RESUMEN SOLEMNE III GENÉTICA

REACCIÓN EN CADENA DE LA POLIMERASA

 Principio: reacción de cadena de la enzima polimerasa
o Objetivo: amplificación de un número de copias de un fragmento
específico de ADN
o Dónde se amplifica? En un tubo insitu
o No es necesario separar el ADN de los otros componentes, ni cortar la
secuencia blanco.
o Replicación invitro (rep.inv): replicación muchas veces de una misma
copia

 Materiales:
o Reactivos:
 DNA polimerasa Taq: amplifica según un proceso de replicación,
su gracia es que lo hace a temperaturas muy altas por su origen
bacterias Thermophilus Aquaticus.
o Termoreciclador: permite que los ciclos se realicen a la temperatura
adecuada (50-95°)
o Buffer:
-Mg2+: neutralizar las cargas negativas y así, la enzima interactúe
con las bases
o Partidores: determinan la region a amplificar
o Gel de electroforesis

 Procedimiento: se quiere detectar una secuencia específica del ADN

1. Tomar la muestra de las células
2. Se lisan
3. Se vacía el contenido celular
4. Se aplica el PCR: # ciclos a T° específica
Etapa 1
a. Helicasa separa las cadenas (90-95°)
b. rep.inv: temperatura rompe ptes de H, quedan 2 hebras que se usan
como molde

Etapa 2
c. Llegan los sintetizadores de los primers (ADN polimerasa alfa)
d. rep.inv: hibridación de los primers (55-65°: varía dependiendo del
primer)

Etapa 3
e. Adición de la polimerasa Taq (72°): comienza a sintetizar desde los
primers
5. Electroforesis en gel de agarosa: separación de acuerdo al tamaño. Como se
tiene una idea inicial, esto sirve para verificar que se amplificó lo que se debía
amplificar. Si el segmento era de 370 pares e bases, entonces deberia haber un
peso de app. 370 pb.

Es el ciclo de 3 etapas es el que se repite varias veces, entonces en el segundo

cilo tendremos 4 hebras moldes y así.

Las copias resultante pueden ser de largo variable, porque el primer todavia no
está instalado, son las menos numerosas.
Desde el tercer ciclo comienzan a aparacer los fragmentos de interés y estarán
delimitados por los primers. Estas sí tienen el largo de interés y son detectadas
en el gel de electroforesis.

Número de copias que se obtiene: 2n=copias de largo variable.

Control negativo: no tiene que haber nada, si hay es que alguno de los reactivo
está contaminado y está amplificando cualquier cosa.

Control positivo: en el pcr se busca una muestra y se quiere determinar si está o

no. Aquí ya esta la secuencia que se busca, entonces los primers si es que están
funcionando bien, van a replicar esta muestra.
Aquí se tienen que ver los fragmentos amplificados.

Control interno: busca ver que las muestras están en buen estado, aquí se debe
ver una amplificación de otro gen de la muestra, hecha con otros partidores
distintos.

Diseño de partidores
Tipos de partidores
o Arbitrarios:
 no hay secuencia perfectamente complementario al fragmento
de interés
 Pueden hibridar en varias regiones de un genoma
 Generan un bandeo, muchos fragmentos de distinto tamaño
 Screening (análisis rápido) para categorizar la bacteria o estudiar
polimorfismos
 Se usan cuando no se tiene mucha info sobre el fragmento que
se quiere estudiar

o Específicos
 Se diseñan según una secuencia específica, es decir son
complementarios a los extremos del fragmento de interés
 Se secuencian in vitro
 Los dos partidores de cada extremo no deben ser
complementarios entre sí para que no formen un dímero.
 En internet dice la posibilidad de que los primers se dimericen,
hay que elegir el que tiene menos posibilidad.
 La temperatura es importante
Se comprueba experimentalmente pero con este cálculo se tiene
una idea.
La que de menos fragmentos experimentalmente es la correcta,
porque es la específica. Pero debe tener al menos uno, sino es
que la temperatura era demasiado alta.

