, hay que dar como negativo el cultivo y se desecha la botella.
En el caso de haber crecimiento se identifica al agente etiolgico con las pruebas requeridas por
el mismo.
Es importante mantener informado al mdico cmo va el Hemocultivo de sus pacientes,
principalmente si se encuentran en salas de terapia intensiva.

DIAGRAMA DE TRABAJO

Incubar 37C/ 15-20 das o ms

Cuestionario
1. Menciona otra tcnica para la toma de muestra de sangre para su cultivo.
2. Por qu es importante tomar la muestra de sangre en el pico febril?
3. Sera normal encontrar dos o ms bacterias en un hemocultivo?
4. Por qu se recomienda cultivar la sangre en un medio bifsico y en qu consiste ste?
5. El aislamiento de Staphylococcus epidermidis en un hemocultivo, sera clnicamente
importante?
Sangre
Agar Mac Conkey
Agar Sangre
Agar Chocolate
Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Agar Lowestein-Jensen
Botella para hemocultivo

Tincin de
Gram

BIBLIOGRAFA

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