INGENIERÍA BIOQUÍMICA

TECNOLÓGICO NACIONAL DE MÉXICO EN CELAYA

INSTITUTO TECNOLÓGICO DE CELAYA

D.C. SILVA MARTÍNEZ GUILLERMO ANTONIO
FECHA: MARTES 18 DE ABRIL DEL 2023

UNIDAD III: FACTORES AMBIENTALES QUE AFECTAN EL CRECIMIENTO DE

MICROORGANISMOS
PRÁCTICA 13 “PRUEBAS BIOQUÍMICAS”

MICROBIOLOGÍA “A”
Pacheco Ramírez Carlos Emmanuel 20030600
Ramírez Juárez Alin 20030916
Sánchez Balderas María Teresa 20030665
Sánchez Jiménez Montserrat 20030189

Semestre enero 2023 - junio 2023

Microbiología general 18 de abril 2023

PRUEBAS BIOQUÍMICAS
Ramírez Juárez, A., Pacheco Ramírez, C., Sánchez Balderas, M. y Sánchez Jiménez, M.

RESUMEN

Las pruebas bioquímicas son un conjunto de procedimientos que se les realizan a las bacterias para poder
identificar el género al cual pertenecen. Esta identificación se realiza gracias al metabolismo que cada género
en particular de bacterias tiene, a la fuente principal de carbono, al pH en el que se desarrollan, entre otras
características esenciales que se toman en cuenta para la identificación bacteriana.

1. OBJETIVO diferentes actividades metabólicas como de

Que el estudiante comprenda la importancia de las
pruebas bioquímicas para la caracterización de
microorganismos.
2. INTRODUCCIÓN
Las pruebas bioquímicas son un conjunto de
procedimientos experimentales que son utilizadas
principalmente en laboratorios clínicos y de
experimentación para la determinación de la
presencia y la caracterización microbiana.
Su importancia se debe a que existe un gran número
de patologías que son causadas por
microorganismos, por lo que, en el ámbito de la
medicina y la industria de alimentos, es necesario
llevarlas a cabo con el fin de evitar, prevenir y tratar
enfermedades.
aminoácidos o urea y la producción de enzimas
específicas como oxidasas, reductasas, amilasas,
lipasas, entre otros. (UNAM)
Algunos ejemplos de medios que se utilizan para
pruebas biológicas son:
Medio TSI: o también llamado agar hierro triple
azúcar es un medio de cultivo sólido que sirve para
orientar la identificación inicial de los bacilos Gram
negativos. Se fundamenta en evidenciar la
fermentación de los azúcares presentes, y la
producción de sulfuro de hidrógeno y gas. Contiene
cuatro derivados proteicos que lo hacen ser un agar
muy nutritivo: extracto de levadura, extracto de
carne, peptona y proteosa peptona. También
contiene sulfato ferroso de amonio, tiosulfato de
sodio, cloruro de sodio, rojo de fenol y agar. (Lifeder,
Agar TSI: qué es, fundamento, preparación, usos,
2022)

En microbiología, se utilizan para la caracterización
y el estudio de los microorganismos, lo que permite
determinar si son de importancia médica, así como
conocer información específica de estos, como el pH
al que crecen, cómo respiran, de qué están
cubiertos, el tipo de metabolismo, su nutrición, qué
excretan, etc.
El fundamento o las bases metodológicas y
analíticas de las pruebas bioquímicas varía
considerablemente de una prueba a otra, bien sea
en el contexto clínico/diagnóstico o en el
experimental. (Lifeder, 2021)
Existen numerosas pruebas bioquímicas en medios
de cultivo con indicadores de pH que se utilizan para
detectar la producción de ácido o álcali; con
inhibidores selectivos como colorantes, cianuro,
bilis, sulfuros, etc., que facilitan la determinación de
Medio XLD: (agar de xilosa, lisina, desoxicolato) es
un medio moderadamente selectivo y de
diferenciación para el aislamiento y la diferenciación
de patógenos entéricos gram negativos (Salmonella
y Shigella) a partir de muestras clínicas. Es
adecuado en especial para el aislamiento de la
especie Shigella. Contiene extracto de levadura
como fuente de nutrientes y vitaminas. Utiliza el
desoxicolato de sodio como agente selectivo y, por
consiguiente, inhibe los microorganismos Gram
positivos.
Medio LIA: utilizado para diferenciar
microorganismos, especialmente Salmonella spp.,
basado en la decarboxilación y desaminación de la
lisina y en la producción de ácido sulfhídrico. Los
microorganismos fermentadores de glucosa
acidifican el medio y provocan el viraje del color
púrpura al amarillo. El ambiente ácido favorece la