 Luego se debe secuenciar para verificar que la banda que

aparece es la correcta.

o Degenerados
 Mezcla de partidores
 Cuando no se conoce la secuencia nucleotídica del gen que se
desea amplificar, o a partir de un gen homólogo de otra especie

Tipos de PCR

1. PCR anidado “PCR de PCR”

o Se usan dos pares de partidores
 Outer primer: actua de manera externa,
 Inner primer. Actua de manera interna, aumentan la
especificidad
o Para aumentar la sensibilidad de la reacción, en el segundo PCR habrá
un pb menor
o Cuando la muestra es muy pequeña o difícil

2. Detección PCR múltiple

o Un fragemento de dos primers para cada cosa (bacteria/virus)
o Los fragmentos deben ser de diferente numero de pb y lo
suficientemente distantes en tamañopara diferenciarlos en
electroforesis
o Unico tubo: la Tm debe ser óptima para los 4 primers.

3. RT PCR
o RT: retrotranscripción
o Transciptasa reversa
o ARN se convierte en ADNc
o Uso: Cuantificar ARN, detección de virus
4. Metilación específica
o Estudiar el nivel de expresión de algunos genes
o Metilación de la citosina, para silenciar el gen
o Bisulfito: confirmar que el gen está metilado, convierte las citosinas no
metiladas en uracilo
o Si hay uracilo no hay silenciamiento, entonces hay hibrdación y hay
amplificación.
Si hay citosina unida a guanina,hay hibridación y hay amplificación

5. PCR metilación específica

o Estudio de 5 genes y su relación con el glioblastoma
o Gen de interés: CASP8, se relaciona con señales de apoptosis
o En glioblastoma CASP8 está metilado, está inactivo
o Signo de cáncer, proliferación infinita sin muerte celular
o Control negativo M: detecta citosinas metiladas
o Control negativo U: detecta citosinas que no están metilados
o En el glioblastoma todos los genes están no metilado,están activos

6. PCR en tiempo real

o Método cuantitativo
o Se detecta la amplificación por fluorescenia
o Fluorescencia es proporcional a cantidad de ADN
o No necesita electroforesis, más rápido
o Agentes intercalantes: a medida que aumenta el numero de
amplificaciones se van intercalando en la doble hebra y emiten mayor
fluorescencia
o SYBR: no específico, puede dar resultados exagerados
o sondas de hidrólisis Taqman:
 dos fluoróforos en su estructura:
uno emite fluorescencia,
el otro absorbe esa fluorescencia = no hay fluorescencia
 A medida que se amplifica se genera hidrólisis entre los
fluoróforos, mayor hidrólisis mayor fluorescencia
 Curva de disociación: se somete a una T° para que se
denature y haya una mayor fluorescencia.
 Si sólo 1 peak de Tm: muy específico
 2 peak de Tm: dos opciones de por qué
o mutantes o polimorfismos (si es que se
sabe que los primers son específicos,
además puede dar 2 o + peaks)
o Los primers son inespecíficos
 A. Cuantificación absoluta
o Comparación con curva estándar
o Línea base: donde empieza a aparecer la fluorescencia, se
determina de manera experimental
o Ct: punto que pasa la línea base
o inversamente proporcional a la cantidad de ADN
oresente en la muestra, la muestra con más ADN va a
pasar el umbral de fluorescencia nates

B. Cuantificación relativa
o Se compara con un gen de expresión constitutiva (actina), se
utiliza un gen que se sabe que está presente

Polimorfismos
 Definición: variación en una secuencia de un lugar determinado del ADN (locu
definido)
 Está presente entre los individuos de una población
 Frecuencia mayor al 1-2%

Tipos de polimorfismos

1. De nucleótido único (SNP)

 Un nucleótido que cambia en una secuencia de ADN entre los distintos
individuos de la población
 Estan en uno cada 200 pb en el genoma humano
 6 milones de SNPs en el genoma humano
 Huella genética: cada humano es único en la variabiidad y en la combinación de
los 6 millones de SNP que se pueden tener a lo largo del genoma
 En la posición del SNP todas las personas tienen un nucleótido distinto, eso las
hace únicas.

