MEDIOS DE CULTIVO

El primer reporte de la utilización de medios de cultivo llega del micólogo Julius Oscar Brefeld en 1975, que
consiguió aislar y cultivar esporas de hongos en medios sólidos realizados a base de gelatina. Este sistema no
era adecuado para las bacterias y no fue hasta el año 1878 cuando Joseph Lister creó un método enfocado al
cultivo puro basado en diluciones seriadas en un medio líquido.

Robert Koch realizó sus investigaciones utilizando en un primer

momento rodajas de patata como soporte nutritivo sólido, pero no
tardó en recurrir al caldo de carne líquido, diseñado por Friedrich
Loeffler, en 1881, añadió gelatina utilizada por su esposa para le
preparación de postres, logrando un medio sólido transparente
ideal para la observación de la morfología macroscópica de las
colonias microbianas.

En el año 1882 tiene lugar uno de los grandes avances de la

microbiología en relación con los medios de cultivo: el médico
alemán Walter Hesse introduce un agente solidificante, el agar-
agar, un polisacárido extraído de algas rojas.

En 1887 un ayudante de Koch llamado Julius Petri, comienza a utilizar placas de cristal planas, que se llaman
desde entonces placas de Petri, para sustituir a las clásicas bandejas de vidrio cubiertas con campanas que se
usaban hasta entonces.

Martinus Beijerinck y Sergei Winogradsky desde 1888 realizaron sus investigaciones sobre las bacterias que
utilizan nitrógeno y azufre ( quimioautótrofas) y tuvieron gran importancia en el desarrollo de los medios
selectivos y de enriquecimiento. Diseñaron este tipo de medios de tal forma que su especial composición
química favorecía el crecimiento de ciertos tipos de microorganismos que, en función de sus procesos
metabólicos, eran los únicos capaces de utilizar para su desarrollo ciertos nutrientes del medio.

En 1892 Würtz impulsó el uso de los medios diferenciales, incorporando indicadores de pH a la composición de
ciertos medios con lo cual se podía observar la producción de ácidos en la fermentación en ciertos
microorganismos.

DEFINICION

Los medios de cultivo son una mezcla equilibrada de nutrientes que en concentraciones adecuadas y con
condiciones favorables de pH y temperatura, permiten un buen crecimiento de los microorganismos. Contienen
una base mineral; fuente de carbono, nitrógeno y azufre; atmósfera adecuada y los factores de crecimiento
necesarios

OBJETIVO

Aprender como se logra la recuperación de los microorganismos a partir de las muestras clinicas que se toman en
los laboratorios
 CLASIFICACION DE LOS MEDIOS DE CULTIVO

Según su estado físico:

• Sólidos: presentan en su composición un agente solificante, el agar, en una proporción de 12 a
15 gramos por litro. Tambien pueden contener gelatina o albúmina. Se suelen nombrar como
Agar.
•Semisólidos: presentan agar en su composición, pero en ina proporciín mucho menor que los
medios sólidos, 2,5gramos por litro. Esta concentración permite evaluar la movilidad de los
microorganismos en este tipo de medios. Se suelen llamar como Caldo.
• Líquidos: no contienen ningún agente solidificante.
Según su composición:
•Empíricos o naturales: son los preparados a partir de sustancias naturales de origen animal o
vegetal como ser extractos de tejidos o infusiones y cuya composición química no se conoce
exactamente.
•Sintéticos: son los medios que contienen una composición química definida cualitativamente y
cuantitativamente. Se utilizan para obtener resultados reproducibles.
•Semisintéticos: son los sintéticos a los que se les añaden factores de crecimiento bajo una
forma de un extracto orgánico complejo, como por ejemplo extracto de levadura.

Según su formulación:
• Químicamente definidos: se conoce la cantidad exacta de cada uno de los compuestos que
hay en el medio.
•Complejos: se realizan a partir de extractos naturales (extracto de levadura, sangre, etc.); no se
conoce exactamente cuál es la composición del medio; sin embargo, presenta la ventaja de que
ya están presentes todos o casi todos los elementos que una célula puede requerir
Según su uso:
•Medio de uso general: medio en donde crecen todo tipo de microorganismos, excepto los que
necesitan condiciones especiales (por ejemplo, agar CLED).
•Medio selectivo o inhibidor: permite seleccionar el crecimiento de una especie o grupo
determinado (hongos, bacterias entéricas, protozoos...).
•Medio diferencial o de aislamiento: permite identificar una especie con otra, ambas en el
mismo medio. Puede ser por su crecimiento, su metabolismo,su respiración, etc. (por ejemplo,
medio de McConkey).
• Medio de enriquecimiento: contiene los nutrientes necesarios para apoyar el crecimiento de
una amplia variedad de microorganismos, se utiliza para la cosecha de diferentes tipos de
microorganismos en un mismo medio.
• Medio mínimo: contiene la mínima cantidad de nutrientes posible que permite el crecimiento
de una especie;
• Medio de transporte: preparado para servir como almacenamiento temporal a especímenes
transportados o en transferencia; mantienen su viabilidad y su concentración simple
COMPOSICION DE LOS MEDIOS DE CULTIVO

