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(INFORME)
2004
INTRODUCCIN
OBJETIVOS
OBJETIVO GENERAL
1. TEORA RELACIONADA
Uno de los sistemas ms importantes para la identificacin de microorganismos es
observar su crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en el
laboratorio. El material alimenticio en el que crecen los microorganismos es el Medio de
Cultivo y el crecimiento de los microorganismos es el Cultivo.
Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial debe
reunir una serie de condiciones como son: consistencia adecuada del medio, luz
ambiental, esterilidad del medio, temperatura, grado de humedad y presin de oxgeno
adecuadas, as como un grado correcto de acidez o alcalinidad. Un medio de cultivo debe
contener los nutrientes y factores de crecimiento necesarios y debe estar exento de todo
microorganismo contaminante.
La clasificacin de los medios es:
a. Segn su consistencia:
Slidos: que llevan una sustancia que se llama agar, que es un polisacrido
acdico producido por ciertas algas rojas que gelifica por debajo de 45 C. Se usa
a una concentracin del 1,5%, da consistencia slida y va a ser el soporte de los
compuestos necesarios en la nutricin de las bacterias.
Semislidos: tienen menos agar, una proporcin de 0.1% a 0.5%.
Lquidos: se llaman caldos.
b. Segn su composicin:
Medios sintticos o qumicamente definidos: que son medios de cultivo de
composicin conocida o definida, llevan fuente de carbono, fuente de nitrgeno,
sales que suplan iones (P, K, Mg, Fe, Ca...), otros elementos como son
estimuladores del crecimiento (eritritol para Brucella abortus), se utilizan muy poco
y suelen hacerse para cultivar una especie de bacterias determinada.
Medios generales: no selectivos, para cultivo de una amplia variedad de
organismos difciles de hacer crecer. A menudo estn enriquecidos con materiales
como: sangre, suero, Hemoglobina, FX, FV, glutamina, u otros factores accesorios
para el crecimiento de las bacterias, tienen una composicin en la que crecen la
mayor parte de los microorganismos. (Agar Sangre, Schaeadler, PCA, APHA, etc)
Medios enriquecidos: son medios generales a los que se les aade sustancias que
aumentan su poder nutritivo, adems enlentecen/suprimen el crecimiento de la
flora competitiva normal potenciando el cultivo y crecimiento deseado (Selenito,
medio con Vitamina K).
de carbono, suero, sangre completa, bilis, etc. Los hidratos de Carbono se adicionan por
dos motivos fundamentales: para incrementar el valor nutritivo del medio y para detectar
reacciones de fermentacin de los microorganismos que ayuden a identificarlos. El suero
y la sangre completa se aaden para promover el crecimiento de los microorganismos
menos resistentes, productos fermentables (monosacridos, disacridos y tienen dos
funciones: producir energa y para la identificacin y clasificacin de los
microorganismos). Tambin se aaden colorantes que actan como indicadores para
detectar, por ejemplo, la formacin de cido o como inhibidores del crecimiento de unas
bacterias y no de otras (el Rojo Fenol se usa como indicador ya que es rojo en pH bsico
y amarillo en pH cido. La Violeta de Genciana se usa como inhibidor ya que impide el
crecimiento de la mayoria de las bacterias Gram-positivas).
Inoculacin de los medios de cultivo
En microbiologa se entiende por "siembra" la operacin que consiste en depositar un
germen aspticamente en un medio de cultivo.
Toda siembra debe adaptarse a los siguientes principios generales:
1 . Practicarla en medios de cultivo favorables y previamente esterilizados.
2. Emplear instrumentos aspticos.
3. No contaminar ni destruir el inculo,
4. Depositarla aspticamente en los medios elegidos.
5. Esterilizar los instrumentos empleados antes y despus de cada operacin.
Los medios de cultivo, como ya se ha dicho, pueden ser slidos, semislidos o lquidos, y
estar contenidos en tubos, placas o frascos.
La tcnica general de las siembras variar segn el estado fsico del material a sembrar y
del medio de cultivo.
Mtodos de cultivo de uso rutinario
Al inocular debe trabajarse siempre dentro del radio de un mechero Bunsen (30 cm.), o,
en el ambiente dentro de una campana de flujo laminar, ya que, la corriente ascendente
de aire que va por la llama, o la corriente de aire del flujo laminar arrastra el polvo y otras
partculas con el aire hacia arriba, o hacia afuera; impidiendo la contaminacin del medio
de cultivo.
El asa o pipeta pasteur deben ser flameadas adecuadamente y enfriadas antes de tocar el
inculo, o el medio de cultivo.