Tipos de SNP:
o En secuencias codificantes:
  nsSNP (no sinónimos): hay un cambio en un aminoácido, pero no
lleva necesariamente a un cambio en la proteína sintetizada.
 sSNP (sinónimo): hay un cambio en el codón, pero al aa no
cambia.

o En secuencias no codificantes:
 rSNP (zonas reguladoras): un nucleotido varia entre las personas
 iSNP (intrónicos), pero sin mayores consecuencias
 gSNP (intergenómicos): entre dos genes distintos

2. En el número de repetición en tandem

Minisatelites y microsatelites: en el ADN moderadamente repetitivo no codificante,

dispersos en el genoma a través de bloques en tandem.

El polimorfismo está en el número de repeticiones, varía cuantas veces se repite.

o (VNTR): Minisatelites:
o Unidad: 10-65 pb
o Mas de 100-1000 repeticiones
 El largo del polimorfismo se hereda

o (STR): Microsatélites:
o Unidad: 2-6 pb
o 50 repeticiones, pero polimorficos, varias repeticiones en una misma
célula.
o Estudiados a través de PCR: al amplificarlos se conoce la variabilidad
en el tamaño del amplificado
o Más largo, más repeticiones en el individuo
o CoDis (combined DNA index system):
o banco de genomas y estudio de la huella genética de
personas estadounidenses
o Indentificar marcadores genéticos en 13 STR distintos
o Locus amelogenina (codifica para proteína de esamlte
dental):
o polimorfismo entre X e Y --> Determinar el sexo de la
persona
o AMELY: deleción de 200 pb
o Para comprobar paternalismo:
- Numero de repeticiones heredables
- No se ve solo el XX en caso de madre.
 -  tiene que haber coincidencias en cada gen

o El bandeo que se obtiene (26 bandas) determina huella

genética

Como estudiar polimorfismos:

1. RFLP: alteración en la secuencia altera un sitio de corte de una enzima des

restricción conocida
Se basa en el polimorfismo de los sitios de restricción
Secuenicas especificas, reconocidas y cortadas por las enzimas de restricción
Varian entre individuos por el polimorfismo

Este gen no es polimórfico, es el mismo genotipo en todos los individuos

Este gen si es polimórfico, tiene cortes que varian, algunos en la población tienen
cortes de 3 kb o de 5 kb o de 8 kb
Se relaciona banda con presencia del gen
 Southern blot: sonda que hibrida en la región donde se ve el polimorfismo
con respecto al sitio de corte
 Si hay mutación puede haber un sitio de corte donde no debería, banda
suplementaria

2. PCR-RFLP
 Más económico
 PCR-RFLP-electroforesis
2 sitios=3 cortes
Homocigoto con 3 sitios de corte = 4 bandas
Heterocigoto= 5 bandas
Existen cromosomas que tienen mutaciones de una enfermedad en el mismo
cromosoma donde esta el polimorfismo

Polimorfismo HLA

Proteínas HLA:
 alto polimorfismo en la población,
 Sirve para diagnóstico de enfermedades difíciles, porque la mutación puede
estar cercana a HLA

