Guía de Laboratorio 3

Aplicación de la Biología molecular ¿Qué es un PCR y para que sirve
Daiwin Ramiro Sibaja Correa
Universidad Manuela Beltrán
Tecnología en
Desarrollo Ambiental
Biología
Jorge Alberto Briceño Vanegas
Bogotá D.C
2023
UNIVERSIDAD MANUELA BELTRÁN
MACROPROCESO DE RECURSOS E INFRAESTRUCTURA ACADÉMICA
FORMATO PARA PRÁCTICAS DE LABORATORIO UMB - VIRTUAL
Fecha: 7 de octubre de 2016 Código: Versión: 1.0
INFORMACIÓN BÁSICA
NOMBRE DE LA PRÁCTICA PRÁCTICA No: 3

Aplicaciones de la biología molecular ¿Qué es
una PCR y para qué sirve?
ASIGNATURA
Biología
TEMA DE LA PRÁCTICA
Replicación del ADN

Técnicas de biología molecular: reacción en cadena de la polimerasa PCR
LABORATORIO Y/O HERRAMIENTA TECNOLÓGICA A UTILIZAR
Laboratorios virtuales (software libre), diseñados por pcr.ico2s
http://virtual-pcr.ico2s.org/pcr/
A QUIEN VA DIRIGIDO
Esta práctica va dirigida a estudiantes que estén cursando la asignatura Biología
CONTENIDO DE LA GUÍA
(Para elaborar por el Docente)
COMPETENCIAS
Identifica los fundamentos teóricos de la genética mendeliana y la biología molecular a través
del reconocimiento de las leyes de Mendel y los procesos de replicación, transcripción y
traducción del ADN, con el fin de reconocer cuales son los mecanismos de la herencia, como se
transmite la información genética y que aplicaciones tienen estos conocimientos en el ámbito
biotecnológico.
INTRODUCCIÓN
La replicación del ADN es un proceso que llevan a cabo las células de manera natural. En este, se
generan copias a partir de una hebra molde de ADN, la cual debe sufrir una serie de cambios como: la
separación de la hebra, en dos cadenas, la participación de enzimas que desenredan y evitan que se
vuelvan a pegar las cadenas (topoisomerasa) otras que ayudan a la ruptura de puentes de hidrógeno
(helicasa) y aquellas que generan copias de una nueva cadena (ADN-polimerasas).
La complejidad de este mecanismo es tal, que tardaron muchos años para poder replicarlo en un
laboratorio, no obstante, lo lograron y es lo que hoy en día se conoce como: reacción en cadena de la
polimerasa. Esta técnica, consiste en obtener copias de un fragmento de ADN que tenga algún interés
para luego aplicar herramientas de identificación como la secuenciación.
PALABRAS CLAVE
ADN
BIOLOGÍA MOLECULAR
PCR
REPLICACION DEL ADN
MARCO CONCEPTUAL

Durante la interfase del ciclo celular las células realizan la síntesis de nuevo material genético a través
de un proceso llamado replicación del ADN. Este proceso se caracteriza porque es semiconservativo, es
decir que en cada una de las nuevas hebras que se forman se mantiene parte de la hebra original.
Este complejo proceso requiere de la intervención de varios tipos de enzimas, las cuales se detallarán a
continuación:
Enzima y/o proteína Función

Helicasa Permite la ruptura de los puentes de hidrógeno para que se abra la
doble hélice
Proteína SSB Impide que las cadenas de ADN se vuelvan a unir mientras está
ocurriendo la replicación
Topoisomerasa Evita el plegamiento de la doble hélice luego de la ruptura

generada gracias a la helicasa
ADN polimerasa Añade nucléotidos a las cadenas moldes para formar una nueva
cadena
ADN primasa Produce pequeños fragmentos de ADN llamados cebadores para
pegarlos a la cadena retrasada
ADN ligasa Enlaza los fragmentos de Okazaki en la hebra retrasada
El siguiente diagrama, explica con mayor detalle como ocurre el proceso de replicación del ADN:
Fuente: Solomon, E. P., Martin, L. R., Solomon, D. W., Berg, L. R., y Martin, D. W. (2013). Biología. México
D. F., México: McGraw Hill Interamericana.
¿Qué es la PCR (Reacción en cadena de la Polimerasa)
Kary Mullis, es un bioquímico, ganador de un premio Nobel, por contribuir al perfeccionamiento de la

