Está en la página 1de 19

Informe de Anabolismo y Catabolismo

Pruebas Bioquímicas

Objetivo General

Evaluar las propiedades metabólicas de los microorganismos en cuanto sus capacidades


para utilizar diferentes sustratos para derivar de ellos sus macro y micro elementos
constitucionales, así como la energía necesaria para el desarrollo de todas sus actividades
de transporte, movimiento, transformación, crecimiento y reproducción.

OBJETIVOS PARTICULARES

● Determinar el tipo de sustratos que un microorganismo es capaz de catabolizar


(degradar) mediante la detección de productos derivados su degradación.

● Evaluar la formación de metabolitos específicos

● Analizar las habilidades metabólicas del microorganismo en medios de cultivo


mínimos y enriquecidos

METODOLOGÍA

La práctica inicia con la asignación de un microorganismo a cada grupo, el cuál debe ser
identificado a partir de una serie de pruebas bioquímicas y comparadas con la literatura. A
nuestro grupo le correspondió el microorganismo No. 5, al cual se le realiza una
caracterización macroscópica, que de acuerdo a (Rojas, 2011) “la morfología de las colonias
es un parámetro importante en el proceso de identificación, siendo estas características, tales
como: forma, borde, elevación, superficie, consistencia bacteriana, aspecto, pigmentación,
etc.” comunes entre cada género. [1]

Tabla N.1 Modelos a identificar por pruebas bioquímicas.

Bacteria Morfología

Micrococcus luteus Cocos gram +

Streptoccocus faecalis Streptoccocus gram +

Staphylococcus aureus Staphylococcus gram +

Bacillus subtilis Bacillus gram +

Escherichia coli Bacillus gram -


Pseudomonas aeruginosa Bacillus gram -

Klebsiella pneumoniae Bacillus gram -

Salmonella enteritidis Bacillus gram -

Serratia marcescens Bacillus gram -

Proteus vulgaris bacillus gram -

CATABOLISMO – Asimilación de Sustratos

Prueba catalasa: Se esterilizó el asa microbiológica haciendo uso del mechero, y mediante
la correcta aplicación de la técnica aséptica se tomó una muestra del microorganismo y se
añadió a una solución de peróxido de hidrógeno, con el propósito de determinar la formación
de O2 identificada por la presencia de burbujas.

La prueba del caldo con Urea y la fermentación con rojo fenol se realizaron con un asa
bacteriológica redonda, con la cual se tomó un inóculo de la colonia, que posteriormente se
suspendió y dispersó en el caldo haciendo girar el asa.

Las pruebas de MR-VP, se utilizó el asa microbiológica redonda para tomar una muestra de
la colonia y se suspendió y dispersó en el caldo. Después de 48 horas, se fraccionó en dos
tubos la solución obtenida; a uno de los tubos se le añadió solución de rojo de metilo y al otro,
reactivo de Voges Proskauer y KOH al 40%.

La inoculación del agar TSI, Citrato y LIA se realizó tomando una muestra de la colonia
con el asa recta, luego mediante picadura recta se aplicó en el centro de la columna y se
realizaron estrías sobre la cuña.

En la prueba de SIM fue utilizada el asa recta para tomar un inóculo de la colonia y se aplicó
mediante picadura recta en el centro del agar, luego de 48 horas se le añadieron 5 gotas del
reactivo de Kovacks.

Prueba de Gelatinasa, se tomó con un asa recta un inóculo de la colonia y se aplicó mediante
picadura recta en el centro del agar.

Prueba de Nitratos, se tomó un inóculo de la colonia y con el asa redonda se dispersó en el


caldo, posterior a la incubación se añadieron 5 gotas de ácido sulfanílico y α-naftilamina, por
último, se añadió zinc en polvo y se evalúo la reacción. Todas las inoculaciones se incubaron
a 37° durante 48 horas.

CATABOLISMO - Producción De Exoenzimas


En 3 tipos de agar diferentes (Agar almidón, Agar caseína, Agar DNAasa) se realizó bajo el
método propuesto en la guía en el cual constaba de hacer inoculaciones en forma lineal desde
los extremos hacia el interior del agar, teniendo delimitado los sitios donde estos se inocularon
para que no tengan la posibilidad de que dos o más especies interaccionan e intervengan
generando un resultado no deseado, todo esto con la finalidad de observar si estas presentan
características particulares.

