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1. DATOS GENERALES:
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2. OBJETIVO(S):
2.1. GENERAL
2.2. ESPECÍFÍCOS
3. MARCO TEÓRICO:
ANALISIS MICROBIOLOGÍCO DE LA ORINA O UROCULTIVO
FORMA DE RECOLECCIÓN DE LA MUESTRA
4. METODOLOGÍA
4.1. PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO
- Medio Sólido: AGAR SANGRE, AGAR MUELLER HINTON, AGAR EMB, AGAR
MANITOL.
NOTA: Si preparó los medios con anterioridad guardarlos en una nevera a 4ºC.
4.4. TINCIÓN
Preparar el frotis de la muestra directa, secar y fijar al calor.
Proceder a la coloración de Gram con las condiciones e indicaciones
expuestas y aprendidas en prácticas anteriores.
- Crecimiento bacteriano
- Cambio de pH y color
- Presencia de movilidad
- Presencia de fermentación
- Producción de gas
- Presencia de actividad enzimática
- Producción de ácido sulfhídrico, etc.
De acuerdo a sus conocimientos en cuanto a las pruebas de identificación
bacteriana (presuntivas y definitivas), para microorganismo Gram positivos y
Gram negativos y mediante la utilización de tablas de identificación bacteriana
propuestas, determinar la familia, género y de ser posible la especie bacteriana
a la cual pertenece el microorganismo problema.
5. EQUIPOS Y MATERIALES:
6. RESULTADOS Y DISCUSIÓN:
7. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES:
9. ANEXOS
Cuestionario de evaluación
Agar sangre
El agar sangre es un medio de cultivo sólido enriquecido, diferencial pero no selectivo.
Es utilizado para la recuperación y crecimiento de una gran variedad de
microorganismos provenientes de muestras clínicas o para subcultivos.
Este se es una combinación de un agar base (agar nutritivo) con fuente proteica
(digeridos trípticos, digeridos proteicos de soja) el cual tiene un agregado de 5 % de
sangre ovina, (también puede usarse sangre humana, para cultivos en una placa de
Agar) con una pequeña cantidad de hidratos de carbono naturales y cloruro sódico. El
agar sangre aporta muchos factores de enriquecimiento. Se usa también para ver la
capacidad hemolítica de los microorganismos patógenos (que es un factor de
virulencia). Observando los halos hemolíticos alrededor de las colonias se determina el
tipo de hemólisis que posee: Alfa: halos verdosos; Beta: halos incoloros; Gamma:
inexistencia de halos.
El medio de cultivo agar sangre es uno de los más comúnmente utilizados en el
laboratorio de microbiología.
Entre los microorganismos capaces de crecer en el medio agar sangre se tienen:
bacterias aerobias estrictas, facultativas, microaerófilas, anaerobias, Gram positivas o
Gram negativas, bacterias de crecimiento rápido o crecimiento lento.
También crecen algunas bacterias exigentes o fastidiosas desde el punto de vista
nutricional, así como hongos y levaduras. Así mismo, es útil para realizar subcultivos o
reactivar cepas que metabólicamente estén muy débiles.
Sin embargo, la elección del tipo de sangre y del agar base variará dependiendo del
microorganismo probable que se sospecha recuperar y al uso que se le va a dar a la
placa (cultivo o antibiograma). (Gil, 2019)
Prueba de Kligler
Permite un diagnóstico rápido orientativo del tipo de enterobacteria aislado. Las
enterobacterias más patógenas no suelen fermentar (producir ácidos de) la lactosa. Se
detecta la producción de ácidos (acompañada o no del desprendimiento de gases) de
glucosa o lactosa y producción de SH2. Existen diferentes resultados evidenciados
como:
Producción de ácidos de la glucosa (no de la lactosa) En la superficie del medio las
enterobacterias respiran consumiendo la glucosa: Cuando la agotan (solo tiene 0.1%)
consumen los péptidos y se alcaliniza el medio (lsuperficie rosa). En el fondo las
enterobacterias fermentan la glucosa produciendo ácidos (fondo amarillo).
Producción de ácidos de la lactosa (y de la glucosa): En la superficie del medio las
enterobacterias respiran utilizando la glucosa y luego la lactosa. En el fondo producen
una elevada cantidad de ácidos y difunden hasta la superficie (todo el medio amarillo).
Producción de SH2 (color negro): la bacteria ha realizado una respiración anaerobia
utilizando el tiosulfato como aceptor de electrones; el tiosulfato se convierte en SH2 que
con el Fe3+ origina S3Fe2 (color negro).
(Britania, 2018)
Prueba de Manitol
El agar manitol es selectivo gracias a la alta concentración de sal que posee. La
salinidad actúa como sustancia inhibitoria y evita el crecimiento de bacterias Gram
negativas.
