UNIVERSIDAD NACIONAL

PEDRO RUIZ GALLO

RECUENTO DE
MICROORGANISMOS AEROBIOS
MESÓFILOS Y COLIMETRIA

DOCENTE:
• MSc. Mario C. Moreno Mantilla
•

INTEGRANTES:
• Avalos Mendo Miguel Stefano
• Banda Crisanto Lisbeth Noemi
• Chávez Yrigoyen Isaías
• Farias Rodríguez Breyder Joshua
• Vargas Llanos Angie Jacqueline

LAMBAYEQUE - 2022
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PRÁCTICA N° 11

RECUENTO DE MICROORGANISMOS AEROBIOS MESÓFILOS Y

COLIMETRIA

I. INTRODUCCIÓN:

Los microorganismos mesófilos son aquellos microorganismos que se desarrollan en

presencia de oxígeno libre y a una temperatura comprendida entre 20 °C y 45 °C con una
zona óptima entre 30°C y 40 °C mientras que los coliformes son una familia de bacterias
que se encuentran comúnmente en las plantas, el suelo y los animales, incluyendo los
humanos y su presencia es un indicio de que puede estar contaminada con aguas negras u
otro tipo de desechos en descomposición. (Ramos Ortega, Vidal, Vilardy, & Saavedra
Díaz, 2018)

La presencia de estas bacterias aerobias mesófilas y coliformes en alimentos, agua,

bebidas, etc., es uno de los indicadores microbianos de su calidad microbiológica; así
mismo también puede asumirse la presencia de gérmenes patógenos o gérmenes que
pueden causar alteraciones del producto, haciéndolo inadecuado para el consumo humano.

El recuento de estos microorganismos sirve para realizar una estimación de número total
de bacterias que hay en un alimento, esta determinación reflejará la calidad sanitaria de
los productos analizados indicando, además de las condiciones higiénicas de la materia
prima, la forma como fueron manipulados durante su elaboración.

En esta práctica se desarrollarán protocolos que permitan determinar el número de

microorganismos aerobios mesófilos y bacterias coliformes en una muestra biológica,
como también destrezas en la preparación de diluciones de una muestra biológica y la
forma de evaluación e interpretación de los resultados de los recuentos microbianos según
las normas técnicas.

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II. OBJETIVOS
▪ Identificar las pruebas usada en microbiología para la identificación de las
Enterobacterias.
▪ Identificar que bacterias conforman los coliformes en una muestra biológica.
▪ Conocer y describir las características de dos medios de caldos de cultivo
diferentes .
III. CUESTIONARIO
1. Que características presentan los medios de caldo Lactosado bilis verde brillante
y caldo Lauryl sulfato.
El caldo lactosado biliado al verde brillante se usa para la detección y enumeración
de coliformes totales y fecales. (No confundir con el Agar Verde Brillante, medio
para aislamiento de Salmonella). Y de E. coli (test de Mackenzie) en leche, otros
alimentos y agua por el método del Número Más Probable. La lactosa permite
diferenciar los coliformes, que la fermentan produciendo gas (que queda retenido en
la campana Durham). La bilis y el verde brillante inhiben el crecimiento de bacterias
Gram positivas.
El grupo de bacterias coliformes incluye bacilos aeróbicos y anaeróbicos facultativos,
Gram-negativos, no formadores de esporas que fermentan la lactosa y forman ácido
y gas a 35 °C en 48 horas. Los miembros de Enterobacteriacae comprenden la
mayoría de este grupo, pero organismos como Aeromonas spp. también se puede
incluir. Los procedimientos para detectar y confirmar coliformes se utilizan para
analizar agua, alimentos, productos lácteos y otros materiales. Brilliant Green Bile
Broth se usa para confirmar un resultado presuntivo positivo de la prueba. (NEOGEN-
Culture Media, 2021)
Resultados:
Positivo: Burbujas (gas) en tubo de fermentación.
Negativo: No hay burbujas (gas) en el tubo de fermentación.