ANABOLISMO – Capacidad de Formación de Biomasa

Pasando ahora a la observación de los resultados experimentales sobre el anabolismo (tema


capacidad de formación de biomasa), se realizó para 2 especies bacterianas (Escherichia coli
y Lactobacillus plantarum), dichas especies fueron inoculadas conjuntamente de manera
lineal guiándose sobre dos líneas dibujadas en la tapa, se realizaron en 4 tipos de agar
diferentes (Agar todo propósito tween, Agar mineral M1, Agar mineral M2 y Agar mineral M3)
con la finalidad de evidenciar si hay o no un crecimiento de colonias usando solamente los
componentes presentes en cada tipo agar; se toma como referencia el crecimiento dado en
el Agar todo propósito tween para así determinar si el crecimiento es abundante, moderado
o débil.

Resultados

Tabla N. 2 Caracterización macroscópica y microscópica del bacterio No.5. por la técnica


(tinción de Gram- microscopia de campo claro 100x).

de catalasa siendo una enzima que poseen la mayoría de las bacterias aerobias, en el cual
se observa que se descompone el peróxido de hidrógeno en agua y oxígeno, por ende, se
aprecia el desprendimiento de burbujas procedentes del oxígeno indica que la prueba es
positiva.

Asimilación de carbohidratos con Caldo Base ROJO DE FENOL


Caldo Base ROJO DE FENOL + CARBOHIDRATO (Glucosa, Fructosa, Manitol,
Galactosa, Sacarosa, Lactosa, Maltosa)
En la siguiente prueba se emplearon los siguientes azúcares y lo que se pretende es, a través
de estos, poder identificar las especies bacterianas que son capaces (o no) de degradar cada
uno de ellos: Glucosa, Fructosa, Manitol, Galactosa, Sacarosa, Lactosa y la Maltosa, lo cual
es posible de caracterizar al observar el viraje de la coloración de rojo a amarillo.

Los compuestos de carbono (carbohidratos o polialcoholes) deben ser incorporados, algunos


requieren de ser degradados en monómeros y transportados a la célula para posteriormente
en condiciones anaerobias ser metabolizados por la vía fermentativa. La fermentación
(degradación) de un compuesto orgánico se observa por la acidez en el medio de cultivo
(coloración amarilla) y la formación de gas capturado en la campana de fermentación.

El medio cultivo base cuenta con rojo de fenol siendo utilizado como indicador de pH, el cual
vira de pH inferiores a 6,8, el cultivo vira a amarillo (se acidifica el medio), a pH superiores a
8 el cultivo se torna de color violeta.

De acuerdo a las tablas N. 3 y 4 no hay un cambio de color notable de rojo a amarillo (medio
ácido) permitiendo establecer que el microorganismo No.5 no emplea los carbohidratos como
fuente de carbono (no fermentativa), si no que usa otra fuente, como la del citrato (revisar
prueba de Simmons). [2]

Glucosa con campana de Durham (Fermentación)

La Glucosa es usada como fuente de carbono por parte de la mayoría de las bacterias de
interés farmacéutico, como parte importante de su metabolismo. En esta prueba se determinó
si la bacteria usa la glucosa produciendo ácido y/o gas a partir de dicho carbohidrato. Ya que,
en la degradación de glucosa, el microorganismo puede generar desprendimiento de burbujas
de CO2 (formación de gas) dentro de la campana de dispuesta, lo cual sirve para determinar
si el microorganismo es capaz de fermentar la glucosa.