Los componentes de los medios de cultivos se clasifican en:

•Macronutrientes.
•Micronutrientes o elementos traza.
•Factores de crecimiento.
 CONDICIONES REQUERIDAS
El desarrollo adecuado de los microorganismos en un medio de cultivo se ve afectado por una serie de
factores de gran importancia y que son ajenos por completo al propio medio. Los medios de cultivo
para poder ser utilizados y garantizar que los resultados obtenidos a partir de ellos sean confiables
deben cumplir con los siguientes requisitos:

1- Disponibilidad de nutrientes adecuados:

Un medio de cultivo adecuado para la investigación microbiológica debe contener, como mínimo,
carbono, nitrógeno, azufre, fósforo y sales inorgánicas. En muchos casos serán necesarias ciertas
vitaminas y otras sustancias inductoras del crecimiento. Siempre han de estar presentes las sustancias
adecuadas para ejercer de donantes o captadores de electrones para las reacciones químicas que tengan
lugar. Todas estas sustancias se suministraban originalmente en forma de infusiones de carne, extractos
de carne o extractos de levadura. Sin embargo, la preparación de estas sustancias para su aplicación a
los medios de cultivo provocaba la pérdida de los factores nutritivos lábiles. Actualmente, la forma más
extendida de aportar estas sustancias a los medios es utilizar peptona que representa una fuente de
nitrógeno y carbón, ya que la mayoría de los microorganismos que no suelen utilizar directamente las
proteínas naturales, tienen capacidad de atacar los aminoácidos y otros compuestos más simples de
nitrógeno presentes en la peptona. Ciertas bacterias tienen necesidades nutritivas específicas por lo que
se añaden sustancias como suero, sangre, líquido ascítico, etc. Igualmente pueden ser necesarios ciertos
carbohidratos y sales minerales de calcio, magnesio, manganeso, sodio o potasio y sustancias
promotoras del crecimiento, generalmente de naturaleza vitamínica. A menudo se añaden al medio de
cultivo ciertos colorantes, bien como indicadores de ciertas actividades metabólicas o bien por sus
capacidades de ejercer inhibición selectiva de ciertos microorganismos.
2- Consistencia adecuada del medio:

Partiendo de un medio líquido podemos modificar su consistencia añadiendo productos como

albúmina, gelatina o agar, con lo que obtendríamos medios en estado semisólido o sólido. Los medios
solidificados con gelatina tienen el gran inconveniente de que muchos microorganismos no se
desarrollan adecuadamente a temperaturas inferiores al puntode fusión de este solidificante y de que
otros tienen la capacidad de licuarla. Actualmente los medios sólidos son de uso universal, por su
versatilidad y comodidad, pero hay también gran cantidad de medios líquidos cuyo uso está
ampliamente extendido en el laboratorio.

3- Presencia (o ausencia) de oxígeno y otros gases:

Gran cantidad de bacterias pueden crecer en una atmósfera con tensión de oxígeno normal. Algunas
pueden obtener el oxígeno directamente de variados sustratos. Pero los microorganismos anaerobios
estrictos sólo se desarrollarán adecuadamente en una atmósfera sin oxígeno ambiental. En un punto
intermedio, los microorganismos microaerófilos crecen mejor en condiciones atmosféricas
parcialmente anaerobias ( tensión de oxígeno del 10%), mientras los anaerobios facultativos tienen un
metabolismo capaz de adaptarse a cualquiera de las citadas condiciones.

4- Condiciones Adecuadas De Humedad:

Un nivel mínimo de humedad, tanto en el medio como en la atmósfera, es imprescindible para un buen
desarrollo de las células vegetativas microbianas en los cultivos. Hay que prever el mantenimiento de
estas condiciones mínimas en las incibadoras de cultivo a 35-37ºC proporcionando una fuente adecuada
de agua que mantenga la humedad necesaria para el crecimiento de los cultivos y evitar así que se
deseque el medio.

5- Luz ambiental:

La mayoría de los microorganismos crecen mucho mejor en la oscuridad que en presencia de luz solar.
Hay excepciones evidentes como sería el caso de los microorganismos fotosintéticos.

6- pH:

La concentración de iones hidrógeno es muy importante para el crecimiento de los microorganismos.

La mayoría de ellos se desarrollan mejor en medios con un pH neutro, aunque los hay que requieren
medios más o menos ácidos. No se debe olvidar que la presencia de ácidos o bases en cantidades que
no impiden el crecimiento bacteriano pueden sin embargo inhibirlo o incluso alterar sus
procesosmetabólicos normales.
7- Temperatura:

Los microorganismos mesófilos crecen de forma óptima a temperaturas entre 15 y 43ºC. Otros como
los psicrófilos crecen a 0ºC y los termófilos a 80ºC o incluso a temperaturas superiores
(hipertemófilos). En líneas generales, los patógenos humanos crecen en rangos de temperatura mucho
más cortos, alrededor de 37ºC, y los saprofítos tienen rangos más amplios.