Farmacogenética
El polimorfismo hace que cada persona reaccione de forma diferente a un fármaco.
Además de mutaciones y factores ambientales.
 TMD-1: cáncer de mama
o Depende de la cantidad de expresión del receptor HER2
o Mas expresión más efecto
 SIMVASTATINA
o Estatinas transportadas por proteínas del gen SLCO1B1
o Menos trabsportadores genera acumulación en ciertas oersonas lo que
lleva a problemas musculares.
 AMITRITILINA
o Descomposicón depende de los genes CYP2D6 y CYP2C19
o Descomposición más rápida = mayor dosis…
o AMPLICHIP CYP450
 Chip que evalua esos genes porque son de la familia CYP450
Otros farmacos metabolizados por estas familias:
CICLO CELULAR Y BASES MOLECULARES DEL
CÁNCER
MECANISMOS EPIGINÉTICOS
 Si se inactiva un gen y ocurre cáncer  gen corrresponde a un supresor de
tumor
o Inactivación
 Silenciamiento de genes:
 Modificación de la cromatina
 Heredables
 Metilaciones del promotor
MicroARN y cáncer
o Protooncogenes: frenan la proliferación
 Metilación del microARN
 Bloqueo de la transcripción
o Oncogenes: estimulan progresión del cáncer
 Gen blanco: gen supresor de tumor (disminuyen expresión)
Virus y cáncer
o 20% de los cánceres
o ARN: Hepatitis C
o ADN: Hepatitis B, Papiloma humano, Epstein-Barr (linfoma), Herpes
(sarcoma de Kaposi)
 Mecanismos virales que conllevan cáncer
1. Vias de señalización
o Proteínas que imitan ligandos humanos  Factores de crecimiento
o Imitan adaptadores intracelulares  Mantención continua de la vía de
crecimiento activada
o Activación receptores de superficie  Inducir dimerización y activar
factores de recimiento
2. Ciclo celular
o Bloqueo de Rb (no se inhibe la progresión celular): factor de poliferación
activo
o Versión viral de ciclinas  Inducción a la fase S
3. Evitar apoptosis
o Inactivación p53
o Versión viral de Bcl-2
4. Inmortalizar células
o Aumentar transcripción subunidad de la teomerasa
5. Mutagénesis
o Integrarse en el genoma
6. Inflamación crónica
o Hígado  Hepatocarcinoma
Virus Acción
HPV E5 Activación receptores de
superficie
HPV E7 Se une a Rb
 KSHV Codifica v-cyclin
HPV E6 Inactivación p53
VBcl-2 Blouo apoptosis proteína
Bcl-2
HPV16 E6 Transcrip. Subunidad
telomerasa
Retrovirus Integra genoma
HBV y HCV Inflamación crónica
higado

Bacterias y cáncer
 Helicobacter Pylori
o Cáncer gástrico
o Inflamación
o Se adquiere del ambiente

Inflamación y cancer
 Obesidad y Diabates  Inflamación crónica  Riesgo mayor de desarrolllar
cáncer
 Célula tumoral aprovecha factores de crecimiento, angiogénicos y señales de
EMT (transición eptielio-mesénquima) para invadir otros tejidos.
 Resultado: inflamación crónica, inmunosupresión y tumerogénesis

Bases genéticas y mol. Del cáncer

 Efecto warburg: metabolismo desregulado,
 o Favorece glucólisis glucosa → piruvato → lactato  síntesis de
nucleótidos
o Desfavorece fosfo. Oxidativa glucosa → piruvato → mitocondria
 Inducir angiogénesis
 Evitación sistema inmune

PET SCAN
 Fluorodesoxiglucosa → marcar glucosa con fluor
o Si vejiga, riñon, cerebro bien, si en otras partes malo
o Manchas oscuras → proliferción en exceso → mal pronostico

Transición epitelio-mesénquima
 Células pierden proteínas de membrana, se despegan entre ellas y empiezan a
ocupar espacio que no es del epitelio
 E-cadherina bajo → signo de la transición

Terapias
 Radiación: cortes en el ADNmuerte de la célula cancerígena y todas las células del
tejido
o Piel e intestinos más afectados porque constante proliferación
 Quimioterapia: inhibición síntesis ADN  Afecta células tumorales y sanas
o Antibióticos citotóxicos:
 Antraciclinas:
- inhib. a través de Hierro de la Topoisomerasa II en Síntesis
ADN y ARN  ADN no se desenrrolla
- Desalojo de histonas
 Selectivas
o Inhibir PARP (reparador): tejido muera más rápido
 Se usa en pérdida de fución de gen BCRA2
 Fármacos
o Nib: inhiben
 Tirosina kinasa
 Beta-Raf
 Raf
 Mek
o Mab: Ac monoclonales (evitar que disminuya la respuesta inmune)
 Terapia génica:
o Administrar gen p53 en célula con p53 mutado  Apoptosis
o Administrar gen suicida: gen de la timidina kinasa + ganciclovir = molécula
tóxica  Apoptosis
 Inmunoterapia
o MHC: codifican proteínas de membrana para reconocer las células
 Si proteínas alteradas  Ataca células que sí son del organismo
o Antígenos tumorales
 Específicos de tumores: no presentes en células normales
 Asociados a tumores: presentes en ambas células , pero en células
tumorales son diferentes
o Aumentar genes que favorezcan la expresión de antígenos
  Aumentar MHC
 Factores atrayentes de la acción de células inmunes
 Sistema inmune reconoce mejor y mata células tumorales
o Ac contra proteína tumoral
o Ac bloqueador de angiogénesis
o Receptores de memb. CTLA4 y PD1: inhibición respuesta inmune
 Evitar formación de una respuesta inmune
 Mejora la potencia antitumoral de NK