técnica denominada Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR) en el año de 1986. Antes de esta época,
se requería de clones realizados en bacterias para poder obtener copias de ADN. Sin embargo, este
investigador descubrió la ADN polimerasa termoestable, enzima, presente en microorganismos que
sobreviven a altas temperaturas. Este hallazgo, permitiría obtener un gran número de copias de ADN
sin que ocurriesen cambios estructurales en la proteína, debido a las altas temperaturas.
La PCR es una técnica que permite replicar fragmentos de ADN en un laboratorio, para ello, requiere de
nucleótidos, oligonucleótidos o primers, ADN-polimerasa, soluciones amortiguadoras, iones y por
supuesto, el ADN molde.
PREPARACIÓN DE LA PRACTICA
Es importante que antes de realizar esta práctica sea consciente de haber efectuado cada uno de
los siguientes aspectos:
1. Lectura completa de la guía.
2. Lectura y análisis de las temáticas propias del módulo 3 correspondiente a la asignatura de
Biología.
Consulta Previa
Pre – Informe
1. Consulte acerca del proceso de replicación del ADN y elabore un diagrama de flujo en el que
explique detalladamente los pasos.
La replicación del ADN es el La replicación depende Es decir el principio que se

proceso mediante el cual se del apareamiento de explica con las reglas de
duplica una molecular de ADN. bases complementarias. Chargaff.
Adenina (A) siempre se aparea

Puentes de hidrógeno con timina (T), y citosina (C)
es el proceso mediante Doble hélice de ADN siempre con guanina (G).
el cual se duplica una
molecular de ADN
Cada hebra sirve como

Cada cadena de ADN
Replicación produce dos un molde para la
actúa como molde para
hélices dobles de ADN, cada creación de una nueva
síntesis de nueva
una con cadena nueva y vieja hebra complementaria
cadena complementaria
La ADN polimerasa además ADN polimerasa que une los

revisa cada nueva hebra de ADN nucleótidos para sintetizar la
para asegurar que no hay nueva hebra complementaria
errores.
2. ¿Por qué se habla de una hebra adelantada y una retrasada en la replicación del ADN?
Hebra adelantada: Es la hebra que se sintetiza en el mismo sentido que avanza la horquilla de replicación y
se sintetiza de forma continua por la ADN polimerasa.
Hebra retrasada o rezagada: hebra que se sintetiza en sentido contrario al avance, cuya síntesis es
discontinua y espera a que la horquilla de replicación avance para disponer de una cierta longitud de ADN
molde
3. Consulte acerca de los reactivos necesarios para realizar una PCR.
Material
Micropipetas
Puntas para PCR
Autoclave
Tubos para PCR
Gradilla para tubos de PCR
Termociclador
Reactivos
Buffer de Reacción Taq 10X

dNTPs
Primers
ADN estándar
Agua libre de Nucleasas
Taq Polimerasa
ADN molde: fragmentos de ADN donde se obtendrá la parte de la que se desea generar muchas copias.
Iniciadores o “primers”: son dos secuencias cortas de ADN que se unen al ADN molde. Están constituidos por
20 nucleótidos o más y su función es dar inicio a la reacción de PCR.
dNTPs: son nucleótidos que sirven para generar las nuevas cadenas de ADN.
Polimerasa: es una proteína sirve para duplicar el ADN molde.

