Microbiología Clínica

UROCULTIVO

Betancourt Patiño Nixon *, Masache Guamo Erika *, Pérez Cárdenas Paulina*, Vásquez Poma
Maribel*

*Profesionales en Formación, Ciencias de la Salud, Titulación de Bioquímica y Farmacia, Universidad Técnica Particular de Loja, San
Cayetano Alto s/n C.P. 11 01 608; Loja, Ecuador.

INTRODUCCIÓN
El urocultivo es el cultivo de orina para diagnosticar la presencia de microorganismos
infecciosos, fundamentalmente bacterias y hongos que pueden encontrarse en el tracto
urinario o infección asintomática (bacteriuria asintomática) en pacientes con riesgo de
infección. (1)

Se considera infección urinaria a la presencia de bacterias en sectores normalmente estériles

del aparato urinario, con la consiguiente respuesta inflamatoria. Las infecciones urinarias
(IU) constituyen una patología muy frecuente, de elevada morbilidad, en muchos pacientes
son recurrentes o pueden determinar complicaciones graves como sepsis o secuelas
importantes, como daño renal. Desde el punto de vista anatómico, cabe recordar la división
del tracto urinario en dos sectores, alto (riñones, pelvis renales y uréteres) y bajo (vejiga y
uretra). (2)

En la gran mayoría de los casos, se trata de infecciones monomicrobianas y predominan los

bacilos gramnegativos. Los agentes pueden variar según la edad, sexo y patología
subyacente.
El agente más frecuente es Escherichia coli. En las infecciones de pacientes ambulatorios
predomina E. coli, seguido de Klebsiella spp., Proteus spp. y otros bacilos gramnegativos y
cocos
grampositivos, como S. saprophyticus, Enterococcus spp. y Streptococcus agalactiae.
Proteus spp. suele asociarse a anomalías de la vía urinaria, especialmente litiasis. (3)

Es fundamental saber cómo se recolectó la muestra (chorro medio, punción suprapúbica,

punción de sonda vesical, etc.), si el paciente tenía o no síntomas, el volumen sembrado y si
se aisla un probable patógeno urinario o un contaminante.
Un recuento de bacterias por volumen de orina: se considera en la orina obtenida por chorro
medio; en la orina de punción vesical todo recuento es significativo. Por ejemplo, si se
siembran 100 microlitros (ansa 0,1 ml), se multiplica por 10 (cada colonia representa 10
colonias/ml).
Si se usa un ansa de 10 microlitros (0.01 ml) cada colonia representa 100 por ml de orina. (4)
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El CLED Agar (Bevis) es una modificación del Cled Agar (Agar Cistina-Lactosa-
Electrolitos -Deficiente.) es un medio de cultivo diferencial para el aislamiento y
enumeración de microorganismos presentes en muestras de orina, siendo un medio que
permite el crecimiento de los patógenos urinarios, y por su composición electrolítica evita el
“swarming” del Proteus spp. (5)

METODOLOGÍA

Día uno

Se proporcionó una muestra de orina por parte del estudiante. Se empezó con un examen en
fresco, colocando en un portaobjetos una gota de muestra, luego de colocó el cubreobjetos y
finalmente se observó en el microscopio con el lente de 10x y 40x.

Se cultivó la muestra con un asa calibrada en agar CLED, MacConkey y EMB haciendo un
inóculo principal en el centro y estriando desde la parte superior hasta la parte inferior de la
caja, una vez hecho se rotuló y se incubó a 37 ℃ durante 24 horas.

Luego se realizó una tinción Gram que nos permite diferenciar bacterias Gram positivas
(morado) de las Gram negativas (rosada). Se colocó una gota de suero fisiológico y de
muestra sobre el portaobjetos, se homogenizó y se procedió a flamear en el mechero para
fijar la muestra, utilizamos 4 reactivos los cuales se colocaron en el siguiente orden:

 Cristal violeta 1 min.

 Lugol 1 min.
 Alcohol cetona 10 seg.
 Safranina 1 min.

Por último se secó nuevamente la placa y se procedió a observar en el microscopio con el

lente de 100x, se utilizó aceite de inmersión.

En un tubo estéril, colocamos la muestra y medimos el pH con una tira reactiva. Analizamos
la coloración de la tira con la del frasco. En otro tubo estéril colocamos la muestra y
centrifugamos para obtener el sedimento.

Día dos

Se realizó tinción Gram del cultivo donde hubo crecimiento bacteriano (CLED) ya que en
los demás no hubo crecimiento. De igual manera en un portaobjetos se colocó una gota de
suero fisiológico junto con 2 – 3 colonias bacterianas y se tiñó con los reactivos
correspondientes en el orden establecido.
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Se dejó nuevamente en incubación por 24 horas para constatar crecimiento,

desafortunadamente obtuvimos crecimiento de colonias debido a la contaminación que se
produjo anteriormente en el momento de la resiembra. Se hizo tinción Gram de estas colonias
y se obtuvo bacilos Gram positivos.

RESULTADOS Y DISCUSIÓN

Fig. 1. y Fig.2 Agar CLED. Presencia de

contaminación y tres tipos colonias.

Fig. 3, Fig. 4 y Fig.5 Vista en el

microscopio en lente de 100X
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No se pudo presenciar crecimiento de colonias en los medios de cultivos debido a la

contaminación que hubo, por ende no se pudo observar en el microscopio, microorganismos
específicos.

CONCLUSIONES

 Cada una de las pruebas han sido realizadas con un propósito que es el de determinar
las posibles patógenos presentes en las muestras de orina. Para ello tras la observación
de colonias y el cultivo, se decidió realizar las observaciones microscópicas con la
elaboración de la tinción de Gram, para identificar, la morfología de las colonias que
corresponde con la característica de cada bacteria.
 Debido a la contaminación que tuvimos no pudimos observar la presencia de algún
patógeno en nuestra muestra de orina.

BIBLIOGRAFÍA

(1) Prueba de Urinocultivo: ¿Qué es, Para qué se realiza y Cómo se realiza?. (2015). Retrieved from
https://www.saludemia.com/-/prueba-urinocultivo

(2)(3)(4) Torres, M., & Mattera, A. (2008). Infección Urinaria. Retrieved from
http://www.higiene.edu.uy/cefa/2008/infeccionurinaria.pdf

(5) Soria, D. (2009). CLED Agar. Retrieved from

http://fsoria.es/Inform_soria/Difco%20Fichas%20tecnicas/PLACAS%20DIFCO%20Y%20CROM
OGENICAS%20BD/FT%20CLED%20AGAR%20(BEVIS).pdf