oRadioinmunoterapia: Ac monoclonales contra proteína del tumor

 Radiación sólo en células tumorales por marcadores
radioactivos
o Antibody-drug conjugate therapy
o Juntar dos células con dos receptores
o CAR T ceels: linfocito T modificado con inmunoglobulina que
reconoce directamente células tumorales
 Inmunoterapia activa: vacuna
o Sistema inmune aprende a reconocer tumor por si vuelve saber
defenderse
o Incubación de péptidos del tumor de la persona con células dedríticas del
sistema inmune
o Péptidos del tumor: p53 poque se acumua en el citoplasma
Gen BCRA2:
reparación del ADN
Gen marcador del cáncer de mama

Cromosoma Philadelphia
Translocación de pedazo de cromosoma 22 y cromosoma 9  Activación: leucemia
paciente triple negativo: no responde a quimioterapia por ausencia de factores de crecimiento

GENOMA HUMANO
 Campo de biología molecular
 Mapeo de genoma
 Objetivo: caracterización colectiva y cuantificación de los genes

Marcadores génicos:
 Segmento de ADN de ubicación conocida
 Tipos de mapas
o Genéticos:
 se construyen de manera indirecta mediante la frecuencia de
recombinación
 Indica distancia entre genes
 Asociar un marcador polimórfico con un gen responsable de la
enfermedad
o Físicos:
 se localiza directamente la posición del marcador en el
cromosoma
 Determinar si los genes están cerca o lejos
hibridación in situ con sondas en cromosoma metafásico
 No preciso porque cromoma metafásico muy condensado
Hibridación in situ con sondas en cromosoma interfásicos
 No tan preciso, se ven más cerca
Hibridación in situ con trozo de cromatina purificado
 Muy preciso, separación por kb
 Enzimas de restricción
 Cóntigos:
o Digestión parcial: con enzima de restricción se generan
distintos fragmentos, se usa poca cantidad para que no
se generen tantos fragmentos
 Fragmentos se pueden solapar en este paso (por
falta de enzima)

o Clonación de los fragmentos: inserción de bacterias

o Fragmento con bacteria se corta con otras enzimas
 Realización del mapa de restricción

Corte en una muestra de 20 kb:

Con esto se puede deducir como están ubicados los fragmentos EcoRI y
BamHI:

Donde los fragmentos que se mantuvieron estables son: 3 y 8 kb

La banda 7kb roja desaparece por el corte de EcoRI, el fragmento se
vuelve de 3 kb y 4 kb

Es necesario saber:
1 corte = 2 fragmentos
2 cortes = 3 fragmentos
3 cortes = 4 fragmentos

1.ver cuantos cortes se hicieron en B

2. Observar con las dos enzimas juntas, qué fragmentos desaparecieron
(son cortados en segementos más pequeños)
3.
 Aquí, la enzima A corta en 5, 16,y 21.5
Y B en la coordenada 15

MECANISMOS DE VARIABILIDAD GENÉTICA

 Estudio del 0.1-0.5% del genoma que es diferente entre los individuos

MEIOSIS
Fenómenos aue contribuyen a la variabilidad genética
1. Ordenamiento aleatorio de los cromosomas
o Metafase 1
2. Crossing over
o Profase 1
Transposones: genes saltarines, secuencias de ADN que pueden moverse a diferentes
zonas del genoma a través de la transposicón
 Reordenamiento genético
 Riesgo de mutación: por silenciamiento de un gen si se pega la transposasa en un
gen

