“Año de la unidad, la paz y el desarrollo”

FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD

ESCUELA PROFESIONAL DE MEDICINA

AUTOR:

Sanchez Mondragon Bryan Smith

ASIGNATURA:

Microbiología Y Parasitología

TEMA:

Pruebas químicas

AULA:

B1P1

DOCENTE:

Dr. LUCY MARIBEL YOVERA CASTRO

PIURA-PERÚ
2023
INTRODUCCION
El reino microbiano, imperceptible a simple vista pero omnipresente en nuestro
entorno, ha sido objeto de una fascinante indagación en la microbiología. En este
vasto mundo de microorganismos, las pruebas químicas desempeñan un papel
cardinal, proporcionando las herramientas esenciales para desvelar los secretos
bioquímicos que caracterizan a bacterias, hongos y virus. Este informe se sumerge
en el intrigante universo de las pruebas químicas en microbiología, explorando
cómo estas técnicas precisas y específicas se convierten en ventanas hacia la
comprensión más profunda de la composición celular, el metabolismo y la
diversidad genética de estos seres diminutos.
La capacidad para identificar y diferenciar entre microorganismos es esencial en
diversos campos, desde la medicina hasta la industria alimentaria y la investigación
medioambiental. Las pruebas químicas se han convertido en aliados indispensables
en la clasificación taxonómica y en la identificación de especies microbianas,
brindando una claridad sin precedentes en la compleja red de interacciones
bioquímicas que gobiernan la vida microscópica. Desde la determinación de la
capacidad de fermentación hasta la evaluación de enzimas clave, estas pruebas
proporcionan datos cruciales que alimentan avances en la investigación médica,
nos alertan sobre riesgos para la salud pública y nos permiten comprender mejor
los ecosistemas microbianos que influyen en nuestro entorno cotidiano.
A lo largo de este informe, exploraremos diversas pruebas químicas utilizadas en
microbiología, destacando su importancia en la identificación precisa de
microorganismos y su papel fundamental en la resolución de problemáticas
relacionadas con la salud humana, la seguridad alimentaria y la sostenibilidad
ambiental. Al desentrañar la complejidad de las respuestas bioquímicas
microbianas, estas pruebas no solo nos proporcionan una herramienta
indispensable para la investigación científica.
OBJETIVOS

General
- El objetivo general de este informe es explorar de manera exhaustiva y
detallada las diversas pruebas químicas utilizadas en microbiología, con el
propósito de comprender su relevancia y aplicación en la identificación y
caracterización de microorganismos.

Específicos
- Analizar la presencia de la enzima catalasa en diferentes microorganismos
mediante la realización de la prueba de la catalasa, se pretende investigar la
capacidad de distintos microorganismos para producir la enzima catalasa. Se
analizarán las reacciones de descomposición del peróxido de hidrógeno,
evaluando la liberación de oxígeno como indicador de la actividad catalasa.
Este objetivo específico tiene como finalidad comprender la diversidad en la
producción de esta enzima y sus implicaciones en la identificación
microbiológica.