Iones: son elementos químicos cargados positivamente necesarios para la función de la polimerasa.
Termociclador: aparato que automatiza la PCR.
4. Elabore una lista de las aplicaciones que tiene la técnica de PCR
PCR anidada: se trata de una variante de la PCR básica que utiliza dos pares de cebadores. En un primer paso,
se realiza la amplificación de una región del genoma, para después concretar más la región mediante una
segunda amplificación más específica. Esta PCR se utiliza para amplificar fragmentos muy específicos del
genoma.
RT-PCR: Esta técnica convierte el ARN de una muestra en ADN. Para ello utiliza la transcriptasa inversa, una
enzima utilizada por los retrovirus Se utiliza para múltiples objetivos. Por ejemplo se puede utilizar para saber
si un gen se está expresando en una muestra biológica. También se utiliza para genotipar diferentes virus de
ARN, como el SARS-Co-V o el VIH.
PCR cuantitativa: es una PCR que permite medir en tiempo real la cantidad de fragmentos que se van
produciendo. Se utiliza a menudo para analizar la expresión de los genes.
PCR múltiple: en este tipo de PCR se realizan amplificaciones simultáneas de más de un fragmento de ADN.
Para ello, se utilizan varios cebadores diferentes en una misma reacción.
PCR in situ: esta PCR se realiza en células o tejidos. Se utiliza para poder detectar secuencias de ADN en el
interior de las células que no son detectables mediante otras técnicas.
PCR digital: es una de las últimas generaciones en técnicas de amplificación de ADN. Está basada en la
separación de cada muestra en múltiples particiones (microgotas), de forma que la reacción de amplificación
se produce de forma independiente cada una de ellas.
Estos solo son algunos de los tipos más conocidos de PCR, aunque también existen muchas otras variaciones
de la PCR, como la PCR asimétrica, o la PCR específica de alelo, que consiguen diferentes resultados a partir
de las muestras de ADN obtenidas.
Aplicaciones
Huella Genética
Detección de enfermedades hereditarias
Detección de la expresión genética
Genotipificación del polimorfismo
Análisis de DNA antiguo
Clonamiento de genes
Mutagénesis
Diagnóstico del Cáncer
Huella Digital
La huella digital genética es una técnica empleada para distinguir a dos organismos de la misma especie por
medio de su ADN. Esta nueva técnica fue creada en 1984 por Alec Jeffreys, de la universidad de Leicester. Su
primera aplicación práctica sirvió para condenar a Colin Pitchford por dos asesinatos con agresión sexual.
La huella genética se basa en que dos seres humanos tienen una parte de su secuencia de ADN idéntica y otra
que presenta gran variabilidad entre los individuos, estas secuencias altamente variables se llaman
microsatélites o satélites y su análisis permite diferenciar dos individuos distintos. El número de satélites de
dos personas que no tienen parentesco varia.
Los microsatélites muestran una mayor variación que el resto del genoma ya que en ellos se encuentran unas
secuencias en distinta repetición y con diferente grado de recombinación debido a la inestabilidad del locus.
La reacción en cadena de la PCR se emplea para obtener una cantidad mayor de ADN que permita detectar las
repeticiones en varios loci. Salvo en gemelos idénticos es muy improbable (por no decir imposible) encontrar
dos individuos que tengan perfiles genéticos iguales.
Consiste en utilizar la técnica de PCR para ampliar las regiones específicas con los cebadores
correspondientes. Con la invención de esta técnica (PCR) la tecnología genética dio un gran paso en la
recuperación de información a partir de muestras muy pequeñas. Se utiliza amplificando regiones específicas
de ADN usando temperatura y una enzima polimerasa termoestable junto con fluorescencia etiquetada en una
secuencia específica del ADN.
Esta técnica tiene multitud de aplicaciones en diversos campos. La huella genética ha sido la base de la prueba
de paternidad (explicaremos más adelante), así como en medicina forense ha servido para identificar restos
humanos y ha permitido identificar sospechosos mediante pruebas de sangre saliva o semen. Otra aplicación
de esta técnica está presente en estudios históricos y geográficos como el seguimiento de migraciones del ser
humano en la prehistoria o el estudio de la evolución entre especies.
Los ensayos de PCR son extremadamente valiosos para identificar nuevos miembros de una familia génica.
Los métodos basados en PCR requieren menos cantidades de ADN lo cual es una ventaja sobre otros métodos
como por ejemplo el RFLP que es criticado debido a su lentitud y la necesidad de tener grandes cantidades de
ADN necesario para obtener resultados útiles.
Detección de Enfermedades Hereditarias
El diagnóstico de las enfermedades hereditarias consiste en la detección de las alteraciones o variaciones de la