1. Siembra en placas
2. Siembra en tubos de agar tendido
3. Siembra por picadura
4. Siembra en superficie y picadura
5. Siembra en profundidad
2. FLUJOGRAM AS
Preparacin de medios de cultivo
Medios de cultivo slidos
1. verificar materiales
2. leer etiqueta
3. pesar la cantidad
4. medir agua
5. adicionar la mitad
6. agitar
7. adicionar la otra mitad
8. terminar la disolucin
9. homogenizar a calor
10. agitar
esterilizar
enfriar
verter en cajas de petri
Hasta disolver
solidificar
prueba de esterilidad
refrigerar
Medios de cultivo lquidos
3 ml de caldo
girar 180
en caso de
Semislido
Inclinados
realizar picadura
En zigzag
3. CLCULOS
Para la preparacin del SIM el frasco pone una concentracin 30g/1000ml, como
nos pidieron preparar 50ml, entonces:
30g
x
1000ml
50ml
x = 1.5g de SIM que se utiliz para preparar el medio.
Para la preparacin del LIA el frasco pone una concentracin 32g/1000ml, como
nos pidieron preparar 40ml, entonces:
32g
x
1000ml
40ml
x = 1.28g de LIA que se utiliz para preparar el medio.
Para la preparacin del ASM el frasco pone una concentracin 111g/1000ml, como
nos pidieron preparar 100ml, entonces:
111g
x
1000ml
100ml
x = 11.1g de ASM que se utiliz para preparar el medio.
1000ml
30ml
x = 0.24g de ASM que se utiliz para preparar el medio.
4. RESULTADOS
4.1 Preparacin de medios de cultivo
Utilizando el medio de cultivo SIM y por medio de la siembra del Bacillus subtillis, despus
de las 24h presentaron las siguientes caractersticas:
Para los tubo 1y 2. se vi una coloracin amarillo claro con un precipitado de color blanco
en el fondo, adems se not un poco espeso.
Con la misma siembra y con la bacteria Proteus sp, despus de las 24h las caractersticas
vistas fueron:
Para los tubos 3 y 4. Present turbidez, con una coloracin amarilla y un precipitado en el
fondo de color blanco.
Despus de las 48h todas las muestras presentaron un precipitado en la parte inferior del
tubo.(ver anexo 1)
4.2.2
Utilizando el medio de cultivo SIM y por medio de la siembra del S. faecium las
caractersticas que presentaron a las 24h son:
Para el tubo 1. coloracin amarillo claro, con turbidez y con una capa superficial blanca.
Para el tubo 2 y 3. coloracin amarillo claro, formacin de un pequeo precipitado blanco
en la parte inferior y de una capa superficial blanca, y presencia de unas gotas
gelatinosas adheridas en las paredes del tubo.
Para el tubo 4. coloracin amarillo claro, presencia de una capa superficial de color
blanco, un anillo por debajo de la mitad, de un color amarillo opaco, con una mayor
turbidez en esta parte.
Despus de las 48h, los cambios que presentaron algunos tubos son:
Para el tubo 1. hubo cambio de color de amarillo a verde con negro, en la parte superior
se vi una capa superficial, hubo formacin de precipitado.
Para el tubo 4. la parte inferior se encontr ms blanca, en esta hay una pequea nata.
Despus de 5 das, los cambios que se vieron son:
Para el tubo 3. color amarillo, formacin de anillo en la parte inferior, con precipitado
blanco.(ver anexo2)
4.2.3
Utilizando el medio de cultivo LIA y por medio de la siembra del S. faecium las
caractersticas que presentaron a las 24h son:
Para los tubos 1 y 2. Presencia de dos fases: en la parte inferior present un color
amarillo transparente, mientras que en la superior un morado transparente. En la parte
superior presenta una capa superficial, en las paredes del tubo hay como especie de
humedad.
Para los tubos 3 y 4. tiene una coloracin miel, formacin de capa superficial y presencia
de humedad. Para el 4 tenia un color ms fuerte y menos humedad.
Despus de las 48h presentaron los siguientes cambios:
Para los tubos 3 y 4. hubo cambio de color, se vieron de color naranja fuerte, hay un
precipitado donde empieza la inclinacin, los otros tubos no presentaron cambio.
Despus de 5 das se observaron otros cambios:
Para los tubos 1 y 2 color prpura totalmente.
Para los tubos 3 y 4 color naranja totalmente. (ver anexo 3)
4.2.4
Utilizando el medio de cultivo EMB y ASM, y por medio de la siembra del Bacillus subtillis
las caractersticas que presentaron a las 24h son:
Para la caja 1. con EMB, Bacillus subtillis y el mtodo de estras, algunas colonias estn
de color morado y rosado.
Para la caja 2. con ASM, Bacillus subtillis y mtodo francs, no hubo ningn cambio.
Para la caja 3. con EMB, Bacillus subtillis y mtodo de estras las colonias tornaron de
color rosado.
Para la caja 4. con ASM, Proteus sp y mtodo francs las colonias se vieron amarillas.
Para la caja 5. con EMB, Proteus sp y mtodo de estras las colonias se vieron rosadas.
Para la caja 6. con EMB y Bacillus subtillis y mtodo francs color rosado.
Para la caja 7 y 8 . con ASM, Bacillus subtillis no hubo cambio alguno.