CARCTERÍSTICAS DEL GENOMA HUMANO

3% de los genes son exones que codifican proteínas
50% de los genes son derivados de elementos transponibles
Elementos transponibles:
 Retrotranspones (clase 1): copiar y pegar (mayor % en el genoma)
ARN  ARNm  ADNc  Se pega en otro lugar
 Eucariontes
o Elementos autónomos
o Elementos no autónomos: se mueven por proteínas en el citosol o
proteínas sintetizadas por los elementos autónomos de su clase
Consecuencias: se pusieron en genes importantes
o Charcot-Marie-Tooth
o Prader-Willi/Angelman
o Sindrome Williams

 Transpones de ADN (clase 2) : cortar y pegar

 Procariontes y eucariontes
o Elementos autónomos
o Elementos no autónomos: se mueven por proteínas en el citosol o
proteínas sintetizadas por los elementos autónomos de su clase
Consecuencias:
o Cáncer
o Enfermedades neurológicas
o Inflamaciones

Enfermedades en que se encontró la expresión de L1 en algunas personas:

 o Síndrome de Rett (trastorno genético neurológico que afecta desarrollo
del cerebro y causa una pérdida progresiva de las habilidades motoras y
del habla)
o Síndrome de Aicardi-Goutieres (desorden congénito del desarrollo
neuronal)
o Esquizofrenia
o Ataxia-telangiectasia
o Autismo
o Esclerosis lateral amiotrófica (ELA)

MUTACIONES GENÉTICAS
Formas tautoméricas
Las bases están en su tautómero
Timina enólica - guanina  error
Citosina imino – adenina  error
Sistema no es capaz de percibir las formas tautoméricas
Resultado: una célula hija normal y una célula hija mutada

Desaminación
 Citosina  uracilo
Uracilo que es del ARN va a unirse con A y  mutación
Corregido si ADN no replicado aún
 5-metilcitosina  timina
Se cambia C por T
Difícil de corregir porque T es parte del ADN y puede pasar desapercibido

Radiación UV: induce dímeros de timina

Agentes químicos: oxidaciones, aumento de metabolitos reactivos de oxígeno y
radicales libres
molécula Timidina glicol pierde dobles enlaces unión con OH
guanina se transforma 8-oxo-7-hidroxiguanosina

Acido nitroso: desaminaciones en citosina y adenina

Hidroxalamina: se añade OH a nitrógeno del grupo amino de las bases C se hace afín
aA
5-bromouracilo: uracilo con un bromo añadido
o Muy tóxico:
o entra al ADN hibrida con adenina
o Puede pasar a forma enólica se une a G
Agentes intercalantes: moleculas capaces de ingresar al ADN
Generan siempre alguno de:
 Adición: maquinaria no reconoce y agrega cualquier base
 Deleción: polimerasa reconoce y agrega agente intercalante, luego al replicar,
maquinaria no lo reconoce y lo elimina junto al que se unió

Naranja de acridina
Tinción
 Verde: células en fase de división activa (mucho ADN)
 Naranjo: células en reposo multiplicativo
Se usa para evaluar calidad del ADN es espermios

REPARACIÓN Y CONSECUENCIAS DE
MUTACIONES Y ENFERMEDADES

Sistemas que se ponen en marcha cuando la actividad correctora de la ADN polimerasa

no funciona
Participación de más de 100 genes
 Bases no apareadas pueden formar loops  facilitar reconocimiento del error
 Reparación de la mutación: cap. Correctora de la polierasa
 Detención del ciclo celular
 Apoptosis
1. Reparación directa
 Bases modificadas con grupo alquilo  se quita la modificación por la
enzima metiltransferasa
 ADN fotoliasa: corrige dímeros de timina generados por UV (no está en
humanos)

2. BER (escición de bases)

 Reparación de bases modificadas químicamentes (desaminación,
oxidación, depuración)
o ADN polimerasa: Reconoce que base poner
o Glicosilasa: rompen en,aces glucosídicos
o Ligasa: ruptura de enlace fosfodiéster y reconstrucción
 No mutaciones

3. NER (Escición de nucleótidos)

 Repara lesiones de deformación de doble hélice (dimeros de timina)
 Corte de varios nucleótidos
o Nucleasas: cortar nucleótidos
o Helicasa: separación hebras
o ADN polimerasa: reconoce y rellena las bases cortadas
o Genes XP (xerodermia pigmentosa)
 Los dímeros generados por UV no son corregidos por el sistema NER