- Evaluar la capacidad de fermentación de microorganismos utilizando agar

manitol salado, la prueba con agar manitol se centrará en la capacidad de
microorganismos para fermentar el manitol, un azúcar específico presente en
el medio de cultivo. Se observarán cambios en el medio, como la acidificación
y cambios en el color, con el objetivo de diferenciar entre organismos
fermentadores y no fermentadores. Este objetivo específico busca
caracterizar las respuestas bioquímicas de los microorganismos ante el
manitol, permitiendo una identificación más precisa y detallada de las cepas
estudiadas.
PRUEBAS QUIMICAS
Las pruebas químicas en microbiología son técnicas utilizadas para identificar y
caracterizar microorganismos, como bacterias, hongos y virus, basándose en las
respuestas de los microorganismos a ciertos reactivos químicos específicos. Estas
pruebas son fundamentales para entender la composición bioquímica de los
microorganismos y para diferenciar entre diferentes especies y cepas. Algunos
ejemplos de estas pruebas son las siguientes:
 Pruebas de fermentación: Se utilizan para determinar la capacidad de un
microorganismo para fermentar ciertos sustratos, como azúcares. La
fermentación puede producir productos ácidos o gases, y la observación de
estos cambios puede ayudar en la identificación de la bacteria.
 Pruebas de oxidasa: Estas pruebas detectan la presencia de la enzima
oxidasa, que está presente en ciertos tipos de bacterias. La reacción se basa
en la capacidad del microorganismo para transferir electrones a la enzima
oxidasa.
 Pruebas de catalasa: La catalasa es una enzima que descompone el
peróxido de hidrógeno en agua y oxígeno. La presencia de catalasa es útil
para diferenciar entre diferentes tipos de bacterias
 Pruebas de coagulasa: La coagulasa es una enzima producida por algunas
cepas de bacterias, como Staphylococcus aureus. La prueba de coagulasa
se utiliza para distinguir entre diferentes tipos de estafilococos
 Pruebas de citrato: Se utilizan para determinar la capacidad de un
organismo para utilizar el citrato como única fuente de carbono y energía.
 Pruebas de ureasa: Se emplean para evaluar la capacidad de un
microorganismo para descomponer la urea, un producto de desecho del
metabolismo de las proteínas.
Estas pruebas proporcionan información valiosa sobre las características
metabólicas y bioquímicas de los microorganismos, lo que es esencial para la
identificación precisa entre especies y cepas microbianas.
PRUEBAS DE LA CATALASA
¿En qué consiste la prueba de la catalasa?
La prueba de la catalasa es una técnica utilizada en microbiología para determinar
la presencia de la enzima catalasa en un microorganismo. La catalasa es una
enzima que cataliza la descomposición del peróxido de hidrógeno (H2O2) en agua
(H2O) y oxígeno (O2).
la enzima catalasa que se encuentra en la mayoría de las bacterias aerobias y
anaerobias facultativas que contienen el
citocromo oxidasa. La principal excepción
son los estreptococos (Streptococcus).
Originariamente, esta prueba era utilizada
para diferenciar entre los siguientes géneros:
Streptococcus (catalasa -) de Micrococcus
(catalasa +) y/o Staphylococcus (catalasa+).
Bacillus (+) de Clostridium (-). Lysteria
monocytogenes (+) y/o Corynebacterium (+,
con las excepciones de las especies C.
pyogenes y C. haemolyticum, ambas -) de
Erysipelothrix (-)
¿Cómo se realiza?
Preparación del Material de Trabajo:
- Se cultiva el microorganismo de interés en un medio de cultivo adecuado
hasta obtener una colonia visible.
Transferencia de la colonia al medio de prueba:
- Se toma una pequeña cantidad de la colonia con un asa de inoculación y se
transfiere a una superficie limpia.
- Se añade una pequeña cantidad de peróxido de hidrógeno (H2O2)
directamente sobre la colonia o se mezcla con el microorganismo en un
portaobjetos.
Observación de la Formación de Burbujas:
- Si la enzima catalasa está presente en el microorganismo, se observará la
liberación de burbujas de oxígeno, indicando la descomposición del peróxido
de hidrógeno.
- La velocidad y cantidad de burbujas formadas pueden variar según la
cantidad y actividad de la enzima en el microorganismo.
Interpretación de los Resultados:
- La presencia de burbujas de oxígeno sugiere que el microorganismo produce
catalasa y puede descomponer el peróxido de hidrógeno.
- La ausencia de burbujas indica la falta de actividad catalasa en el
microorganismo.