1
Microbiología general 18 de abril 2023

actividad enzimática decarboxilasa y se metaboliza
la lisina a cadaverina elevando el pH del medio de
cultivo y tornándolo al color púrpura o violeta.
(Britanialab)
Medio CS: El agar Citrato de Simmons es un medio
sólido utilizado para la identificación de
microorganismos, especialmente de bacilos Gram
negativos. La única fuente de carbono del medio es
el citrato, la bacteria inoculada en ese medio solo
puede reproducirse si es capaz de tomar el carbono
de este compuesto. La prueba era positiva si había
turbidez en el medio; sin embargo, tenía el
inconveniente de que podía ocurrir turbidez no
específica. (Lifeder, Agar citrato de Simmons: qué
es, fundamento, preparación, usos, 2022)
gramnegativos (se tomó la colonia del agar EMB
inoculado con muestra del caldo nutritivo).
Para dicha resiembra, se prepararon dos tipos de
medios selectivos diferentes, uno de ellos se trató
del agar SS (Salmonella y Shigella) y el otro fue agar
McConkey. De cada uno de los agares se
prepararon dos cajas y en cada una de las cuatro
cajas se inoculó del agar EMB para obtener
aislamiento de colonias puras y continuar con el
proceso de identificación. Se estrió por agotamiento
y se incubaron por 24 horas a 36°C.

Medio SIM: (Sulfhídrico Indol Movilidad), es un

cultivo semisólido con las enzimas Tiosulfato
reductasa, cisteína desulfurilasa y tiptofanasa. El
medio de cultivo tiene consistencia semisólida por lo
que la movilidad se observa por el crecimiento del
microorganismo en todo el tubo, más allá de la zona
de inoculación (picadura). Los microorganismos
inmóviles solo crecerán en la zona inoculada.
(UNAM, Pruebas bioquímicas)

Medio MRPV: Medio utilizado para la realización del

ensayo de Rojo de Metilo y Voges Proskauer. Es
particularmente útil para la clasificación de
enterobacterias. En el medio de cultivo, la
pluripeptona aporta los nutrientes necesarios para el
desarrollo bacteriano y la glucosa es el hidrato de
carbono fermentable. La glucosa puede ser
metabolizada por los microorganismos, a través de
distintas vías metabólicas. Según la vía utilizada, se
originarán productos finales ácidos (ácido láctico,
ácido acético, ácido fórmico), o productos finales
neutros (acetil metil carbinol). (Britanialab, MR-VP
Medio)
Medio CU: Caldo Urea. Determina la capacidad de
un organismo de desdoblar la urea formando una
molécula de dióxido de carbono y dos moléculas de
amoniaco por acción de la enzima ureasa. Esta
degradación produce amoniaco que hará variar el
color del indicador de amarillo a rojo, poniéndose así
de manifiesto la actividad ureasa. (Ulpgc)
2. MATERIALES Y MÉTODOS
Figura 1. Resiembra en agares SS y MacConkey.
Para la realización de las pruebas bioquímicas, se
tuvieron que preparar medios distintos, los cuales
fueron medio XLD, LIA, TSI, CS, SIM, MRVP (dos
tubos con caldo) y CU. Para el medio XLD, fue
preparado en cajas de Petri (1), mientras que los
demás se pusieron en tubos de ensaye, donde para
la inoculación, el medio XLD fue puesto en placas de
Petri donde se inoculó por agotamiento. Los medios
restantes fueron colocados en tubos de ensaye, de
manera que, el agar TSI, LIA y CS tuvieran una ligera
inclinación, mientras que los demás (medios CU y
MRVP) y el agar SIM, no se les tuvo que realizar este
procedimiento.

Para la realización de las pruebas bioquímicas, Para la inoculación, citando el reporte anterior, se
primero se tuvo que realizar un resembrado de sospechaba la presencia de Salmonella spp., de
dónde se había detectado un crecimiento de bacilos manera que, de las colonias aisladas del medio SS

2
Microbiología general 18 de abril 2023

que se utilizó para la resiembra, se inocularon todos

los tubos anteriores, donde los que tenían una
inclinación, se inocularon por punción y por un
pequeño estriado en el borde del agar. Para el medio
MRVP, al ser dos tubos, se inoculó uno del agar SS
y otro del agar McConkey para poder llevar a cabo
las dos pruebas bioquímicas que se realizan en este
medio, (rojo de metilo y Vogues Proskauer).