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Ilustración 1.Control – Negativo – Positivo

Caldo Lauril Sulfato

Es un medio selectivo recomendado para la enumeración de coliformes en agua
y productos lácteos, así como para pruebas de confirmación de fermentación de
lactosa con producción de gas por coliformes en alimentos. Otra ventaja de este
medio es que la prueba de indol se puede realizar directamente en el tubo.
El grupo coliforme es tanto aerobio como anaeróbico, Gram-negativo, no
formador de esporas y fermenta la lactosa produciendo ácido y gas a 35 °C en 48
horas.
La triptosa proporciona nitrógeno, vitaminas, minerales y aminoácidos esenciales
para el crecimiento. La lactosa es una fuente de energía de carbohidratos
complejos fermentables. Los fosfatos de potasio son los agentes amortiguadores
de pH, y el cloruro de sodio suministra electrolitos esenciales para el transporte y
el equilibrio osmótico. El lauril sulfato de sodio es el agente selectivo utilizado
para inhibir organismos distintos de los coliformes. La esporulación de las
bacterias aeróbicas está completamente inhibida. (SIGMA)

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Resultados:

Gas
Enterobacter aerogenes +
Escherichia coli +
Salmonella typhimurium -
Staphylococcus aureus -

Ilustración 2.Negativo – Positivo

2. Que bacterias conforman los coliformes totales y cuáles son sus características
fisiológicas.
Las bacterias Coliformes, un grupo de bacterias estrechamente relacionadas al suelo
(siembra), el agua y el tracto intestinal de los animales, se han utilizado como
indicadores de condiciones insalubres en la producción de alimentos y bebidas
durante más de un siglo.
Hoy en día, el recuento de Coliformes es un indicador higiénico frecuente en varias
industrias de alimentos y bebidas.

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El término Coliforme no tiene un estado taxonómico, pero los Coliformes se

caracterizan por ser barras anaerobias gramnegativas que no forman esporas,
definidas por su capacidad para fermentar la lactosa para producir ácido y / o dióxido
de carbono gaseoso.
El grupo de los coliformes incluye bacterias en forma de bacilo, gram negativos, con
las siguientes propiedades bioquímicas: oxidasa negativo y capacidad
de fermentar lactosa, con producción de gas en 48 horas a una temperatura de 37 °C.
Ejemplos de géneros considerados como coliformes incluyen: Citrobacter,
Enterobacter, Escherichia y Klebsiella.
La Coliforme más conocida, Escherichia coli (E. coli), es un residente común de los
intestinos de los animales de sangre caliente, pero también se puede encontrar en el
entorno natural y transmitirse a las instalaciones de fabricación de alimentos, así
como a fuentes de agua potable.
La mayoría de E. coli es inofensiva, pero algunas cepas pueden causar intoxicación
alimentaria grave y enfermedades.
Se trata de un grupo de bacterias gramnegativas, aerobias y anaerobias facultativas,
no formadoras de esporas, fermentadoras de la lactosa a 37 ºC en 48 horas, que poseen
la enzima β-galactosidasa, son oxidasa negativas y su forma celular es de bacilos
cortos (Environment Agency, 2002).
Se encuentran ampliamente distribuidos en la naturaleza, se los puede encontrar en el
agua, el suelo y los vegetales, y forman parte de la flora intestinal de los seres
humanos y de los animales de sangre caliente y fría. Los coliformes fecales
relacionados a la flora intestinal presentan la particularidad de ser termotolerantes, se
pueden multiplicar a 44 ºC, y de fermentar la lactosa, lo que los diferencia del resto
que son denominados coliformes totales . (Sylvia Vázquez, 2013)
3. En que consiste la prueba de IMVIC
Rodríguez et al., (2005) señala que es una prueba usada en microbiología para la
identificación de las Enterobacterias (bacilos Gram negativos, anaerobios facultativos
con metabolismo fermentador). Esta se encuentra compuesta por 4 pruebas que s

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producción de indol, rojo de metilo, Voges Proskauer y utilización de citrato, sus

resultados se presentan como positivos (+) o negativos (-).
▪ Prueba del indol
El Indol es uno de los productos derivados de la oxidación de Triptófano, las bacterias
que poseen enzimas triptófanasas, pueden hidrolizar el Triptófano y producir Indol,
Ácido pirúvico y Amoníaco. Este proceso se puede evidenciar con el reactivo de
Kovacs que al condesarse con el Indol forman un anillo fucsia-rojo en la superficie
del medio de cultivo, para esta prueba se utiliza peptona derivado de la caseína al 1%,
cuyo contenido es rico en Triptófano (Dhurba, 2015).