4. NHEJ (por unión de extremos no homológos)

 Repara cortes en las dos hebras (rayos X)
o Endonucleasa: saca nucleótidos de hebra simple (perdieron parte
complementaria) y hace unión no homóloga
 Genera mutación, se pierden nucleótidos (deleción)
 CRIPSR/CAS9: Cas9 rompe, este sistema repara  genera mutación

5. HR (recombinación homóloga)
 Repara cortes en las dos hebras
o Exonucleasa
o ADN polimerasa
 En replicación: se puede usar cromátida hermana para reparación
porqueestá cerca
 No hay mutaciones

6. MMR (reparación de bases mal apareadas)

 Región queda mal apareada
o GTBP y hMSH2: reconocen rror
 o hPMS2 y hMLH1: reclutadas para eliminar segmento malo
o ADN polimerasa: corrige
 No mutaciones

7. Mecanismo de reparación por emergencia: cuando error persiste se agrega

cualquier base  mutación
 No mutaciones

Enfermedades en que mutó un gen involucrado en un sistema de reparación

 Xeroderma pigmentosa
 Síndrome de cockayne
 Tricotiodistrofia
 Cáncer colorrectal hereditario
 Ataxia telangiectasia
 Anemia de falconi

CODIGO GENETICO
 Redundante
 Codón stop: UAA, UAG, UGA

NOMENCATURA MUTACIONES
+1: inicio transcrip
g: genoma
c: ARN o ADNc
p: proteína
p.Gly30Val o p.G30V  Se cambia glicina por valina en posición 30

Transición: cuando se cambia una pirimidina por pirimida o purina por purina
Sinonima: AGA y AGG  Codifican el mismo aa
Con cambio de sentido: AGA y AAA  Condifican ≠ aa
AGA: arginina
AAA: lisina

Transversión: se cambia una purina por una pirimidina

Mutación sin sentido  Codón STOP

Mutaciones nulas:
 Promotor: no afecta secuencia, pero puede no haber proteína del todo
 Sitio catalítico: proteína sin funcionalidad si en aa de sitio activo
 Sitio de splicing: consecuencias graves
o Introducción del intron completo: mutación en unión exón 1 y 2, 2 no es
reconocido
 Proteína completamente distinta
o Sitios crípticos de ayuste: unión de exón 1 con otro exón 2 incorrecto
 Proteína completamente distinta
Mutación leaky
 Porción terminal del sitio catalítico: proteína funciona pero no de forma
eficiente
Mutación neutral
 Fuera del sitio catalítico
Mutación y efecto en proteína
 Ganancia de función
o Fosforilación que apaga proteína: perdida sitio de inactivación
 Sobreexposición
Más estabilidad
 Pérdida de función
o Haploinsuficiencia: defecto en heterocigoyo, no suficiente proteína
o Dominancia negativa
 Una prote mutada afecta al complejo entero
 Ejemplo: receptor dímero, si uno mutado de dos no funciona

INGENIERÍA GENÉTICA
 Proceso de utilización de tecnología de ADN recombinante ADNr para modificar
composición genética directamente
 Unión de dos moléculas de origen diferente, amplificarlas y modificarlas
 Clonación: aislar fragmento y amplificarlo
 ADN recombiante: molécula resultante de la fusión
 Enzimas de restricción:
o endonucleasas
o EcoRI: reconoce sustancias GAATTC
o Hpal: GTTAAC
o Extremos cohesivos: extremos libres alfinal de la secuencia (G AATT C)
o Extremos romos: corte de 2 hebras en el mismo lugar
o HindIII: AAGCTT  Extremos cohesivos
o Pstl: CTGCAG  CTG CAG
 Ligasas:
o Después de los cortes la enzima ligada une los trozos por
complementariedad
o Tubo eppendorf
 Secuencias palindrómicas: tienen la misma seucencia pero en sentidos
contrarios
 ADN recombinante:
o Se abre el vector y para que no se cierre se mete otra molécula distinta
en el tubo que tiene que ser cortada por la misma enzima de restricción
o La ligasa las une y se forma el ADNr