PRUEBAS DE FERMENTACIÓN DE MANITOL SALADO

¿En qué consiste la prueba de la fermentación de agar manitol salado?
La prueba de la capacidad de fermentación de microorganismos utilizando agar
manitol salado. Esta prueba específica se utiliza comúnmente en microbiología para
distinguir entre microorganismos que pueden fermentar manitol y aquellos que no,
al tiempo que proporciona un entorno selectivo basado en la tolerancia a la sal.
El agar manitol salado contiene manitol como fuente de carbohidratos, rojo de fenol
como indicador de pH y una alta concentración de sal (generalmente cloruro de
sodio o NaCl). Procedimiento general de la prueba:
Inoculación en el Agar Manitol Salado:
- Se siembra el microorganismo en cuestión en el agar manitol salado
utilizando técnicas de estría o sembrado en placa.
Incubación:
- Las placas se incuban a una temperatura adecuada para el crecimiento del
microorganismo durante un periodo determinado.
Observación de Cambios en el Medio:
- Después de la incubación, se observa la placa en busca de cambios en el
color del medio.
- Si el microorganismo fermenta el manitol, se produce ácido como producto
de la fermentación, acidificando el medio y cambiando el indicador de pH a
un color amarillo.
Interpretación de los Resultados:
- La presencia de un cambio de color a amarillo
indica que el microorganismo ha fermentado el
manitol y puede tolerar la alta concentración de
sal en el medio. (+)
- La falta de cambio de color sugiere que el
microorganismo no ha fermentado el manitol o no
ha tolerado el ambiente salino. (-)
PRACTICA REALIZADA EN LABORATORIO DE LA PRUEBA DE CATALASA

Paso 1: verificación de materiales

Limpiar el área de trabajo y asegurase de tener todos los materiales necesarios.
Lavarse las manos y utilizar una bata de laboratorio para evitar la contaminación.
- Asa bacteriológica
- Agua oxigenada (peróxido de hidrógeno)
- Placa Petri con el Medio de cultivo Agar manitol
salado y el microorganismo Staphylococcus aureus
- Lamina portaobjetos
- Pipeta
- Mechero

Paso 2: colocar materiales en cabina de flujo laminar, una vez adentro colocar
una gota de agua oxigenada en la lámina porta objetos.
Se coloca una gota con ayuda de la pipeta
Paso 3: Esterilización del asa bacteriológica
Después de colocar la gota se debe esterilizar el asa poniéndola en el fuego, dejar
que se enfríe para tomar una muestra del microorganismo del agar

Paso 4: Transferencia de la colonia al medio de prueba

Abrir la tapa de la placa Petri que tiene al microorganismo Staphylococcus aureus,
y con el asa ya esterilizada y enfriada tomar una muestra del microrganismo
Paso 5: Mezcla del microrganismo con la gota de agua oxigenada
Se coloca el asa bacteriológica que tiene el microorganismo con la gota que está en
la lámina porta objetos y se mezcla.

Paso 6: Interpretación de resultados

En este caso nos salió que es positivo ya que la enzima catalasa está presente en
el microorganismo, se observará la liberación de burbujas de oxígeno, indicando la
descomposición del peróxido de hidrógeno y que (+). Terminado el proceso se
esteriliza el asa bacteriológica.
PRACTICA REALIZADA EN LABORATORIO DE PRUEBA DE FERMENTACIÓN
DE MANITOL SALADO
Paso 1: verificación de materiales
Limpiar el área de trabajo y asegurase de tener todos los materiales necesarios.
Lavarse las manos y utilizar una bata de laboratorio para evitar la contaminación.
- Asa bacteriológica
- Placa Petri con el Medio de cultivo Agar manitol salado
- Placa Petri con el Medio de cultivo Agar manitol salado
y el microorganismo Staphylococcus aureus
- Placa Petri con el Medio de cultivo MacConkey que tenga
el microorganismo E. coli
- Mechero

Paso 2: Llevar los materiales a cabina de flujo laminar luego dividir placa Petri
con plumón por la parte de atrás
Esto se hace en el medio de cultivo que esta esterilizado sin ningún microrganismo,
para ver en qué lado sembraremos E. COLI y en quelado se sembrará
STAPHYLOCOCCUS AUREUS.
Paso 3: Preparar y esterilizar el asa bacteriológica
Se Pasa el extremo del asa bacteriológica por la llama del mechero Bunsen hasta
que se ponga al rojo vivo. Esto asegura que el asa esté estéril y lista para ser
utilizada.

Paso 4: Transferencia de la colonia al medio estéril

Con el asa bacteriológica se toma una muestra una colonia de E. coli y se pasa al
medio de cultivo estéril en su lado previamente marcado, se hace a través de
estrías, terminado el proceso de transferencia volver a esterilizar el asa
bacteriológica.
Paso 4.1: Transferencia de la colonia al medio estéril con el siguiente
microorganismo
Con el asa bacteriológica se toma una muestra una colonia de Staphylococcus
aureus, y se pasa al medio de cultivo estéril en la parte que sobra para ese
microorganismo igual que el paso anterior se hace con técnica de estría.