En este caso, se observó que el microorganismo no es capaz de asimilar ninguno de los


carbohidratos, sin embargo, la galactosa dio una prueba no concluyente, observándose un
ligero cambio en su coloración (rojo a naranja), pero según lo establecido por la literatura se
puede mencionar que, si una bacteria no es capaz de fermentar la glucosa, mucho menos
podrá fermentar otros carbohidratos. [3]

Agar TSI en cuña

En la prueba de Triple Azúcar Hierro Agar se determina si un microorganismo fermenta u


oxida la glucosa, sacarosa o lactosa y forma sulfato de hierro. Este agar tiene 10 g/L de
lactosa, 10 g/L de sacarosa y 1 g/L de glucosa. El rojo fenol y sulfato ferroso en el agar tienen
como fin ser los indicadores de acidificación y formación de H2S, respectivamente. [4]

El fundamento de la prueba se basa, en que La lactosa, sacarosa y glucosa son los hidratos
de carbono fermentables. El tiosulfato de sodio es el sustrato necesario para la producción
de ácido sulfhídrico, el sulfato de hierro y amonio, es la fuente de iones F3+, los cuales se
combinan con el ácido sulfhídrico y producen sulfuro de hierro, de color negro. Asimismo, se
cuenta con rojo de fenol siendo el indicador de pH, y el cloruro de sodio presente en el medio
es para mantener el balance osmótico. Por fermentación de los azúcares, se producen ácidos,
que se detectan por medio del indicador rojo de fenol, virando al color amarillo en medio ácido.
El tiosulfato de sodio Na2S2O3 se reduce a sulfuro de hidrógeno H₂S que reacciona luego con
una sal de hierro proporcionando el típico sulfuro de hierro de color negro. [5]

De la lectura de los resultados TSI, se puede mencionar que el microorganismo no es capaz


de fermentar la glucosa, mucho menos podrá fermentar otros carbohidratos. Por tanto, no se
observa la formación de ácidos (coloración amarilla), pero existe formación de aminas en el
bisel por la utilización de las peptonas. En este caso todo el medio vira a un rojo, dando como
resultado K/K significa medio alcalino / fondo alcalino o neutro. Esto permite determinar que
el microorganismo no pertenece a la familia Enterobacteriaceae, es un bacilo gram - no
fermentador tal como Pseudomonas, Alcalígenes, Achromobacter, Burkholderia, entre otros
géneros.

Agar CITRATO según Simmons en cuña

Para sobrevivir algunas bacterias implementan el citrato como fuente de carbono, debido a
su incapacidad de producir ácido láctico a partir de la glucosa. Estas metabolizan este citrato
de forma rápida por una vía alterna a la tradicional, utilizando el ciclo del ácido tricarboxílico
o el ciclo de fermentación del citrato. Con ayuda de la enzima (citrato oxalacetato-liasa)
transforman el citrato en oxalacetato y piruvato (Figura 1) que posteriormente da origen a
ácidos orgánicos (en medio de un pH alcalino por la utilización de la fuente de nitrógeno), que
a su vez son usados como fuente de carbono generando carbonatos y bicarbonatos,
alcalinizando aún más el medio. (Mac Faddi 2015). Su interpretación experimental se da para
una prueba positiva (+) cuando hay un cambio de color de verde a azul (indicando presencia
de productos alcalinos) y una prueba negativa (-) si se mantiene con el color original (verde)

Figura 1. Degradación del citrato por sistema enzimático (oxalacetato-liasa)

Para el microorganismo No.5 la prueba es positiva, hay un cambio de color de verde a azul,
como se indica en la Tabla N.3 y esto concuerda con las pruebas de “asimilación de
carbohidratos y MR-VP” ya que el microorganismo en cuestión no puede degradar la glucosa
por vías fermentativas anaerobias. Por otro lado, de acuerdo al anexo 2 el bacterio E. coli
(Escherichia coli) no usa el nitrato como fuente de carbono, si no la glucosa por la vía de
fermentación ácida mixta, infiriendo que la muestra No.5 no es E. Coli. Además, el
microorganismo No.5 es propenso a crecer y desarrollarse mucho mejor en medios alcalinos,
debido a su generación de carbonatos y bicarbonatos al medio.

Caldo MR – VP

El fundamento de la prueba de Rojo de metilo (MR) se basa en la producción de ácido


pirúvico, y de éste, una compleja mezcla de ácidos, principalmente ácido (Láctico, acético,
fórmico, succínico) como así también etanol (a partir del Acetil CoA) y cantidades iguales de
CO2 y H2 (a partir del formiato) debido a la degradación de la glucosa por vía fermentativa
mixta (Figura 2). Dicha prueba se basa en el uso de un indicador de pH, el rango de viraje del
rojo de metilo se encuentra entre 6 (amarillo) y 4,4 (rojo). Algunas de las bacterias que usan
esta vía metabólica fermentativa anaerobia son (Shigellia, E. Coli, Salmonella). (Rojas, 2011)
[6]

La prueba de Voges-Proskawer (VP) se basa en la detección de acetil metil carbinol


(acetoína), un producto final neutro derivado del metabolismo catabólico de la glucosa llevado
a cabo por determinadas bacterias (Enterobacter, Serratia, Bacillus) (Rojas, 2011). [7] Se
evalúa como positiva, viendo un cambio de color de amarillo a rosa.

