MEDIOS DE CULTIVO

Un medio de cultivo es un conjunto de nutrientes, factores de

crecimiento y otros componentes que crean las condiciones
necesarias para el desarrollo de los microorganismos.
La diversidad metabólica de estos es tan grande que la variedad
de medios de cultivo es enorme, no existiendo un medio de cultivo
universal adecuado para todos ellos, ni siquiera refiriéndonos a
las bacterias con exclusividad.

Un medio de cultivo es un sustrato o solución de nutrientes en los

que crece y se multiplican los microorganismos en el laboratorio,
con el objeto de aislar diferentes especies bacterianas, con el Fin
de identificarlas y realizar estudios complementarios.

Es una sustancia en la que se puede desarrollar un

microorganismo; contiene los elementos nutritivos esenciales en
una concentración adecuada, la necesaria cantidad de sales, el
adecuado volumen de agua, exento de sustancias inhibidoras del
organismo que se va a cultivar, tiene la consistencia deseada, el
pH adecuado y es estéril.

CONSTITUYENTES HABITUALES DE LOS MEDIOS DE

CULTIVO

A continuación se da una idea general sobre algunos de los

constituyentes habituales de los medios de cultivo.

AGAR. Se utiliza como agente gelificante para dar solidez a los

medios de cultivo. En el agar bacteriológico el componente
dominante es un polisacárido que se obtiene de ciertas algas
marinas y que presenta la indudable ventaja de que a excepción
de algunos microorganismos marinos, no es utilizado como
nutriente. Un gel de agar al 1-2% se licua alrededor de los 100ºC
y se gelifica alrededor de los 40ºC, dependiendo de su grado de
pureza.
EXTRACTOS. Su preparación consiste en que ciertos órganos o
tejidos animales o vegetales (p.e. carne, hígado, cerebro,
semillas, etc.) son extraídos con agua y calor y posteriormente
concentrados hasta la forma final de pasta o polvo. Estos
preparados deshidratados son a menudo empleados en la
elaboración de los medios de cultivo. Los más utilizados son el
extracto de carne, de levadura y el de malta.

PEPTONAS. Son mezclas complejas de compuestos orgánicos,

nitrogenados y sales minerales, que se obtienen por digestión
enzimática o química de proteínas animales o vegetales (soja
caseína carne, etc.). Las peptonas son muy ricas en pépticos y
aminoácidos, pero pueden ser deficientes en determinadas
vitaminas y sales minerales.

FLUIDOS CORPORALES. Con frecuencia es necesario añadir a

los medios de cultivo de algunos patógenos sustancias como
sangre completa, sangre desfibrinada, plasma o suero
sanguíneo, sobre todo para conseguir el primer aislamiento a
partir del hospedador. La sangre no puede ser esterilizada, y por
tanto debe de ser obtenida en condiciones asépticas
directamente de un animal sano, y adicionada al medio de cultivo
después de que este haya sido auto clavado. Los fluidos
corporales no solo aportan factores de crecimiento sino que
también aportan sustancias que neutralizan a inhibidores del
crecimiento de algunas bacterias. Un ejemplo podría ser la
catalasa presente en las células sanguíneas destruye el peróxido
de hidrógeno que algunas bacterias que no poseen este enzima
acumulan como producto del metabolismo del oxígeno.

SISTEMAS AMORTIGUADORES. Para mantener el pH dentro del

rango optimo del crecimiento bacteriano a veces, es necesario
añadir algunos componentes al medio de cultivo. Debido a que la
mayoría de las bacterias son neutrófilas, se suelen emplear sales
del tipo de los fosfatos bisodicos ò bipotásicos u otras sustancias
como las peptonas para prevenir la desviación del pH.

INDICADORES DE PH. Con el objeto de poder detectar

variaciones en el pH debido a fermentaciones u otros procesos,
se hace necesario a veces añadir indicadores acido-base que nos
lo indiquen.

AGENTES REDUCTORES. Con el objetivo de crear en los medios

de cultivo condiciones que permitan el desarrollo de los
gérmenes microaerofilos ò anaerobios se añaden estos agentes
reductores siendo, los más empleados la cisteina y el tioglicolato
entre otros.

AGENTES SELECTIVOS. La adición de determinadas sustancias

a un medio de cultivo puede convertirlo en selectivo. Así, por
ejemplo, la adición de cristal violeta, sales biliares, azida sodica,
telurito potasico, antibióticos, etc., a la concentración adecuada
hará que actúen como agentes selectivos frene a determinados
microorganismos.

Clasificación

Pueden clasificarse según su:

 Consistencia
 Origen
 Composición
 Utilización

Consistencia

 Líquidos: contienen nutrientes a los cuales se les adicionan

sustancias con la capacidad de mantener estables un pH,
 entre ellos podemos encontrar el caldo nutritivo y caldo
peptona.
 Solidos: se obtienen agregando agar (sustancia de tipo
polisacárido que se obtiene de algas marinas) a un medio
liquido determinado. Al tener un medio sólido, nos facilita
obtener colonias bacterianas aisladas.
 Semisólidos: similares a los medios sólidos, la única
diferencia es que a estos se les disminuye la cantidad de
agar, lo que permite conservar cepas bacterianas y la
observación y registro de bacterias móviles.

Origen

Según su origen los medios de cultivo se dividen en medios

sintéticos y medios naturales.

 Los medios sintéticos o químicamente definidos son medios

compuestos por productos químicos conocidos y se utilizan
para realizar estudios metabólicos, por ejemplo: agar
blando, caldo nutritivo, agar eosina azul de metileno, etc.
 Los medios naturales o químicamente no definidos son
aquellos medios que se preparan a partir de sustancias
naturales animales o vegetales, por ejemplo: suero, leche,
papa, etc.