constitución genética de un individuo que están directa o indirectamente relacionadas con estados patológicos.
El diagnóstico basado en el estudio del ADN ha experimentado un avance considerable en el último decenio
fruto de la identificación, caracterización y cartografiado de un elevado número de genes implicados en
patologías humanas. En la actualidad, el análisis de numerosas patologías genéticas puede ser abordado en los
laboratorios de genética molecular humana, tanto con una finalidad clínica como de investigación básica.
Detección de la Expresión Genética
La PCR en tiempo real o cuantitativo es ampliamente utilizada en identificar mutaciones o polimorfismos

genéticos valiéndose de sondas específicas. Uno de los campos de mayor aplicación de esta técnica es la
investigación de cambios en la expresión genética de células a través de la cuantificación de su ARN,
permitiendo asociar dichos cambios a estados fisiológicos celulares, presencia de fármacos, agentes
infecciosos, etc.
La PCR en tiempo real puede generar cadenas muy pequeñas (desde 60 pb) lo que la hace ideal para la
detección de cambios cuantitativos en la expresión génica durante el curso de alteraciones celulares
patológicas o experimentales.
En esta prueba el producto de la PCR se mide al final de cada ciclo. Los datos pueden ser analizados mediante
un programa informático y la expresión génica relativa entre varias muestras puede calcularse.
Uno de los usos que se desprende de la tecnología utilizada en la PCR en tiempo real es la realización de
pruebas diagnósticas moleculares en el mismo lugar en donde se toma la muestra a ser estudiada y no en
laboratorios lejanos. Esto no solo volvería a este tipo de tecnologías más baratas, sino que hará que los datos
colectados sean más fáciles de procesar y estén a disposición de los investigadores de manera inmediata. Estas
visiones, conjuntamente con el desarrollo de plataformas de hardware portátil, darán paso al inicio de la era de
pruebas genéticas individualizadas.
Genotipificación de Polimorfismo
Por genotipado, o genotipificación o caracterización genética, se entiende el proceso de determinación del