El agar sal manitol en una fórmula diseñada por Chapman para la diferenciación de
estafilococos positivos a la coagulasa (por ejemplo, Staphylococcus aureus) de los
estafilococos negativos a la coagulasa. Este agar se utiliza para el aislamiento de
estafilococos a partir de muestras clínicas, de cosméticos y de pruebas de límite
microbiano. El agar sal manitol contiene peptonas y extractos de carne bovina, que
suministran los nutrientes esenciales. Una concentración de cloruro sódico de 7,5%
tiene como resultado una inhibición parcial o completa de los organismos bacterianos
diferentes de los estafilococos. La fermentación de manitol, indicada por el cambio del
indicador de rojo fenol, facilita la diferenciación de la especie de estafilococos. Los
estafilococos positivos a la coagulasa (por ejemplo, Staphylococcus aureus) producen
colonias de color amarillo y un medio circundante de color amarillo, mientras que los
estafilococos negativos a la coagulasa producen colonias de color rojo y no producen
cambio de color en el indicador de rojo fenol.
Por su alta selectividad, este medio es ideal para sembrar muestras con flora mixta en la
que se quiere buscar la presencia de Staphylococus aureus, como principal patógeno de
este género.
En este sentido, uno de sus usos más frecuentes es en el análisis microbiológico de
muestras de exudados faríngeos y secreción nasal, especialmente para detectar
portadores asintomáticos de S. aureus.
También puede incluirse en la siembra de infecciones de heridas, hemocultivos, LCR,
lavado bronco alveolar, entre otras.
El agar manitol salado es útil para reaislar colonias de urocultivos provenientes de agar
CLED o agar sangre cuyo Gram haya revelado cocos Gram positivos en racimos.
También es válido en el análisis microbiológico de alimentos, agua potable, suelos,
entre otras aplicaciones.
(Koneman, 2018)
Prueba de SIM
El medio SIM es un agar semisólido y diferencial, especialmente diseñado para ayudar a
la identificación de algunas bacterias, principalmente de la familia Enterobacteriaceae.
Está compuesto por tripteína, peptona, sulfato de hierro, sulfato de amonio, tiosulfato de
sodio y agar. Este medio permite la ejecución de tres importantes pruebas: la producción
de sulfuro de hidrógeno (H2S), la formación de indol y la motilidad, de allí proviene el
acrónimo SIM.
El medio SIM permite distinguir ciertas propiedades específicas que caracterizan a
algunas bacterias en relación con otras. Por ejemplo, Escherichia coli se distingue por
ser H2S (-), Indol (+) y motilidad (+), mientras que Proteus mirabilis es H2S (+), indol
(-), motilidad (+).
El medio SIM es altamente utilizado en los laboratorios de bacteriología. Tiene como
ventaja que en un mismo tubo pueden observarse tres características esenciales en la
identificación de las enterobacterias.
(Gil, Medio SIM: fundamento, preparación y usos, 2019)
Prueba de la Urea
Es una prueba de laboratorio que se utiliza para identificar bacterias a través de la
detección de la actividad de una enzima que las bacterias pueden o no poseer. La ureasa
es la enzima responsable de la degradación de la urea en amoníaco y bicarbonato, lo que
aumenta el pH del lugar en que está presente y favorece su proliferación.
Se pone en contacto el microorganismo problema con un medio de cultivo de Agar urea
de Christensen. Si el microorganismo posee la enzima ureasa el medio de cultivo se
alcaliniza y cambia de color mediante el indicador que lleva incorporado. Normalmente
este indicador es el rojo fenol.
El resultado del test de ureasa se produce a partir del cambio de color del medio en que
se realiza el test. De esta forma, los resultados pueden ser:
Positivo, cuando la bacteria que tiene la enzima ureasa logra degradar la urea, dando
origen al amonio y bicarbonato, siendo esta reacción observada por el cambio en el
color del medio, el cual pasa de amarillo a rosa/rojo.
Negativo, cuando no hay cambio en el color del medio, indicando que la bacteria no
tiene la enzima.
(Lemos, 2017)
Ventajas
Permite identificar el antibiótico adecuado y específico para la bacteria que se
haya sembrado en el medio de cultivo.
Conocer la resistencia que tiene algunos antibióticos frente algunas bacterias.
Permite dar un tratamiento correcto al paciente.
Desventajas
Se debe tener mucho cuidado con el medio ya que se puede llegar a contaminar
fácilmente.
Si no se mantiene una adecuada distancia entre los discos puede llegar a obtener
resultados erróneos.
Existen ciertas bacterias que pueden llegar hacer resistentes a varios antibióticos.
Resolver las preguntas exploratorias del siguiente caso clínico.
Caso clínico:
Niña de 12 años que consulta por realizar orinas dolorosas en las últimas 24 horas.
Fiebre de 40°C, abundante sed, presencia de nitritos, leucocitos, en el examen físico.
¿Cuál cree usted que sea el agente etiológico del que podría sospechar en
primer caso por tratarse de una niña y por qué?
Podría ser el caso de la presencia de una E. coli ya que los síntomas son muy
característicos de esta bacteria y además esta se encuentra presente en la mayoría de las
IVU de niños. Se debe tener en cuenta que este tipo infecciones son ascendentes al
encontrarse en el área perineal.