Figura 4. Diagrama de flujo de la alumna Sánchez Balderas

María Teresa.

Figura 2. Diagrama de flujo del alumno Pacheco Ramírez

Carlos Emmanuel.

Figura 5. Diagrama de flujo de la alumna Sánchez Jiménez

Montserrat.

3. RESULTADOS

Agar XLD
En dicho agar, hubo un crecimiento favorable de
bacterias, las cuales crecieron como colonias
transparentes (rojizas por el color del medio) y sin
hacer cambiar de color al medio, lo cual indica que
no existe la fermentación de xilosa, lactosa ni
sacarosa, lo que indica que puede tratarse de una
bacteria del género Shigella por la forma en cómo
crecieron las colonias.

Se descarta la presencia de E. Coli ya que la

muestra fue tomada de la resiembra en un agar SS,
además de que para ser Salmonella spp., estas
producen H2S, lo cual es fácil de identificar ya que el
medio vira a negro al reaccionar con el tiosulfato de
Figura 3. Diagrama de flujo de la alumna Ramírez Juárez Alin.
sodio y citrato férrico de amonio, además de que

3
Microbiología general
este tipo de géneros de bacterias, son buenos
fermentadoras de xilosa y tienden a descarboxilar el
aminoácido lisina, también presente en el medio, lo
cual, lo acidifica. Al no encontrar un viraje, no
existieron reacciones de este tipo.
Figura 6. Crecimiento bacteriana en agar XLD, inoculado de
la resiembra en agar SS.
Medio CS
El medio Citrato de Simmons es un medio en el cual
existe únicamente el citrato como fuente de carbono,
dando lugar a reacciones que generan oxalacetato y
piruvato. De esta manera, en el medio se degradan
a bicarbonatos y carbonatos, donde el medio vira a
color azul intenso en el pico de la flauta si se trata de
una prueba positiva debido al indicador de pH, azul
de bromotimol.
En la muestra, se pudo observar que, la bacteria que
estaba presente en la muestra es capaz de utilizar el
citrato como única fuente de carbono, dando lugar
así a una prueba positiva debido al viraje de color.
Bacterias que generan este viraje son del género
Salmonella spp.
Figura 7. Prueba positiva en medio Citrato de Simmons,
debido a un viraje de verde a azul.
4
18 de abril 2023
Medio TSI
El medio TSI (Triple Sugar Iron Agar) es un medio
que ayuda a describir la presencia de
microrganismos que fermentan azucares como
lactosa, glucosa y sacarosa. En los resultados
obtenidos (donde el medio fue inoculado del agar
SS) en la práctica se tiene que, el color viró de rojo
a completamente amarillo, desde la profundidad
hasta la punta de la flauta hubo un cambio de color,
lo que indica que existe una fermentación de alguno
de los hidratos de carbono presentes en la muestra,
como se muestra:
Figura 8. Prueba positiva en medio TSI, debido a un viraje de
rojo a amarillo en el medio.
Medio LIA
Es un medio utilizado para la identificación de la
descarboxilación y desaminación de la lisina además
de la producción de ácido sulfhídrico. Los resultados
que se obtuvieron con este medio (inoculado del
agar SS) fue un viraje completo de violeta a amarillo,
donde no se pudo observar la producción de gas,
como se muestra:
Figura 9. Prueba en medio LIA donde se muestra el viraje de
color violeta a amarillo.
Microbiología general 18 de abril 2023

Medio SIM
Es un medio que ayuda a verificar la movilidad de los
microorganismos, donde en la inoculación que se
hizo a partir del agar SS como todos los anteriores,
se puede observar que existe la presencia de
movilidad en el fondo de la estría como se muestra
en la figura.

Figura 12. Prueba en medio MRVP en el cual se muestra el

tubo inoculado de la resiembra de agar MacConkey y del agar
SS, respectivamente.