Para el microorganismo evaluado (No. 5) la prueba MR-VP es negativa, no hay un cambio de


color en el medio (no hay descenso de pH por debajo de 4,4), indicando que no hay
producción de ácido (Láctico, acético, fórmico, succínico) como también no hay producción
de acetoína después de haber transcurrido 15 minutos (Tabla N. 3).
De acuerdo al anexo 2, RM (+) es para bacterias como (Shigellia, E. Coli, Salmonella) y VP
(+) para bacterias (Klebsiella pneumoniae, Serratia, Bacillus) permitiendo deducir que el
microorganismo N. 5 no hace parte de estas bacterias.

Figura 2. Degradación de la glucosa por vía fermentativa mixta

Figura 3. Fermentación butanodiólica


Agar SIM

Este medio permite la ejecución de tres importantes pruebas: La producción de sulfuro de


hidrógeno (H2S), la formación de indol y la motilidad, de allí proviene el acrónimo SIM.
La formación de indol se lleva a cabo a partir de la hidrólisis del triptófano (aminoácido) con
ayuda de una enzima (tiptofanasa). El indol se puede detectar en un medio apropiado con el
agregado del (reactivo de Kovacs), el cual forma un producto de condensación roja, esta
condensación se ve reflejada con la formación de un anillo rojo en la superficie del medio
(Rojas, 2011) [8]. La formación de indol, solo es producido por aquellos organismos capaces
de fermentar azúcares. La presencia de un precipitado negro es prueba positiva para la
producción de sulfuro ferroso proveniente de la reacción entre el sulfuro de hidrógeno (H2S)
con las sales de hierro presentes en el medio, si el medio se mantiene igual (no hay
precipitación de color negra) es prueba negativa. Para la motilidad o movilidad (MOV) la
prueba es positiva cuando se observe una turbidez, tanto en el inóculo inicial, como alrededor
de este. En tanto que, las bacterias no móviles solo se desarrollan en el trayecto del inóculo
inicial.

De acuerdo al microorganismo N.5, da negativo para indol y esto es consecuente respecto a


las pruebas de “ Agar TSI en cuña, RM y asimilación de carbohidratos” el microorganismo en
cuestión no degrada azúcares (no fermentativo), su vía metabólica para asimilación de
carbono es a partir de otras fuentes, como por ejemplo la del citrato (prueba de Simmons + )
la ausencia de un precipitado negro (sulfato ferroso) prueba negativa, corroboran que el
bacterio no produce sulfuro de hidrógeno, como se refleja en las otras pruebas como TSI Y
LIA. Respecto a su movilidad, la prueba es positiva, estableciendo que el microorganismo
puede presentar uno o varios flagelos que le permitan su movilidad y abarcar más sustrato.

Ureasa
Esta prueba permite determinar la capacidad de un microorganismo de hidrolizar la urea en
dos moléculas de amoniaco, por la acción de la enzima ureasa, con la resultante de aumento
del pH del medio (alcalinidad) Figura 4.

Figura 4. Mecanismo de hidrolisis de la urea por ureasa

Su reacción es positiva, si hay presencia de una coloración rojiza o fucsia, lo cual quiere decir
que hubo una alcalinización e hidrólisis de la urea.