genotipo o contenido genómico, en forma de ADN, específico de un organismo biológico, mediante un
procedimiento de laboratorio. En otras palabras, es la técnica de laboratorio que se utiliza para determinar la
información genética de un organismo, o genotipo, y poder diferenciarlo del resto.
¿A qué se aplica?
El genotipado se puede aplicar a todo organismo biológico incluyendo los microorganismos, es decir pueden
ser objeto de genotipado desde un ser humano hasta Virus o Bacterias.
Usos:
El genotipado de virus o bacterias puede ayudar a controlar la extensión de patógenos, localizando el origen
de los focos de infección. Esta tecnología es importante en la investigación clínica para la caracterización de
genes asociados a enfermedades y a esta área de la ciencia se la suele denominar epidemiología molecular o
microbiología forense.
¿Qué es un polimorfismo?
El polimorfismo genético hace referencia a la existencia en una población de múltiples alelos de un gen. Es
decir, un polimorfismo es una variación en la secuencia de un lugar determinado del ADN entre los individuos
de una población.
Hay polimorfismos que pueden traducirse en diferentes fenotipos (por ejemplo, el color de ojos). Los cambios
poco frecuentes en la secuencia de bases en el ADN no se llaman polimorfismos, sino más bien mutaciones.
Hay diferentes tipos de polimorfismo, tales como el polimorfismo de nucleótido simple (SNP),
polimorfismos de longitud de fragmentos de restricción (RFLP), en este último la metodología se basa en
que el ADN de un individuo se extrae y se purifica. El ADN purificado puede ser amplificado usando la
técnica molecular Reacción en cadena de la polimerasa o PCR (del inglés Polymerase Chain Reaction), luego
tratado con enzimas de restricción específicas para producir fragmentos de ADN de diferentes longitudes.
Estas enzimas de restricción hacen un proceso de digestión restrictiva en el cual reconocen cortas secuencias
específicas en el ADN donde cortan formando fragmentos de distintas longitudes.
Usos:
Un uso importante de los polimorfismos es la creación de perfiles genéticos. Para este cometido son
especialmente útiles aquellos polimorfismos que se basan en patrones repetidos un cierto número de veces.
Análisis del DNA Antiguo:
El ADN antiguo es aquel obtenido de restos biológicos de organismos muertos o de restos humanos
comprendidos dentro del periodo histórico (últimos 30.000 años) o prehistórico ( Antes de esos 30.000 años)
. Con el ADN mitocondrial se puede evaluar patrones de residencia, migración y relaciones genéticas de los
grupos aborígenes y averiguar cambios genéticos de épocas pasadas.
El análisis del DNA antiguo se basa en técnicas orientadas a la obtención de información y material genético
a partir de muestras biológicas antiguas, a probar su autenticidad o sus características físico químicas.
Clonamiento de Genes
El clonamiento o la clonación es un proceso donde a partir de una célula se forma una otra de tipo asexual,
que resulta ser la copia exacta de esta misma.
Hoy la clonación ha conocido muchas transformaciones y maneras de utilizarse por esto la dividimos en
diferentes tipologías.
En Naturaleza: es una forma de reproducción de específicos organismos
Molecular: se utiliza en muchísimos casos de trabajos clínicos, donde se quiere crear un clon a partir de una
célula u otros organismos. Para hacerlo necesitamos pero de hacer una transfección (donde la secuencia de
DNA se introduce en las células) o de selección (donde se eligen las células que ya tienen bien la nueva
estructura). Esto pasa hasta que se llega a un momento donde se pone un vector de clonación que permite que
se formen fragmentos de DNA interesante para el estudio que se va a hacer.
Clonación Celular: es muy importante en los trabajos biológicos porque permite de trabajar con células apenas
creadas si estarán bien. Es un sistema que nos permite de tener siempre células iguales a la madre en con cuyo
trabajar sin problemas.
De Organismo de Forma Natural: es un sistema muy parecido a aquello de las células porque nos da la
característica igual a la célula de partencia.
Artificial: es un proceso de laboratorio que consiste en tomar un embrión de 8 células y generar un otro
exactamente igual que va a ser implantado en el útero para su desarrollo.
Reproductiva: no se puede hacer a nivel humano porque comportaría la formación de un organismo
exactamente igual a aquello principal. Fue actuada por primera vez sobre de una oveja, Dolly, que vivió como
una oveja normal hasta morir.
Terapéutica: se clonan tejidos y órganos que pueden trasplantar al paciente donante y curar así enfermedades.
Consiste en fusionar el núcleo y un ovocito para crear un embrión con el que trabajar.
De Sustitución: es una unión entre la clonación reproductiva y terapéutica. Se creará una clonación por parte.
Especies Extintas o en Vía de Extinción: todavía hoy es un sueño difícil de realizar.
Mutagénesis
Es aquella modificación del material genético que resulta estable y transmisible a las células hijas que surgen
de la mitosis. Las lesiones generadas por estos agentes mutagénicos pueden resultar en modificaciones de las
características hereditarias o la inactivación del ADN. Cuando el ADN afectado corresponde a células de la
línea germinal se relacionan con la aparición de enfermedades hereditarias, mientras que las mutaciones que
se dan en las células somáticas están relacionadas con enfermedades degenerativas y procesos carcinogénicos.
Diagnóstico Del Cáncer
El diagnóstico por imágenes

Para confirmar la presencia y la localización del tumor se utilizan métodos diagnósticos de alta tecnología que
producen imágenes. Estos métodos, no siempre pueden saber si el tumor es benigno o maligno.
Entre estas técnicas , tenemos:
Los rayos X ( si hablamos de la mamografía de mama)

