UNIVERSIDAD NACIONAL DE MOQUEGUA

ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERIA AGROINDUSRIAL

“Año del Fortalecimiento de la Soberanía Nacional”

INFORME DE LABORATORIO N°2

“PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO”

CURSO:
MICROBIOLOGIA AGROINDUSTRIAL APLICADA

DOCENTE:
Dr. VASQUEZ ROJAS WILSON VALERIO

ESTUDIANTE:
NINA CORNEJO, CRISTHYAN FRANKLYN

MOQUEGUA - 2023
 1. INTRODUCCIÓN

Los medios de cultivo son una mezcla de nutrientes que, en concentraciones adecuadas y en
condiciones físicas óptimas, permiten el crecimiento de los microorganismos. Estos medios
son esenciales en el Laboratorio de Microbiología por lo que un control en su fabricación,
preparación, conservación y uso, asegura la exactitud, confiabilidad y reproducibilidad de
los resultados obtenidos. En los laboratorios de microbiología se utilizan diferentes tipos de
medios de cultivo que pueden ser preparados en forma líquida o en forma sólida.
Usualmente para preparar un medio sólido, se parte de un medio líquido al que se le añade
un agente solidificaste como el agar, la gelatina o la sílicagel.

2. OBJETIVOS

 Preparar los medios de cultivo más comunes que se utilizan para el cultivo de
los microorganismos
 Diferenciar los diversos tipos de medios y su aplicación adecuada de acuerdo al tipo de
microrganismo a cultiva
3. FUNDAMENTO
3.1. MEDIO DE CULTIVO
Un medio de cultivo es un sustrato o una solución de nutrientes que permite el desarrollo
de microorganismos. En las condiciones de laboratorio para realizar un cultivo, se debe
sembrar sobre el medio de cultivo elegido las muestras en las que los microorganismos van
a crecer y multiplicarse para dar colonias. (López T. & Torres C., 2006)
Los microorganismos son los seres más abundantes de la tierra, pueden vivir en
condiciones extremas de pH, temperatura y tensión de oxígeno, colonizando una amplia
diversidad de nichos ecológicos. Entre los requerimientos más importantes para su
desarrollo están el carbono, el oxígeno, nitrógeno, dióxido de carbono e hidrógeno.
Muchas bacterias sin embargo necesitan del aporte extra de factores de crecimiento
específicos en forma de suero, sangre y extracto de levadura entre otros. (Ramón P. &
Juárez A., 2002)
El desarrollo de un microorganismo en un medio de cultivo depende de diversos factores,
entre los cuales los más importantes son:
- Disponibilidad de los elementos nutritivos necesarios
- Existencia del oxígeno requerido
- Grado de humedad apropiado
- Valores de pH adecuados: Usualmente neutro o ligeramente alcalino (7.2 – 7.4), salvo
excepciones.
- Temperatura de incubación precisa: 35 – 37°C para las bacterias patógenas.
- Condiciones de esterilidad del medio y protección de posibles contaminaciones.
(García M., Fernández T. & Paredes S., 2005)

3.2. CLASIFICACIÓN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO

3.2.1. Según su origen:

 Naturales: Son los preparados a partir de sustancias naturales de origen animal o

vegetal como ser extractos de tejidos o infusiones y cuya composición química no se
conoce exactamente.

 Sintéticos: Son los medios que contienen una composición química definida cuali y
cuantitativamente. Se utilizan para obtener resultados reproducibles.

 Semisintéticos: Son los sintéticos a los que se les añaden factores de crecimiento bajo
una forma de un extracto orgánico complejo, como por ejemplo extracto de levadura.
(López T. & Torres C., 2006)

3.2.2. Según su consistencia:

 Líquidos: Se denominan caldos y contienen los nutrientes en solución acuosa.

Favorecen mucho el desarrollo y la multiplicación de las bacterias porque al difundirse
estas por todo el medio encuentran con facilidad las sustancias que necesitan para
nutrirse.

 Sólidos: Se preparan añadiendo un agar a un medio líquido (caldo). El agar es una

sustancia inerte polisacárido (hidrato de carbono) que se extrae de las algas. Como esta
sustancia no es digerida por las bacterias no constituye ningún elemento nutritivo, en
ellos las bacterias crecen con mayor dificultad, pues los nutrientes se agotan con rapidez
en el punto donde se desarrollan.

 Semisólidos: Se utilizan para determinar la motilidad de las especies en estudio.

Actualmente se encuentran disponibles comercialmente con el agregado de agar.
(García M., Fernández T. & Paredes S., 2005)
 Fig. 1 Cultivos sólidos y líquidos

3.3. COMPONENTES USUSALES DE LOS MEDIOS DE CULTIVO:

 Extractos: Para su preparación, ciertos órganos o tejidos animales o vegetales (por

ejemplo, carne, hígado, semillas, etc.) son extraídos con agua y calor, y posteriormente
concentrado hasta la forma final de pasta o polvo. Estos preparados deshidratados son
frecuentemente empleados en la confección de medios de cultivo. Ejemplos: extracto
de carne, de levadura, de malta, etc. En el caso del extracto de carne en polvo o pasta,
provee sustancias nitrogenadas, minerales y vitaminas, mientras que el extracto de
levaduras provee vitaminas del grupo B, nitrógeno y carbono
 Peptonas: Son mezclas complejas de compuestos orgánicos nitrogenados y sales
minerales que carecen de identidad química definida; se obtienen por digestión
enzimática o química de proteínas animales o vegetales (soja, carne, gelatina, caseína,
etc.). Las peptonas son muy ricas en péptidos y aminoácidos, pero pueden ser
deficientes en determinadas vitaminas y sales.