Para la realización de la prueba bioquímica de rojo

Figura 10. Prueba en medio SIM positiva para movilidad en el
fondo de la estría.
de metilo, se agregó al tubo inoculado con la
resiembra del agar MacConkey al cual se le
colocaron unas gotas de rojo de metilo 0.04% y se
observó una coloración roja en el medio, indicando
que es una prueba positiva y que el medio tenía un
pH ácido entre 4.3, como se muestra den la imagen.

Medio CU (caldo urea)

Medio que ayuda a identificar a microorganismos
que tienen actividad ureasa, donde el viraje de color
amarillo a rosa violeta indica una reacción positiva
de esta enzima en el microorganismo, que fue
exactamente la reacción que se tuvo en el tubo de
ensayo muestra, donde se presentó este viraje,
como se muestra en la figura.

Figura 12. Prueba positiva del rojo de metilo en medio MRVP

del tubo inoculado de la resiembra con agar MacConkey.
Para la prueba Vogues Proskauer, en el tubo
inoculado del agar SS se le añadieron 0.6mL de alfa
naftol al 5%, unas gotas de alcohol etílico absoluto y
0.2mL de hidróxido potásico, donde la superficie del
medio se tornó negra, y se pudo observar
precipitados, lo cual indica que es una prueba
negativa, como se muestra.
Figura 11. Prueba en medio Caldo Urea positiva, que muestra
la acción de la enzima ureasa en el microorganismo presente.

Medio RMVP
Para la prueba del rojo de metilo y Vogues
Proskauer se realizaron dos tubos, de los cuales uno
se inoculó con la resiembra del agar SS y otro con la
del agar MacConkey, donde se pudo observar un
crecimiento favorable en ambos caldos puesto que
Figura 12. Prueba negativa de Voges Proskauer en medio
se mostraba una turbidez notable en cada uno de
MRVP del tubo inoculado de la resiembra con agar SS.
estos, como se muestra en la figura.

