CARACTERIZACIN BIOQUMICA DE ENTEROBACTERIAS Y BACILOS

Brian Andrs Narvez Molano 1631636

Ericka Melissa Villota Maya 1736858
Daniel Alejandro Hernndez Vargas 1628954

RESUMEN

Se incubaron pruebas bioqumicas con siembra de un cultivo de enterobacteria para la identificacin

del gnero y cepa del microorganismo as como adems se incubaron muestras de Bacillus Cereus en
tubos de ensayo con glucosa, arabinosa, xilosa, nitrato y en caja Petri con agar en leche, gelatina y
almidn, en cada uno se determin el comportamiento del microorganismo respecto al nutriente
disponible. A partir de los resultados en las pruebas y la interpretacin de las mismas se determin
que el gnero y la cepa de la enterobacteria, adems se confirm con la caracterizacin bioqumica
que la muestra del cultivo usado pertenece a Bacillus cereus.

INTRODUCCIN MATERIALES

Una caracterstica importante de las clulas es
su capacidad para llevar a cabo reacciones
qumicas y organizar sus molculas para
formar estructuras especficas. Antes de que
una clula se divida deben ocurrir muchas
reacciones qumicas en la clula; estas
reacciones se denominan metabolismo. Este
laboratorio estudi los quimiorganotrofos, es
decir, aquellos microorganismo que utilizan
compuestos orgnicos como fuentes de
carbono y energa, se implementa mecanismo
qumicos de deteccin del tipo de
metabolismo usando reactivos indicadores de
los mismos en cada prueba realizada.
En microbiologa se usan dos tipos generales
de medios de cultivo: los qumicamente
definidos y los complejos (o no definidos). Los
medios definidos tienes compuestos en
cantidades exactas en un volumen de agua
destilada, los medios complejos emplean
hidrolizados de casena, carne, soja, levaduras
y otras sustancias nutritivas los cuales
permiten un buen crecimiento de cualquiera.
- 1 caja de Petri con agar selectivo para
Bacillus cereus.
- Tubos de ensayo con medios.
- Agar leche, agar almidn, agar
gelatina, caldo nutritivo.
- Caldo glucosa, caldo arabinosa, caldo
xilosa.
- Solucin de lugol Reactivo de Griess
- Cloruro de mercurio al 15%.
- Cultivo de microorganismo
enterobacteria de gnero y cepa a
identificar.
MTODOS
PRUEBAS BIOQUMICAS (Enterobacteria):
TSI: Medio universalmente empleado para la
diferenciacin de enterobacteria, en base a la
fermentacin de glucosa, lactosa, sacarosa y a
la produccin de cido sulfhdrico (Britania
Lab, 2012). Se hizo siembra con asa recta en
profundidad y estra en superficie.
Lisina: Medio de cultivo utilizado para
diferenciar microorganismos, especialmente
Salmonella spp. Basado en la
descarboxilacin/ desaminacin de la lisina y
en la produccin de cido sulfhdrico (Britania redonda en superficie en lnea recta.
Lab, 2012). Se hizo siembra con asa recta en
profundidad y estra en superficie.
Citrato: Medio utilizado para la diferenciacin
de enterobacterias, en base a la capacidad de
usar citrato como nica fuente de carbono y
energa (Britania Lab, 2012). Se hizo siembra
con asa recta en superficie.
Urea: Medio utilizado para diferenciar
microorganismos en base a la actividad
uresica. Se utiliza para identificar bacterias
que hidrolizan urea, tales como Proteus spp.,
otras enterobacterias y estafilococos. Se hizo
siembra con asa recta en superficie.
SIM: Es un medio semislido destinado a
verificar la movilidad, produccin de indol y
de sulfuro de hidrgeno en un mismo tubo. Es
til para diferenciar miembros de la familia
Enterobacteriaceae. Se hizo siembra en
profundidad y en el centro del agar.
MRVP: El Medio MRVP es utilizado para la
diferenciacin de organismos coliformes en
base a las pruebas de Rojo de metilo y Voges-
.Proskauer. Este medio tambin es conocido
como Rojo de Metilo Voges- Proskauer (MCD
Lab, 2012). Se hizo siembra en dilucin.
ESTUDIO BIOQUMICO DE Bacillus cereus:
Este microorganismo se dispuso
primeramente de un cultivo en agar Mc
Conkey del cual se extrajo las muestras para la
siembra en los agar almidn, gelatina y leche
en caja Petri, y en cuatro medios de cultivo
vertidos en tubos de ensayo de glucosa,
xilosa, arabinosa y nitrato:
Almidn: este medio contiene este
polisacrido el cual tiene como funcin
biolgica ser fuente de energa en
organismos, a su vez el almidn est formado
por amilosa y amilopectina los cuales a travs
de la hidrlisis puede degradarse y obtenerse
energa del mismo. Se hizo siembra con asa
Gelatina: conocido tambin como agar-agar
es un polmero de subunidades de galactosa;
el cual proviene de la pared celular de algunas
especies de algas marinas (FAO, 2012). Se hizo
siembra con asa redonda en superficie en
lnea recta.
Leche: este medio contiene leche de origen
animal el cual provee la enzima casena
hidrolizada y D-glucosa. Se hizo siembra con
asa redonda en superficie en lnea recta.
Glucosa: la glucosa es un monosacrido
fuente de energa para los organismos,
tambin es la unidad mnima de muchas
macromolculas que conforman los
alimentos. En el tubo su color fue naranja. Se
hizo siembra en dilucin.
Arabinosa: este medio contiene arabinosa el
cual es un monosacrido de 5 carbonos que al
fermentarse el medio tiene un cambio de
color especfico. Es usado para la
identificacin bioqumica de microorganismos
basndose en su capacidad para fermentar la
arabinosa (Dibico, 2012). Se hizo siembra en
dilucin.
Xilosa: este medio contiene xilosa, un
monosacrido de 5 carbonos, permite
distinguir si hubo fermentacin de este
carbohidrato dado por el color del medio,
inicialmente es de color rojo intenso (MCD
Lab, 2012).Se hizo siembra en dilucin.
Nitrato: Permite estudiar simultneamente la
reaccin de oxidacin o fermentacin de
glucosa y la reduccin de nitratos a nitritos,
por bacilos Gram negativos de fcil desarrollo.
Esta prueba es til para diferenciar especies
bacterianas (Britania Lab, 2012).
Todas las siembras se incubaron por 24 horas basados en la fermentacin o no de azcares
a 37C. contenidos en el medio (glucosa, lactosa y
sacarosa). Al final de la prctica se observ
RESULTADOS que el medio TSI se torn de coloracin negra
debido al H2S, lo que no deja evidenciar
PRUEBAS BIOQUMICAS (Enterobacteria) fermentacin de los antes mencionados
azcares. (ver figura 1).
Enterobacteria
INDOL +