De acuerdo a la tabla No.3 el microorganismo No.5, da negativo, no hay un cambio de color


significativo, el medio permanece al color original (amarillo-naranja) por consiguiente no es
capaza de hidrolizar urea, determinando que carece de la enzima ureasa. Se tuvo en cuenta
que hay degradadores tardíos como (Klebsiella pneumoniae), quienes producen una
coloración + (tardía) parcial del medio. Anexo 5

Agar Gelatina Nutritiva


El fundamento de esta reacción es la detección enzimática de la gelatinasa, una Exoenzimas
que hidroliza la gelatina, lo cual afecta la gelificación del medio. Para la muestra evaluada se
obtuvo como resultado positivo, es decir la bacteria es capaz de producir enzimas
proteolíticas se descarta que la bacteria se Ps.putida o Ps. Stutzeri. [9]

Prueba LIA

Esta prueba permite diferenciar los microorganismos que producen descarboxilación o


desaminación de la lisina, se puede detectar además la producción de H2S. Es muy utilizado
en las técnicas de búsqueda de Salmonella spp., principalmente para descartar otras
bacterias que forman colonias similares en los medios diferenciales utilizados durante el
aislamiento selectivo.
Durante las primeras etapas de incubación el fondo del medio virará el indicador del pH ácido
(amarillo), por la fermentación de la glucosa, posteriormente, si el aminoácido es
descarboxilado, se forman aminas que provocan un retorno al color original del medio o hacia
un viraje al básico (color violeta).
En la desaminación se produce un ácido carboxílico y NH3, que se visualiza en la superficie
por la aparición de un color rojo intenso. La producción de H2S a partir del tiosulfato, se
visualiza por la producción de sulfato ferroso de color negro. (Reynoso 2015) [10]

El viraje del medio (LIA) de color amarillo a violeta da como prueba positiva para el
microorganismo No.5, favorece la actividad enzimática descarboxilasa, permitiendo la
metabolización de la lisina a cadaverina (compuesto alcalino) así elevando el pH (igual o
mayor a 6.8) del medio de cultivo y tornándolo color violeta. Al no haber presencia de un
precipitado negro, da como prueba negativa para la producción de ácido sulfhídrico,
permitiendo establecer que no se cuenta con la enzima tiosulfato reductasa y no hay
obtención de sulfato de hierro.

Tabla No.6 Interpretación de Agar TSI y LIA

Reacciones en Reacciones en LIA Identificación posible


TSI

K/A o K/A K/K o K/NC Especie de Salmonella


H2S + H2S + Especie de Edwardsiella

K/A K/K o K/NC Especies de salmonella (raro)


H2S + H2S +

K/A K/K o K/NC Especies de Salmonella (raro)

K/A K/K o K/NC Salmonella typhi (raro)


H2S +

K/A K/K o K/NC Especie de Salmonella (raro)

K/A H/A Salmonella paratyphi A


H2S + (habitualmente H2S - )

K/A K/A o A/A Escherichia coli


Salmonella paratyphi A
Shigella flexneri 6 (infrecuente)
Especies de Aeromonas (oxidasa)

K/A K/K o K/NC Escherichia coli


Shigelle grupos A-D
Especies de Yersinia

A/A K/K o K/NC Especie de salmonella (raro)


H2S + H2S+

A/A K/A o A/A Escherichia coli (raro)

A/A K/A o A/A Escherichia coli


especies de Yersinia
Especies de Aeromonas (oxidasa +)
Vibrio cholerae (Raro, oxidasa
positivo)

A/A K/K o K/NC Especies de vibrio (oxidasa +)

K/K Alcalino/Alcalino; K/A Alcalino/ Acido; K/A H2S Alcalino/ Acido /H2A; A/A
H2S (+) Acido/Acido. [11]

Por último, según el análisis de las diferentes pruebas presentadas se puede mencionar que
el microorganismo de la muestra N°. 5 pertenece al Filo: Proteobacteria, Clase: Gamma
Proteobacteria, Orden: Pseudomonadales, Familia: Pseudomonadaceae, Género:
Pseudomonas, Especie: P. aeruginosa.

Figura 5. Electromicrografía que muestra la flagelación polar que presenta P. aeruginosa.