Paso 5: Incubación
Colocar las placas Petri en una incubadora a la temperatura adecuada para el
crecimiento de los microorganismos. La incubación permite que los
microorganismos crezcan y formen colonias separadas que pueden ser analizadas
posteriormente. (de 18 a 24 horas a una temperatura de 37°C (98.6°F).
Paso 6: Interpretación de los Resultados
La presencia de un cambio de color a amarillo indica que el microorganismo ha
fermentado el manitol y puede tolerar la alta concentración de sal en el medio. (+)
La falta de cambio de color sugiere que el microorganismo no ha fermentado el
manitol o no ha tolerado el ambiente salino. (-)
AMARILLO: STAPHYLOCOCCUS AUREUS (+)
ROJO: E. COLI (-)
CONCLUSIONES

- En resumen, el objetivo general de este informe es realizar una exploración

completa y detallada de las pruebas químicas empleadas en microbiología.
El propósito principal de esta exploración es comprender la importancia y
aplicación de estas pruebas en el proceso de identificación y caracterización
de microorganismos. Este enfoque busca proporcionar una comprensión
más profunda de las herramientas y técnicas químicas utilizadas en el ámbito
microbiológico, con el fin de mejorar la capacidad de discernir y clasificar
microorganismos de manera más precisa.
- En conclusión, el primer objetivo específico busca analizar la presencia de la
enzima catalasa en diversos microorganismos a través de la prueba de la
catalasa. La investigación se centra en la capacidad de diferentes
microorganismos para producir esta enzima, evaluando las reacciones de
descomposición del peróxido de hidrógeno y midiendo la liberación de
oxígeno como indicador de la actividad catalasa. La finalidad de este objetivo
es comprender la diversidad en la producción de esta enzima y sus
implicaciones en el proceso de identificación microbiológica. En última
instancia, se busca obtener conocimientos más profundos sobre las
características bioquímicas de los microorganismos estudiados.
- El segundo objetivo específico busca evaluar la capacidad de fermentación
de microorganismos mediante el uso de agar manitol salado se centra en la
capacidad de estos microorganismos para fermentar el manitol, un azúcar
específico presente en el medio de cultivo. La prueba se realiza observando
cambios en el medio, como acidificación y alteraciones en el color, con el
propósito de diferenciar entre organismos fermentadores y no fermentadores.
La finalidad de este objetivo es caracterizar las respuestas bioquímicas de
los microorganismos frente al manitol, lo que facilita una identificación más
precisa y detallada de las cepas estudiadas. En última instancia, esta
evaluación contribuye a comprender mejor las propiedades metabólicas de
los microorganismos y a mejorar la capacidad de distinguir entre diferentes
cepas en el contexto microbiológico.
ANEXOS
REFERENCIAS

1 ¿Qué es la prueba de fermentación de manitol? [Internet]. 411answers.com. [cited

. 2023 Nov 19]. Available from: https://es.411answers.com/a/que-es-la-prueba-de-
fermentacion-de-manitol.html
2 Clínica M, Cercenado E, Cantón R. Seimc.org. [cited 2023 Nov 19]. Available
. from:
https://www.seimc.org/contenidos/documentoscientificos/procedimientosmicrobi
ologia/seimc-procedimientomicrobiologia37.pdf
3. Lisa NicholsButte College. 6.4: Pruebas Químicas [Internet]. LibreTexts Español.
Libretexts; 2022 [cited 2023 Nov 19]. Available from:
https://espanol.libretexts.org/Quimica/Qu%C3%ADmica_Org%C3%A1nica/T%C3
%A9cnicas_de_Laboratorio_de_Qu%C3%ADmica_Org%C3%A1nica_(Nichols)/06
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4 Metodos Catalasa y Oxidasa [Internet]. Ugr.es. [cited 2023 Nov 19]. Available
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5 Britanialab.com. [cited 2023 Nov 19]. Available from:
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