ROJO DE METILO +

Figura 1. Tubo de ensayo con TSI (izquierda)

y resultado de siembra de enterobacteria
VOGUES -
PROSKAUER (derecha).

Lisina:
La bacteria posee la enzima descarboxilasa,
por tanto, la descarboxilacin de la lisina
CITRATO + produce una amina, que neutraliza el cido
producido por la fermentacin de la glucosa y
retorna el medio a su color original violeta.,
Tambin hubo produccin de H2S (ver figura
2).
TSI +

UREASA +
Figura 2. Tubo de ensayo con lisina
(izquierda) y resultado de siembra de
enterobacteria (derecha).

TSI:
Tambin conocido como agar citrato de hierro
tres azcares, es un medio de cultivo utilizado
para la identificacin de entero-bacterias
Citrato de Simmons:
El principio de la prueba de utilizacin de
citrato es determinar la capacidad de un
microorganismo para utilizar citrato de sodio
como nica fuente de carbono para su
metabolismo y crecimiento.
Se observ el agar de color azul en la
superficie y verde oscuro en el fondo, no se
observ burbujas. Dio positivo por el azul
intenso indicador de pH (ver figura 3).

Figura 5. Tubo de ensayo con SIM (izquierda)

y resultado de siembra de enterobacteria
(derecha).

MRVP (con reaccin del rojo de metilo):

La prueba del rojo metilo proporciona una
Figura 3. Tubo de ensayo con citrato caracterstica til para identificar especies
(izquierda) y resultado de siembra de bacterianas que producen cidos fuertes a
enterobacteria (derecha). partir de la glucosa. Se obtuvo una coloracin
roja despus de la incubacin, lo que indica
Urea: que sta bacteria degrada la glucosa por
Los microorganismos que tienen la enzima fermentacin cida mixta, manteniendo el
ureasa hidrolizan la urea, liberan amonaco y medio de cultivo cido. (Ver figura 6).
producen un cambio de color rojo-rosado en
el medio. Se observ el fondo de color
amarillo y anaranjado plido sobre la
superficie del agar, El resultado en la prueba
fue positivo dado el present color rosa
prematuro que indica la hidrlisis de la urea
contenida en el medio (ver figura 4).

Figura 6. Tubo de ensayo con MRVP

(izquierda) y resultado de siembra de
enterobacteria ms adicin de rojo de metilo
(derecha).

MRVP: Se observ que con la adicin de

solucin de sulfato de cobre y calentamiento
Figura 4. Tubo de ensayo con urea (izquierda)
el medio no present cambio de color por lo
y resultado de siembra de enterobacteria
que se reporta negativo para esta prueba (ver
(derecha).
figura 7).