5
Microbiología general
4. DISCUSIÓN
De acuerdo con la información proporcionada por
cada uno de los diferentes medio y cómo es que
actúan las bacterias en ellos se pueden discutir
distintos puntos.
A partir de la resiembra que fue en agar SS, se pudo
observar un crecimiento de colonias rosadas y
pegasosas, lo cual se puede inferir que existe
crecimiento de Shigella, aunque también son
capaces de crecer de dicha manera las bacterias del
género Klebsiella.
Centrándose en los resultados de las pruebas
bioquímicas, en el agar XLD las colonias que
crecieron, como se mencionaba en la parte anterior,
fueron incoloras que se aprecian rojas por el color
del medio, donde no hay cambio de color en el
medio, ya que no usan este tipo de azúcares como
fuente de carbono, lo cual de acuerdo con la
bibliografía se puede decir que se hablan de
bacterias del género Shigella. En el agar Citrato de
Simmons se pudo observar una reacción positiva
puesto que en el pico de la flauta se pudo observar
un intenso color azul, lo que puede indicar la
presencia de bacterias del género Klebsiella y
Salmonella.
En el medio TSI se observó un viraje completo del
agar, lo cual indica que existe la probabilidad de que
se encuentre la presencia de microorganismos del
género Klebsiella, aunque al existir ausencia de gas
puede tratarse de alguna especie diferente a la
Klebsiella pneumonie, que es la productora de gas
de esta familia.
En el medio LIA se tuvo un comportamiento extraño,
ya que, en el pico de la flauta, la desaminación de la
lisina positiva da como resultado un viraje a rojo,
mientras que un resultado negativo queda en violeta
y en el fondo, la descarboxilación de este
aminoácido da como resultado un viraje de color
amarillo y la descarboxilación negativa no existen
cambios en el medio. Al estar frente a esta situación
se es posible asumir que existe un microorganismo
que solamente tiene la capacidad de descarboxilar a
a la lisina, no de desaminar, de esta manera se
puede decir que existe la presencia de alguna
bacteria de los géneros Shigella y/o Proteus.
Para la prueba del medio SIM, se observó que existe
movimiento positivo, lo cual es verdadero para
6
18 de abril 2023
bacterias del género Salmonella, pero negativo para
los géneros Shigella y Klebsiella
En el caldo urea, tienen actividad ureasa las
bacterias del género Klebsiella y Proteus, además
de que la bibliografía marca que la Shigiella tiene
una actividad ureasa muy activa. Para la última
prueba que fue en el agar MRVP, se toman en
cuenta solamente el tubo al que se le realizó la
prueba de Vogues Proskauer, en la cual se obtuvo
un resultado negativo, lo que indica que las bacterias
presentes no oxidan el acetilmetil carbinol a
diacetilo, que reacciona con la peptona y produce el
color rojo positivo; bacterias que tienen un VP
negativo son del género Shigella y Salmonella.
5. CONCLUSIÓN
Con el trabajo realizado hasta el momento y la
interpretación de los resultados anteriores, se puede
concluir que, con base en las pruebas bioquímicas y
a que, en la mayor parte de estas pruebas, los
resultados arrojan que existe la presencia de
bacterias del género Shigella, se puede concluir con
que, la muestra tomada de las mesas exteriores de
la cafetería II del campus I del Tecnológico Nacional
de México en Celaya están contaminadas con
enterobacterias Shigella spp., en donde se sospecha
también la presencia de algunas bacterias
Salmonella spp., bacterias que la Organización
Mundial de la Salud clasifica como de riesgo elevado
(en el caso de la Salmonella spp.) y de riesgo medio
(en el caso de la Shigella spp.) en su actualización
de Febrero de 2017, ya que se ha comprobado que
dichas bacterias tienen una capacidad innata a la
resistencia a los antibióticos y una manera muy fácil
de hacer que estas transmitan el material genético
que les permite ser tan resistente.
El centro para el Control y Prevención de
enfermedades recomienda lavar las superficies con
agua jabonosa caliente, desinfectar las superficies
con una solución recién preparada de 1 cucharada
de cloro en un galón de agua, entre otras, para
prevenir la intoxicación por estas bacterias de alto
riesgo.
Microbiología general
6. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
[1] Britanialab. (s.f.). Obtenido de Lisina Hierro
Agar:
https://www.britanialab.com/back/public/upl
oad/productos/upl_6054e85d48c47.pdf
[2] Britanialab. (s.f.). MR-VP Medio. Obtenido de
https://www.britanialab.com/back/public/upl
oad/productos/upl_6070751064820.pdf
[3] Centros para el Control y Prevención de
Enfermedades
Enfermedades, «Seguridad de los
Alimentos,» Salvamos Vidas. Protejamos a
la gente, 27 Mayo 2022. [En línea].
Available:
https://www.cdc.gov/foodsafety/es/comm
unication/salmonella-and-food-
sp.html#print. [Último acceso: 12 Abril
2023].
[4] Lifeder. (12 de enero de 2021). Pruebas
bioquímicas. Obtenido de
https://www.lifeder.com/pruebas-
bioquimicas-microbiologia/
[5] Lifeder. (20 de septiembre de 2022). Obtenido
de Agar TSI: qué es, fundamento,
preparación, usos:
https://www.lifeder.com/agar-tsi/
[6] Lifeder. (9 de septiembre de 2022). Obtenido de
Agar citrato de Simmons: qué es,
fundamento, preparación, usos:
https://www.lifeder.com/agar-citrato-de-
simmons/
18 de abril 2023
[7] World Health Organization: WHO. (2017, 27
febrero). La OMS publica la lista de las
bacterias para las que se necesitan
urgentemente nuevos antibióticos.
Organización Mundial de la Salud.
Recuperado 12 de abril de 2023, de
https://www.who.int/es/news/item/27-02-
2017-who-publishes-list-of-bacteria-for-
which-new-antibiotics-are-urgently-
needed#:~:text=Entre%20tales%20bacteri
as%20se%20incluyen,la%20corriente%20s
angu%C3%ADnea%20y%20neumon%C3%
ADas.
[8] Ulpgc. (s.f.). Pruebas bioquímicas de
identificación de bacterias. Obtenido de
https://www2.ulpgc.es/hege/almacen/downl
oad/35/35729/pruebas_bioquimicas_de_ide
ntificacion_de_bacterias.pdf
[9] UNAM. (s.f.). BD XLD Agar (Xylose-Lysine-
Desoxycholate Agar) . Obtenido de :
https://www.bing.com/search?q=Medio+XL
D&qs=n&form=QBRE&sp=-
1&ghc=1&lq=0&pq=medio+xld&sc=6-
9&sk=&cvid=2487FD3A45E44EA9B6A591
4946DC2C6F&ghsh=0&ghacc=0&ghpl=
[10] UNAM. (s.f.). Pruebas bioquímicas. Obtenido
de https://vdocuments.pub/pruebas-
bioqumicas-unam.html?page=15