Según lo observado experimentalmente, se encuentra que solo el Bacillus subtilis dio un


resultado positivo para la amilasa, lo cual es posible de evidenciar con la formación de un
halo alrededor del cultivo, siendo el único capaz de hidrolizar los enlaces glucosídicos del
almidón de las bacterias presentes en el medio. [22]

Según estudios, esta especie, entre otras tantas es empleada para la producción de dicha
enzima y otras más como pectinasas, esterasas y proteasas, teniendo como condiciones
teóricamente óptimas: 40 °C para temperatura de crecimiento, pH de 5.0, e inóculo y almidón
al 7 y 2% en %p/V respectivamente, resultando un importante insumo en la industria
cervecera, textil, papelera y farmacéutica, entre otras. [24]
a) Prueba de caseína

En el siguiente medio, se evaluó la formación de la Caseinasa, la cual es una proteasa que


degrada la caseína, proteína presente en la leche, que le confiere el color blanco a esta,
cuando esta es hidrolizada pierde la coloración.
Para revelar adecuadamente los resultados de la prueba es necesita agregar ácido Acético
al 10% (p/v), el cual forma un precipitado con la caseína, esta cuando es hidrolizada presenta
la formación de un halo alrededor de colonia.
Con respecto a los resultados obtenidos en esta prueba, no fueron determinantes ya que se
contaminó el medio de cultivo, no se observaban claramente la transparencia, sin embargo,
fue ligeramente posible visualizar la formación de un suave halo en la cepa de Pseudomonas
aeruginosa, Bacillus Subtilis y Serratia marcescens, lo cual representa una prueba positiva.

PRUEBA DE DNAasa

En la siguiente prueba, se busca determinar microorganismos capaces de secretar


desoxirribonucleasa, con el fin de hidrolizar el ADN (altamente polimerizado) presente en el
medio cultivo.
Para evaluar la prueba fue necesario el uso de Ácido clorhídrico 1N como revelador, donde
se formará un halo en las bacterias que son capaces de hidrólisis dicha sustancia, mientras
que el ácido desoxirribonucleico polimerizado, precipita y torna opacidad al medio de cultivo.
En este caso se observa resultado positivo para Bacillus subtilis, Staphylococcus aureus y
Serratia marcescens para degradar el ADN y producir desoxirribonucleasa, ya que presentan
un halo transparente alrededor de sus colonias, lo cual se comprueba según la literatura. [25]

Seguidamente, también se hace evidente para el caso de E. Coli el hecho de que la misma
arrojase un resultado negativo para la síntesis de las tres Exoenzimas evaluadas, lo cual se
explica teniendo presente el que dicho microorganismo no posee las rutas metabólicas para
tal fin, produciendo únicamente nucleasas bajo reproducción de cepas por ADN recombinante
y que estén en la capacidad de llevar a cabo dicho proceso, de donde cabe destacar su
aprovechamiento para la producción de proteínas recombinantes con finalidad terapéutica.
[26]

Discusión de Resultados Anabolismo - Capacidad de formar biomasa

Por último, se evaluó el cultivo de Escherichia coli y L. acidophylus en los agares minerales
M1, M2 y M3 y el agar todo propósito tween, con el fin de caracterizar los nutrientes que
garantizan el crecimiento bacteriano. A continuación, se menciona el fundamento de la
técnica;
Primero, los diferentes agares minerales M1, M2 y M3 poseen en común varios componentes
como se observa en la tabla, entre ellos las sales de fosfato, la glucosa y el agar, además de
que estas están presentes en igual proporción. De igual manera poseen el mismo pH.

Segundo, por otro lado, los medios de cultivo se diferencian en su composición por sales de
sulfato y sales de cloruro, como:

-Agar Mineral M1: El agar posee sales de sulfato, pero no de cloruro. En el cual se observa
el crecimiento de Escherichia coli (a) y ausencia del Lactobacillus plantarum (b)

Agar Mineral M2: El agar no cuenta ni con sales de sulfato ni sales de cloruro. Asimismo,
presenta iones de Mg, lo cual es un elemento relevante en la duplicación y el crecimiento
bacteriano. En este caso, no se ve ningún crecimiento en el medio de cultivo.

Agar Mineral M3: este medio de cultivo cuenta con sales de cloruro de pero no de sulfato. Y
en la parte experimental, es posible evidenciar el crecimiento de Escherichia coli (a) pero no
Lactobacillus plantarum (b) Esto puede esperarse ya que los cloruros son más tóxicos que
los sulfatos.