Amplificar un gen
 PCR
 Clonamiento
o Bacterias:
  Enzima de restricción  Ligasas: pegar segmento en vector 
Vector en bacteria  Bacteria se divide (cada 20 mns) 
Duplicación

Plásmidos
Contenido:
 Marcadores de selección: gen metabolismo que permite convertir una cosa en
otra
 Caja de clonamiento: istio de corte, luagr donde se puede meter el gen
 Inactivación por inserción
Permiten síntesis de proteína de interés  Gen de interés debajo del promotor
Vectpres deben ser del kb de lo que se quiere clonar

Proteína  Gen
A partir de: aa  Partidores  PCR gen  Vector  Células  Proteína

Aumentar eficiencia: evitar que bacteria se coma el adn y hacer que ADN entre en
bacteria
o Microinyección
o Lipofección
o Electroporación
o Transfección: ADN en virus  Adn y viru en bacteria  Cultivo de bacteria
bacteriofago (capaz de contagiar)

Gen lacZ:
codifica enzima (azul)
Inserción gen de interés  Blanco  Funcionó

Oragnismos transgénicos: organismos modificados a través de ingeniería genética, se

le itroduce un gen de otra especie

Técnica con oveja transgénica

AAT: proteína humana  Inhibe enzima que comen tejidos. Baja en algunas
enfermedades
 se une a promotor de un gen de oveja que solo funciona en gl. Mamaria
 leche de la vaca y desendencia sale con proteína humana AAT
 extracción de la proteína
fármacos
Anticuerpos humanizados
Ratón transgénico con locus humano de inmunoglobulinas
Vacuna hepatitis B
Antígeno del virus  Se mete en bact.  Levaduras recombinantes  Purificación de
proteína HB vacine (virus)  Se mete en liposoma  Inyecciónn intramusc. 
Adipocitos generan resp. Inmune (Ac)

SARS-COV
Genes:
 Gen S: proteína spike, reconcoida por epitelio humano
Vacunas:
No recombinantes:
● Pfizer → no es recombinante, sino que es ARN del virus de la proteína spike
envuelto en liposomas.
● Sinovac → es el virus inactivado.
Recombinantes:
● Astrazeneca → adenovirus inactivado, que contiene el gen de la espícula (S)
del SARS-Cov 2.
● Sputnik V
● Cansino → adenovirus, el genoma de este se recombina con el del SARS-Cov 2

TERAPIA GÉNICA
Sustituir o añadir copia normal de la región defectuosa del ADN para solucionar y
restablecer función alterada
 Alteración células germinales: no ético
 Terapia somática celular: cáncer, enf. Sanguíneas, heáticas o pulmonares
o In vivo
 Vector viral es insertado en las células
 Neuronas (Atrofia muscular espinal
 → virus adeno asociado
No cap. Replicación, dep. De otras proteínas
Infectan todas células, tej. Específicos
No resp. Inmune
PERO, como en naturaleza → ntiuerpo anti-AVV
Hasta 5kb

o Ex vivo: se insertan en genoma (riesgosos)

 Extracción de células y tratadas en laboratorio
 Cáncer pulmón → antígenos sobrexpresados → linfocitos T se le
sinserta receptor antígeno quimérico de cél. T → linfocitos T
pueden reconocer antígenos
 Lentivirus
 Retrovirus:
o Cápsula
o Retrotranscrip: ARN → ADNc
 o ARN
 Vectores: última opción
o Virales:
 Lípidos catiónico y Polímero de lípidos:
 vesicula (+) se mezcla con ADN (-)
 Episoma: material genético exógeno que se encuentra
dentro del núcleo pero no se inserta en el genoma
 ADN desnudo: incubación de la célula con adn específico,
corriente (-) permite entrada del ADN
 VLP: proteinas tipo virus dde se le pone ADN → incubadas en
células
o No virales
 Retrovirus y lentivirus

CRISPR/CAS9
Sistema inmunologico de las bacterias
Síntesis de ARN guías → guían a CAS9 donde cortar (≠ a enz. de restricción porque
CAS9 no viene con info de donde cortar)
GRAN hibrida → CAS9 identifica → CAS9 corta

Carcinoma: celulas epiteliales

Sarcomas: tumores solidos en TC no espcializado