SIM:
Se observ color negro (H2S) en todo el
medio lo que no permiti determinar la
movilidad, tambin se observ presencia de
burbujas y tampoco se conoci el resultado
para el reactivo de Kovacs ya que el medio no
oscuro no dejo observar. (Ver figura 5).
 PRUEBAS BIOQUMICAS EN Bacillus Cereus
Figura 7. Tubo de ensayo con MRVP
(izquierda) y resultado de siembra de Caldo glucosa, arabinosa, xilosa, nitrato:
enterobacteria ms adicin de solucin de
sulfato de cobre (derecha). Bacillus cereus
Reactivos Resultado Antes Despues
INTERPRETACIN DE RESULTADOS.

Al analizar los resultados de las pruebas CIDO Y

bioqumicas a la enterobacteria reportando GAS A
K/A para TSI, R/K para lisina, positivo para PARTIR DE +
citrato, Positivo para urea, Positivo para GLUCOSA
MRVP (Con reactivo rojo de metilo), negativo
para MRVP (Con reactivo solucin sulfato de
cobre) Y debido a que en todos los medios XILOSA +
estuvo presente el H2S no se puedo
determinar indol ni movilidad. Por lo anterior
y debido a que hubo generacin de H2S en ARABINOSA
todos los medios se concluy que nuestra +
Enterobacteria podra ser Proteus Vulgaris.

GNERO Y ESPECIE

NITRATO -
Proteus Vulgaris

PRUEBA RESULTADO

TSI K/A
La bacteria Bacillus cereus es anaerobio
LISINA + facultativo, realiza fermentacin de hidratos
DESCARBOXILASA de carbono. En las pruebas bioqumicas
realizadas a la bacteria Bacillus cereus no se
CITRATO DE SIMMONS + observa la coloracin rosada en el medio de
cultivo. Por otro lado se observa la presencia
UREA DE CHRISTENSEN +
de burbujas en la campana, indicando la
MOVILIDAD + formacin de gas a partir de la fermentacin
de hidratos de carbono.
INDOL + La reduccin de nitratos a nitritos o gas
nitrgeno por medio de la enzima nitrato
ROJO DE METILO +
reductasa es un proceso de oxidacin por el
PROSCAVER - cual el nitrato proporciona oxgeno para ser
Commented [U1]: Vogues proscauer
usado como aceptor de electrones. El nitrito
presente en el medio puede detectarse por el
reactivo de Griess por la formacin de un
compuestos dioxoico, al realizar la prueba no
se obtuvo un viraje de color pero si se
observ burbujas en el medio las cuales
corresponden a nitrgeno gaseoso ya que el
nitrito intermediario inhibe las es evidente que el organismo se provee de
descarboxilaciones. enzimas para producir la reaccin y as mismo
hacer uso de estos nutrientes y componentes
Agar leche: Se observ la degradacin de la para la reproduccin microbiana. Tambin dio
casena dada por una zona clara que rodeo la positivo en la fermentacin de glucosa y
lnea de siembra del microorganismo (ver negativo para xilosa y arabinosa lo cual indica
figura 8). su capacidad de fermentar carbohidratos,
adems el cultivo del que se tomaron las
muestras para las pruebas coincide con la
caracterstica de crecimiento en agar
Macconkey la cual es la formacin de colonias
rosadas con precipitado.

CONCLUSIONES
Figura 8. Siembra de B. cereus en agar leche.

Agar gelatina: Se observ crecimiento sobre BIBLIOGRAFA

la superficie del medio y dio positivo a la
prueba con cloruro de mercurio al 15%. MCD Laboratorios. Agar Mac Conkey. 2012
http://www.mcd.com.mx/pdfs/AGAR%20MA
Agar almidn: Se observ el crecimiento C%20CONKEY.pdf
microbiano en la superficie del agar como una
zona de color blanco que rode la lnea de Britania Laboratorio. TSI agar. 2012
http://www.britanialab.com.ar/esp/producto
siembra, dio positivo a la prueba con solucin
s/b02/tsiagar.htm
de lugol que al cabo de 5 min se present
coloracin azul oscuro en las orillas del medio
lo cual indica que el microorganismo realiz Britania Laboratorio. Lisina. 2012
hidrlisis del almidn (ver figura 9). http://www.britanialab.com.ar/esp/producto
s/b02/lisinahierroagar.htm

Britania Laboratorio. Citrato. 2012

http://www.britanialab.com.ar/esp/producto
s/b02/simmonscitagar.htm

Britania Laboratorio. Urea de Christensen.

2012
Figura 9. Siembra de B. cereus en agar
http://www.britanialab.com.ar/esp/producto
almidn.
s/b02/christensemed.htm

Como resultado del anlisis de las pruebas

bioqumicas realizadas a la muestra de
microorganismos se pudo confirmar que el
microorganismo analizado es Bacillus cereus,
ya que dio positivo en las pruebas bioqumicas
en los tres tipos de agar, lo cual confirm la
capacidad del mismo de metabolizar los
diferentes compuestos tales como el almidn,
la gelatina y la casena de la leche, en donde