Para el caso del Agar M1 y M2, estos presenta como componente fundamental (NH 4 ) 2 SO
4 en concentración de 1.0 g/L y que resulta ausente para el caso del Agar M3, así mismo,
este último (M3) tiene como componente NH 4 Cl en concentración de 0.1 g/L, estando
ausente en los Agar M1 y M2; lo anterior permite afirmar que dichos componentes son
fundamentales para la fijación de nitrógeno por parte de E. Coli de tal manera que, la
concentración del primer compuesto en los Agar M1 y M2 resultó óptima para la especie en
cuestión, mientras que para el caso del Agar M3, si bien el compuesto presente permite la
fijación de nitrógeno y desarrollo vital del microorganismo, la concentración resulta baja para
los requerimientos de la misma según lo reportado en la literatura, razón por la cual se vio
limitado su proliferación.

Tabla No. 7 Resultados anabolismo.

Crecimiento de microorganismos en el medio de Cultivo

Microorganismo Agar TODO


PROPÓSIT Agar Mineral Agar Mineral Agar Mineral
O TWEEN M1 M2 M3

Escherichia coli Abundante Abundante Abundante Abundante

Abundante No se observa No se observa No se observa


Lactobacillus crecimiento crecimiento crecimiento
acidophylus

De los anteriores agares minerales, se puede mencionar que el L. acidophylus no fue capaz
de formar biomasa como resultado del anabolismo en ninguno de estos tres agares. En
cambio, la E. coli se presentó en los diferentes medios, si presentar un cambio significativo
en su crecimiento.
Por último, con el agar todo propósito tween, el cual es un medio de cultivo enriquecido, ya
que son medios complejos con nutrientes estimuladores del crecimiento a concentraciones
conocidas, los cuales favorecen el crecimiento de microorganismos. se observa el
crecimiento de los microorganismos. Se puede mencionar que el medio es apropiado para el
cultivo microbiano, en especial de bacterias ácido lácticas, como es el caso del Lactobacillus
plantarum. [27], [28]

Teniendo en cuenta los resultados anteriores, se puede mencionar que:


La E. coli no presenta exigencias nutricionales y logra formar biomasa en todos los agares,
lo cual es una característica de patogenicidad. La cual resulta ser una bacteria de tipo
anaerobia facultativa (diferencia significativamente limitante para el caso de L. Acidophylus),
presentó un crecimiento considerable en los medios de Agar Mineral, viéndose disminuido
solamente para el caso del Agar M3; según lo reportado por Reiling, (1984) la composición
nutritivamente favorable para el crecimiento y desarrollo eficientes de E. Coli implica los
siguientes componentes: 2.5 g/L de Glucosa monohidratada, 0.8 g/L de NH 4 Cl, 0.2 g/L de
KH 2 PO 4 , 0.41 g/L de MgSO 4 ·7H 2 O, 0.01 g/L de CaCl 2 , 0.018 g/L de FeSO 4 ·7H 2 O
y pH 6.8, por lo que, al comparar esta información con lo reportado constitutivamente para los
Agar tipo Mineral, se hizo posible determinar los factores que influyeron en el crecimiento
microbiano.

Por otro lado, se evidencia que el L. acidophylus es un microorganismo más selectivo del
medio de cultivo, es decir, requiere de unas exigencias nutricionales, para un adecuado
crecimiento. Según lo reportado en la literatura, Lactobacillus Acidophylus posee un
metabolismo fermentativo y de carácter aerobio, en donde su crecimiento óptimo se da a un
pH de entre 4,5 a 5,8, resultando exigentes en cuanto a aminoácidos, péptidos, nucleótidos,
vitaminas, minerales, ácidos grasos y carbohidratos como constituyentes de su medio de
cultivo. (Axelsson, 2004)

Conclusiones

 La concentración de los nutrientes presentes en el medio de cultivo, determinar el


grado de crecimiento de los microorganismos en función de sus requerimientos
básicos
 Las capacidades metabólicas de un microorganismo en particular pueden ser
empleadas como patrón para su identificación en un medio con condiciones
adecuadas para tal fin

 La caracterización metabólica de un microorganismo puede verse limitada al


producirse un entrecruzamiento o contaminación entre especies, de tal suerte que los
resultados esperados para una prueba en particular pueden variar de presentarse
dicha situación.

Referencias

[1], [6], [7], [8], [20] Rojas, A. (2011) Conceptos y prácticas de microbiología general.
Universidad Nacional de Colombia- sede Palmira.