Composición y utilización
Según su utilización y su composición los medios de cultivo se
pueden clasificar en:
 Simples
 Enriquecidos
 Selectivos
 Diferenciales
 Enriquecimiento

1. Medios Simples
 Poseen los requisitos nutricionales para permitir el
desarrollo bacteriano general, ejemplos: agar nutritivo,
caldo nutritivo, entre otros.
También te puede interesar: Entamoeba hystolitica vs.
Entamoeba dispar
2. Medios enriquecidos
 Son medios simples o comunes, a los que se le añaden
ciertos elementos como sangre, suero, líquido ascítico,
huevo, glucosa, vitaminas, etc. lo que permite el aporte de
factores de crecimiento o sustancias que neutralizan
agentes inhibidores del crecimiento en bacterias exigentes
nutricionalmente, entre algunos ejemplos: agar sangre,
medio de Löwenstein-Jensen, enriquecido con huevo para
facilitar el crecimiento de Mycobacterium; agar
desoxicolato-lactosa (DLA), enriquecido con lactosa y
desoxicolato.

3. Medios selectivos
 Se consiguen añadiendo al agar nutritivo compuestos
químicos nocivos para algunas bacterias cuyo crecimiento
no es de interés o también mediante una alteración de las
condiciones físicas del medio, entre algunos ejemplos
tenemos
 El agar Mac Conkey que contiene cristal violeta.
 Thayer-Martin medio selectivo para Neissar, ya que este
posee antibióticos como la vancomicina colistina y nistatina.
 Caldo lactosado bilis verde brillante en donde la bilis inhibe
el crecimiento de bacterias gran positivas.
 Löwenstein-Jensen con verde de malaquita es selectivo
para Mycobacterium.

4. Medios diferenciales
 A estos medios se le adiciona sustancias para que solo
crezcan ciertas bacterias y estas, al actuar sobre alguna de
las sustancias adicionadas, permiten observar
macroscópicamente ciertas propiedades de crecimiento
que ayudan a diferenciar sus colonas de otras especies
diferentes, entre algunos ejemplos encontramos:
 Agar eosina azul de metileno (EMB), diferencia E. coli (color
verde metálico brillante) de colonias de Enterobacter
aerogenes (color rosado, consistencia mucosa y
crecimiento abundante).
 Agar sangre, diferencia variedades de Streptococcus
pyogenes en Streptococcus betahemolíticos de
Streptococcus alfa hemolítico y gama hemolítica.
 Agar Salmonella-Shigella tiene lactosa y un indicador de pH
que permite diferenciar las colonias de bacterias
fermentadoras de este disacárido.
 Agar TSI : sirve para diferencias enterobacterias entre las
que producen o no H2S

5. Medios de enriquecimiento
 Son medios líquidos que favorecen o permiten la
multiplicación de las bacterias cuando la muestra obtenida
es muy pobre, por ejemplo:
 Caldo tioglicolate, favorece el crecimiento de las bacterias
anaeróbicas.
 Caldo tetrationato favorece crecimiento de bacterias
microaerófilas.
 Los caldos bilis y de Muller-Kauffman, favorecen el
crecimiento del género Salmonella.
 Caldo o agua peptonada se utiliza para el crecimiento de
Vibrio Cholerae.
Preparación de medios de cultivo
TÉCNICA:
1. Consultar las indicaciones del fabricante del medio de cultivo a
preparar para conocer las condiciones en las que se elaborara el
medio.
2. Pesar exactamente la cantidad del medio de cultivo calculada
por regla de tres en relación con la especificada en el envase para
un litro. El medio deshidratado se debe pesar en papel aluminio o
cera, limpio.
3. Al medio de cultivo pesado se le añade aproximadamente la
mitad del agua destilada, se agita lo suficiente tratando de hacer
una suspensión homogénea, se deja reposar unos minutos y
después se le adiciona el resto del agua arrastrando el medio que
pudo quedar pegado en las paredes del matraz.
4. el medio de cultivo se debe calentar para disolverlo. Este
calentamiento debe efectuarse en baño María o directamente en
la parrilla. El medio estará listo cuando al agitar el recipiente no
se adhieran a las paredes internas, partículas del agar. Es
necesario que el tiempo de calentamiento sea el indicado, ya que
los medios de cultivo son muy sensibles. Los medios de cultivo
que no contienen agar son fáciles de disolver en el agua fría o con
un ligero calentamiento.
5. la esterilización del medio de cultivo se lleva a cabo en
autoclave, a 121 °C durante 15 minutos. Se recomienda repartir el
medio en porciones más pequeñas por ejemplo, en los tubos
donde va a quedar definitivamente, no se recomienda esterilizar
en las cajas Petri.
6. se debe verificar si el pH del medio preparado es el
especificado, este puede ser medido con un potenciómetro, si el
medio es sólido debe ser medido a una temperatura de 45 o 50°C
(Líquido) y si es líquido a temperatura ambiente.
7. el vertido en placas se debe hacer, cuando el medio se
encuentre a una temperatura de 45 o
50 °C, en un ambiente estéril, evitando la formación de burbujas,
si esto ocurre al terminar el vaciado se pasa el mechero
rápidamente por la caja con el medio. El volumen que se le agrega
a la caja es de unos 15 o 20 ml. En los tubos dependiendo del
tamaño se adicionara aproximadamente la mitad del tubo cuando
son agares, y para el medio de cultivo líquido
(caldos) se le agregara a cada tubo de 2 a 3 ml.
8. cuando el medio de cultivo este solidificado o frío se
empaquetaran en cajas o en tubos y se rotularán con el nombre
del medio, fecha de preparación, numero de equipo que lo
elaboro y se guardaran en el refrigerador en forma invertida.