▪ Prueba del rojo de metilo

Proporciona una característica útil para poder identificar bacterias que tienen la
capacidad de realizar fermentación ácido-mixta, este proceso ocurre cuando ciertas
bacterias fermentan glucosa y originan productos finales de ácidos estables. Durante
la formación de productos ácidos (lactato, acetato, succinato y formiato), se produce
una gran concentración de iones hidrógenos que permiten mantener el pH por debajo
de 4,4. El cambio de pH se identifica al utilizar un indicador rojo de metilo, el cual

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forma un complejo rojo al detectar la presencia de ácidos en el medio (Silapatro,

2004).

▪ Voges-Proskauer
Esta prueba identifica bacterias que son capaces de realizar fermentación
butanodiólica. Las bacterias fermentan glucosa y producen butanodiol,
acetilmetilcarbonil o acetoína. La prueba de Voges-Proskauer se basa en la
conversión de acetoína en diacetilo, reacción que es catalizada por alfa-naftol y KOH
al 40%. El diacetilo forma un producto de color rojo, cuando este se condesa con el
grupo guanidino de algunos aminoácidos aportado por la peptona del medio
(Silapatro, 2004).

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▪ Citrato
El principio se de esta prueba se basa en determinar la capacidad que tiene las
bacterias para utilizar citrato como su única fuente de carbono, y sales de amonio
inorgánico como fuente de energía. En el interior de las bacterias, el citrato es
desdoblado en acetato y oxacetato, este último es convertido en piruvato el cual
proporciona materias primas para la biosíntesis. En esta prueba se utiliza un medio
(Simmons) sólido con citrato sódico y un indicador ácido-base. Se detecta la
alcalinización por medio del consumo de citrato, si la bacteria crece; la degradación
de acetato a CO2 y agua, consume iones H+ que eleva el pH y cambia el color del
medio de verde a azul (Aryal, 2015).

IV. CONCLSUIONES
▪ Se identifico las pruebas que son utilizadas en microbiología para la identificación de
las Enterobacterias. Las pruebas son del indol , del rojo de metilo , Voges-Proskauer
y citrato. Dependiendo de las condiciones, las enterobacterias, pueden realizar un
metabolismo aerobio (si disponen de oxígeno), realizar una respiración anaerobia (si
hay nitratos u otro aceptor de electrones) y distintas fermentaciones.

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▪ Se identifico los géneros que conforman los coliformes en una muestra biológica.
Las cuales son Citrobacter, Enterobacter, Escherichia y Klebsiella. La Coliforme
más conocida es Escherichia coli (E. coli). La denominación
genérica coliformes designa a un grupo de especies bacterianas que tienen ciertas
características bioquímicas en común e importancia relevante como indicadores de
contaminación del agua y los alimentos.
▪ Se conoció y describió las características del caldo Lactosado bilis verde brillante y
caldo Lauryl sulfato. Son importantes para la detección de organismos coliformes en
alimentos, productos lácteos, agua y aguas residuales, así como en otros
materiales de importancia sanitaria.

V. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS:

Aryal, S. (2015). Citrate Utilization: Tex-principle, Media, Procedure and Result.

Recuperado el 08 de agosto de 2017. Disponible en
https://microbiologyinfo.com/citrate-utilization-test-principle-mediaprocedure-and-
result/

SIGMA. (s.f.). LAURYL SULPHATE BROTH. Obtenido de

https://www.sigmaaldrich.com/deepweb/assets/sigmaaldrich/product/documents/22
6/318/l3785dat.pdf

Dhurba, G. (2015). Indole Test: principle, procedure and interpretation. Recuperado el 08

de agosto de 2017. Disponible en http://laboratoryinfo.com/indole-test/

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Neogen- Culture Media. (2021). Brilliant Green Bile 2% Broth (NCM0048). Obtenido de
https://www.neogen.com/globalassets/pim/assets/original/10032/official_ncm0048_
brilliant-green-bile-2-broth_technical-specifications_en-us.pdf

Rodríguez, E., Gamboa, M. d. M., Hernández, F., & García, J. (2005). Bacteriología
general: Principios y prácticas de laboratorio. (U. d. C. Rica Ed.). Costa Rica

Silapatro, S. (2004). Voges-Proskauer and Methyl Red. Recuperado el 09 de agosto de

2017. Disponible en http://w3.marietta.edu/~spilatrs/biol202/labresults/mrvp.html

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