Despus de 5 das los cambios dados fueron los siguientes:
Para la caja 1 y 3. colonia morada-azul.
Para la caja 2 colonias blancas-amarillas.
Para la caja 4: colonias blancas-amarillas.
Para la caja 5: colonias morada-rosada-azul.
Para la caja 6: colonia azul-moradas-rosadas.
Para la caja 7 y 8: colonia blancas amarillas.(ver anexo 4)
ANLISIS DE RESULTADOS
Para este tipo de siembra los resultados fueron satisfactorios ya que se observ un
crecimiento con base a la cantidad de desarrollo moderado; se di la formacin de
turbidez, de pelculas membranosas y formacin de floculos, anillos y sedimentos.
5.2.2
Hubo movilidad a lo largo de la lnea de inoculacin, lo cual nos indica que hubo
crecimiento bacteriano.
5.2.3
Se da un crecimiento bacteriano lo cual se puedo percibir a travs del cambio de color del
medio. El desarrollo del medio de cultivo se di en forma de rizoide.
5.2.4
PREGUNTAS COMPLEMENTARIAS
La cepa del grupo Proteus providencia, con excepcin de algunas cepas de Proteus
morganii, desaniman a la lisina a cido alfa cetocarbonico. Este ltimo, con la sal de hierro
y con la influencia del oxgeno forma combinaciones pardo rojizas en la regin superficial
del medio de cultivo.
CALDO NUTRITIVO
Se basa en contar el nmero de colonias desarrolladas en una placa de medio de cultivo
slido, donde se ha sembrado un volumen conocido de agua, transcurrido un tiempo y a
una temperatura de incubacin determinados.
Transcurridas las 72 h ( 3 h) o las 48 h, segn proceda en cada caso, contar todas las
colonias desarrolladas en cada placa. Si se ha sembrado ms de una dilucin se
seleccionar la que contenga entre 30 y 300 colonias, descartando las dems. El
recuento no se efectuar en placas que contengan menos de 30 colonias, excepto en
aquellas sembradas con agua sin diluir. El resultado se expresa como nmero de
bacterias aerobias totales en 1ml en 72 h a 22C o en 48 h a 37C
AGAR SALADO DE MANITOL
Es un medio selectivo y diferencial. AMS es selectivo porque contiene 7.5% de sal. Una
alta concentracin de sal promueve el crecimiento de algunos organismos mientras inhibe
el crecimiento de otros. AMS es un medio diferencial porque contiene el azcar manitol y
el indicador de pH rojo de fenol. Los organismos que pueden fermentar el manitol liberan
subproductos cidos, que causan un cambio de color. El rojo de fenol presenta un color
rojo cereza por arriba de pH 8.5, un color amarillo rojizo desde un pH 6.9 a 8.5, y un
amarillo brillante por debajo de un pH de 6.9. Aunque tanto el Staphylococcus epidermidis
y Staphylococcus aureus puede tolerar el alto contenido de sal en el AMS, solamente S.
aureus puede fermentar el manitol, causando que el rojo de fenol vire al amarillo.
6.2 Cul de los mtodos de siembra en caja de petri, considera el mejor y porque?
Se considera como el mejor de los mtodos al mtodo francs o siembra por agotamiento,
ya que esto nos permite observar el crecimiento de los microorganismos en colonia y
tambin de forma aislada debido a la distribucin que se hace de los mismos al momento
de realizar la siembra en el medio slido.
CONCLUSIN
A partir del anterior laboratorio y a travs de la bibliografa citada podemos concluir los
siguientes puntos:
La utilizacin de medios de cultivos es de gran importancia en la industria de
alimentos, nos permite conocer las condiciones en las cuales se desarrolla los
microorganismos tales como bacterias, hongos, algas, levaduras, etc.
La esterilidad es uno de los requisitos necesarios que deben cumplir los medios de
cultivos para que se de el crecimiento adecuado de las bacterias.
Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial
debe reunir una serie de condiciones como son: temperatura, grado de humedad y
presin de oxgeno adecuadas, as como un grado correcto de acidez o
alcalinidad. Un medio de cultivo debe contener los nutrientes y factores de
crecimiento necesarios y debe estar exento de todo microorganismo contaminante
En los diferentes medios de cultivo se encuentran numerosos materiales de
enriquecimiento como hidratos de carbono, suero, sangre completa, bilis, etc. Los
hidratos de Carbono se adicionan por dos motivos fundamentales: para
incrementar el valor nutritivo del medio y para detectar reacciones de fermentacin
de los microorganismos que ayuden a identificarlos. El suero y la sangre completa
se aaden para promover el crecimiento de los microorganismos menos
resistentes.
BIBLIOGRAFA
http://html.rincondelvago.com/microbiologia_15.html
http://www.geocities.com/lorigardeweg/page14.html
http://www.danival.org/notasmicro/medioscult/_madre_medios.html
http://edicion-micro.usal.es/web/educativo/micro2/tema06.html
Manual De Microbiologia. Ed Merck