8- Esterilidad del medio:

Todos los medios de cultivo han de estar perfectamente estériles para evitar la aparición de formas de
vida que puedan alterar, enmascarar o incluso impedir el crecimiento microbiano normal del o de los
especimenes inoculados en dichos medios. El sistema clásico para esterilizar los medios de cultivo es el
autoclave (que utiliza vapor de agua a presión como agente esterilizante).

MEDIOS DE CULTIVO MAS UTILIZADOS

1. MEDIO STUART: el medio posee los nutrientes minimos requeridos para que un microorganismo
sobreviva sin multiplicarse. Posee una baja concentración de agar (5gr). Este medio es usado para
transportar las muestras tomadas con escobillon.

2. CALDO TIOGLICOLATO: medio líquido contiene una gran cantidad de nutrientes como peptona,
dextrosa y sales, que le permiten a los microorganismos crecer facilmente en el. Se lo considera un
medio de recuperación óptimo.
3. AGAR SANGRE: medio todo-proposito, ya que permite el crecimiento de la mayoria de los
microorganismos. Se utiliza un agar base rico en musculo cardiaco, peptona, extracto de levadura sal y
agar, que es enriquecido con sangre de cordero. Esta adición es utilizada para la clasificación de las
bacterias del genero Streptococcus, de acuerdo a la hemolisis que presentan sobre este medio.

4. AGAR CHOCOLATE: es el mismo agar sangre, pero este compuesto se adiciona a una
temperatura de 70ºC, lo que provoca que los globulos rojos se lisen (destruyan) y se libere por lo tanto
los nutrientes presentes en ellos. Este medio es apropiado para la recuperación de los bacilos
gramnegativos Fastidiosos, como Haemophilus.

5. AGAR MACCONKEY: medio desarrollado para la identificacion de Enterobacterias. El medio es

selectivo gracias a la presencia de sales biliares que inhiben el crecimiento de bacterias grampositivas,
y es diferencial al permitir identificar las enterobacterias lactosa positivas al provocar el viraje del
indicador rojo neutro.
6. AGAR EMB: medio desarrollado para la identificacion de Enterobacterias. El medio es selectivo
gracias a la presencia de eosina y azul de metileno que inhiben el crecimiento de bacterias
grampositivas, y es diferencial al permitir identificar las enterobacterias lactosa positivas al provocar el
viraje de los indicadores eosina y azul de metileno. En este medio Escherichia coli presenta brillo
metálico.

7. AGAR MUELLER HINTON: medio utilizado para la realización de los Antibiogramas, prueba en
que se enfrentan los microorganismos a los diferentes antibioticos y se determina si son sensibles o
resistentes.

8. AGAR SCHAEDLER: medio enriquecido con tres peptonas de origen animal y vegetal, dextrosa y
extracto de levaduras que permite el crecimiento de microorganismos fastidiosos gracias a la adición de
sangre. Este medio se utiliza para la recuperación e identificación de las bacterias anaerobias
9. AGAR LOWESTEIN JENSEN: agar enriquecido con glicerol y huevo, nutrientes requeridos por
las Mycobacterias para producir el ácido micolico que conforma su pared.

10. AGAR THAYER MARTIN: agar selectivo para la recuperación de Neisseria desde muestras que
contienen flora mixta, por ejemplo faringe, vagina, recto y uretra. El medio es un agar chocolate
enriquecido con vitaminas y tres antibioticos que inhiben la flora acompañante en la muestra

11. AGAR CLED: agar utilizado para el aislamiento, recuento e identificación presuntiva de bacterias
en orina.
12. AGAR TCBS agar utilizado para la recuperación de Vibrio cholerae y otros Vibrios de heces,
hisopados rectales, vomito, pescados o otros alimentos contaminados. Su poder selectivo se debe a la
presencia de sales biliares y colato de sodio que inhiben el crecimiento de bacterias grampositivas. Es
diferencial al premitir la identificación de Vibrios que fermentan sacarosa al virar el indicador azul de
bromotimol.

ACTIVIDADES

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Lea el párrafo que aparece abajo y complete las palabras que faltan.

Paciente presenta una lesión en piel tipo ulcerativa. La muestra se toma y transporta en el
medio . El bacteriologo siembra la muestra en caldo que por ser
enriquecido permitira el crecimiento de los microorganismos. De este medio siembra en
Agar , medio enriquecido y suplementado con sangre, y en el cual es posible
determinar la hemolisis. En este medio crecen tanto bacterias grampositivas como gramnegativas. Dos
medios que me permitiran el crecimiento exclusivo de bacterias gramnegativas son y
EMB. Finalmente es importante determinar la sensibilidad de la bacteria recuperada, asi que se debe
trabajar con Agar