[2], [3] Gerard J. Tortora, Berdell R. Funke, Christine L. Case. (2007) Introducción a la
microbiología. Ed. Médica Panamericana, Pág 85 - 89; 137-139
https://books.google.com.co/books?id=Nxb3iETuwpIC&pg=PA75&dq=tincion+de+gram&hl=
es-
419&sa=X&ved=0ahUKEwjjhaPd077kAhWGslkKHRCbAtoQ6AEIPDAD#v=onepage&q=tinci
on%20de%20gram&f=false

[4] http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/U3c_PruebasBioquimicas_17461.PDF

[5] https://www.britanialab.com/back/public/upload/productos/upl_5a297d2411990.pdf

[9]https://www.seimc.org/contenidos/documentoscientificos/procedimientosmicrobiologia/sei
mc-procedimientomicrobiologia37.pdf

[10] Reynoso, M. (2015) Manual de microbiología general. Universidad Nacional de Rio –


Argentina.

[11]https://books.google.com.co/books?id=239cauKqSt0C&pg=PA329&dq=LIA+identificacio
n+bacteriana&hl=es-
419&sa=X&ved=0ahUKEwiLy8OcuOPkAhVKRK0KHUJ8CkgQ6wEIPTAD#v=onepage&q=LI
A%20identificacion%20bacteriana&f=false

[12] Rabiza, J. (2006). Temas de bacteriología y virología medica 2° Edición Universidad de


la República | Facultad de Medicina Departamento de Bacteriología y Virología Instituto de
Higiene. Montevideo – Uruguay.

[13] Mac Faddin. (2011) Pruebas Bioquimicas para la identificación de bacterias. Edición 3°
Editorial Pnamericana.

[14] Ref: Bergey´s Manual of Systematic Bacteriology. VOL II Part B. Pág 751, 752

[15] Mac Faddin, J., Rondinone, S., & Giovanniello, O. (2003). Pruebas bioquímicas para la
identificación de bacterias de importancia clínica. Buenos Aires: Médica Panamericana. pp 84

[16] Bergey, D., Garrity, G., & Staley, J. (2001). Bergey's manual of systematic bacteriology.
New York [etc.]: Springer. Figura 20-4

[17], [18], [19] Socorro, G., Avalos, H. & Soto, Yadira, (2014). Microbiología general de
Staphylococcus aureus: Generalidades, patogenicidad y métodos de identificación.
Universidad de la Ciénega del Estado de Michoacán de Ocampo, México.

[21] Staphylococcus Epidermidis Biochemical Test. Recuperado de:


https://microbiologyinfo.com/biochemical-test-identification-staphylococcus-epidermidis/
fecha de consulta 18/05/2019

[22] http://eprints.uanl.mx/102/1/1020066365.PDF

[23] http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/U3c_PruebasBioquimicas_17461.PDF

[24] Pereyra B. Producción de α-amilasa a partir de Bacillus Subtilis. Universidad Autónoma


de Nuevo León. Facultad de Ciencias Biológicas. División de estudios de posgrado.
Monterrey. México. 1987.
[25]http://www.fcn.unp.edu.ar/sitio/microgeneral/wp-content/uploads/2017/02/07-
Metabolismo-Identificacion-y-taxonom%C3%ADa.pdf

[26] A, Ariza S, Vargas F. Vargas L. Mecanismos de virulencia de Escherichia Coli


enteropatógena. Universidad de Santander. Facultad de Ciencias de la Salud. Programa de
Bacteriología y Laboratorio Clínico. Bucaramanga, Santander. Colombia. 2016.

[27]https://www.tdx.cat/bitstream/handle/10803/3857/scs1de6.pdf?sequence=1&isAllowed=y

[28] https://revistas.unal.edu.co/index.php/acta_agronomica/article/viewFile/49156/50232

Chávez, E, Rojas, N, & García, F, (2006). Bacteriología Diagnostica. Facultad de


microbiología- Universidad de Costa Rica.

Anexos
Anexo 1
Anexo 2
Anexo 3
Anexo 4
Anexo 5
Microorganismos utilizados para el control de calidad presencia de ureasa

También podría gustarte