 Fluidos Corporales: Sangre completa, sangre desfibrinada, plasma o suero sanguíneo

son frecuentemente añadidos a los medios empleados para el cultivo de algunos
patógenos. La sangre no puede ser esterilizada y debe, por tanto, ser obtenida en
condiciones asépticas directamente de un animal sano. Los fluidos corporales no
solamente contribuyen con factores de crecimiento, sino también con sustancias que
neutralizan inhibidores del crecimiento de algunas bacterias.

 Sistemas amortiguadores: Algunos componentes son incorporados al medio de

cultivo para mantener el pH dentro del rango óptimo del crecimiento bacteriano. Los
microorganismos más comunes son neutrófilos (el pH óptimo para su crecimiento está
próximo a la neutralidad), y sales como fosfatos bisódicos o bipotásicos, o sustancias
como las peptonas, previenen una desviación del pH.

 Indicadores de pH: Indicadores ácido- base se añaden a menudo a los medios de

cultivo con objeto de detectar variaciones del pH.
 Agentes reductores: Cisteína, tioglicolato y otros son agentes reductores que se
añaden a los medios de cultivo para crear condiciones que permitan el desarrollo de los
gérmenes microaerófilos o anaerobios.

 Agentes selectivos: La adición de determinadas sustancias al medio de cultivo puede

convertirlo en selectivo (ver más adelante, clasificación de los medios de cultivo). Por
ejemplo, cristal violeta, sales biliares, ácida sódica, telurito potásico, antibióticos, etc.,
a la concentración adecuada, actúan como agentes selectivos frente a determinados
microorganismos. (Rodríguez C., Gamboa C. & Hernández Ch., 2005)

4. MATERIALES/ REACTIVOS/ EQUIPOS

Materiales y Reactivos Equipos

 03 Matraz 500 ml  Autoclave
 06 Botellas de Vidrio Termoresistentes  Micro-ondas (servipluz)
 01 Piseta  Balanaza Analitica (sartorius)
 01 Vaso precipitado 2000 L
 01 Plumon Indeleble
 Plate Count Agar 500 gr
 Buffered Peptone Water 500gr

5. PROCEDIMIENTO

Preparación de medios para Recuento de Aerobios Mesófilos Viables

Agua de Peptona Tamponada
Hacer suspension de 16.1g/L agua destilada. Mezclar y esterilizar a 121ºC x 15 min.

Preparacion de Medio de cultivo Agar Plate Count agar (PCA)/ ISO 4833.
Preparar 23.5g/L agua Mili-Q. Disolver en ebullición y agitación. Luego, esterilizar
a 121ºC x 15 min. Mantenerlo a 47  2 ºC en estufa hasta la siembra dentro de un
máximo de 4 horas. El medio no debe refundirse nunca.

6. RESULTADOS/ DISCUSION

Describir detalladamente el procedimiento de la practica, se sugiere hacer flujo,

figuras, etc.
 7. REFERENCIAS

López T. & Torres C. (2006) Microbiología General. Argentina

Ramón P. & Juárez A. (2002) Bioquímica de los microorganismos. España: Editorial
Reverté
García M., Fernández T. & Paredes S. (2005) Microbiología clínica práctica. España:
Repeto
Rodríguez C., Gamboa C. & Hernández Ch. (2005) Bacteriología General: Principios y
prácticas de laboratorio. Costa Rica

PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVO

En la actualidad, la mayoría de los medios de cultivo se encuentran comercializados;

normalmente bajo la forma de liofilizados a los que es preciso rehidratar. En estos casos la
preparación del medio de cultivo se reduce sencillamente a pesar la cantidad deseada del
mismo y disolverla en agua destilada siguiendo las instrucciones del fabricante. Las
sustancias termolábiles, se esterilizan por filtración y se añaden al resto de los
componentes después de que estos hayan sido previamente esterilizados en el autoclave y
enfriados a temperatura ambiente ó a 40 – 50 ºC si se trata de medios con agar. Antes de su
esterilización los medios líquidos se reparten en los recipientes adecuados (tubos,
matraces, etc.). Si es un medio sólido y se ha de distribuir en tubos ó en matraces será
necesario fundir el agar en baño Maria u horno microondas, una vez fundido y
homogenizado, se distribuye en caliente a los tubos ó matraces (no en placas Petri) se tapa
y se esteriliza en el autoclave. Una vez finalizada la esterilización los medios se dejarán
enfriar a temperatura ambiente y en el caso de medios sólidos contenidos en tubos
deberán, en su caso, inclinarse para que al solidificarse adopten la forma de agar inclinado
ó pico de flauta(slant) si tal es su finalidad.

Las placas de Petri se preparan vertiendo el medio fundido y estéril dentro de ellas y en un
ambiente aséptico (por ejemplo, en la proximidad de la llama de un mechero Bunsen) es
conveniente homogenizar el medio en el transcurso de la operación para evitar que el agar
sedimente en el fondo del recipiente y no se distribuya por igual en todas las placas.
También es posible conservar el medio destinado a preparar placas Petri solidificado y
estéril en tubos que se fundirán al baño Maria en el momento de la preparación de las
mismas. Los caldos y medios sólidos pueden conservarse, una vez esterilizados, a
temperatura ambiente, pero para reducir su deshidratación y el consiguiente cambio en las
concentraciones de sus componentes es preferible conservarlos a 4ºC.
Figura xx. Flujograma de preparación de medios de cultivo