La tomografía axial computarizada ( TAC)
La resonancia magnética ( RM)
La ecografía (ultrasonido
METODOLOGIA A SEGUIR
TIEMPOS PARA EL DESARROLLO DE LA PRÁCTICA

Una semana
OBJETIVOS DE LA PRÁCTICA
Reconocer las aplicaciones de la biología molecular en el campo de la biotecnología a través del

desarrollo de una práctica de laboratorio virtual
DESCRIPCIÓN DE LA ACTIVIDAD
Esta práctica debe desarrollarse en tres etapas que se describen a continuación:
Etapa uno (Pre informe):

El estudioso leerá el contenido de esta guía y desarrollará el pre informe de laboratorio, con el fin de
abordar algunos conceptos previos necesarios para llevar a cabo la parte experimental. Entre estos
conceptos encontramos las etapas y moléculas involucradas en la replicación del ADN y el fundamento
de la técnica de PCR.
Etapa dos (Parte experimental):
El estudioso debe llevar a cabo lo planteado en la guía de laboratorio con el fin de reconocer una de las
técnicas más importantes de la biología molecular denominada PCR. A partir de este procedimiento
obtendrá los resultados que le permitirán desarrollar el informe de la práctica.
Los pasos de la PCR
Los ingredientes clave para una reacción de PCR son Taq polimerasa, cebadores, ADN molde y nucleótidos
(los bloques básicos del ADN). Los ingredientes se colocan en un tubo, junto con los cofactores que necesite
la enzima, y se someten a ciclos repetidos de calentamiento y enfriamiento que permiten la síntesis del ADN.
Los pasos básicos son:
Desnaturalización (96°C): la reacción se calienta bastante para separar, o desnaturalizar, las cadenas de ADN.
Esto proporciona los moldes de cadena sencilla para el siguiente paso.
Templado (55 - 65°C): la reacción se enfría para que los cebadores puedan unirse a sus secuencias
complementarias en el molde de ADN de cadena sencilla.
Extensión (72°C): la temperatura de la reacción se eleva para que la Taq polimerasa extienda los cebadores y
sintetice así nuevas cadenas de ADN.
Este ciclo se repite 25 -35 veces en una reacción de PCR típica, que generalmente tarda
2 – 4 horas, según la longitud de la región de ADN que se copia. Si la reacción es eficiente (funciona bien),
puede producir miles de millones de copias a partir de una o unas cuantas copias de la región blanco.
Eso es porque no solo se usa el ADN original como molde en cada ciclo. En realidad, el nuevo ADN que se
produce en una ronda puede servir como molde en la siguiente ronda de síntesis de ADN. Hay muchas copias
de los cebadores y muchas moléculas de Taq polimerasa flotando en la reacción, por lo que el número de
moléculas de ADN casi puede duplicarse en cada ciclo. La siguiente imagen muestra este patrón de
crecimiento exponencial.
Procedimiento:
Habitualmente, los resultados de una reacción de PCR se visualizan (se hacen visibles) al usar electroforesis
en gel. La electroforesis en gel es una técnica en la que una corriente eléctrica impulsa fragmentos de ADN a
través de una matriz de gel y los fragmentos de ADN se separan según su tamaño. Típicamente se incluye un
estándar, o marcador de peso molecular, para que pueda determinarse el tamaño de los fragmentos en la
muestra de PCR.
Los fragmentos de ADN de la misma longitud forman una "banda" en el gel que se puede identificar a simple
vista si el gel se tiñe con un pigmento que se una al ADN. Por ejemplo, una reacción de PCR que produce un
fragmento de 400pares de bases (pb) se vería así en un gel:
Como se puede observar en la siguiente imagen, para poder realizar la reacción en cadena de la
polimerasa necesitamos determinar ciertos parámetros previos, iniciando por el número de ciclos a
repetir, luego la desnaturalización, la hibridación o alineamiento, y finalmente la extensión o elongación.
Volúmen de los componentes químicos
Imágenes Parámetros y ciclos utilizados:
En este procedimiento digitaremos 20 en “No. Of cycles”.
Como la realización de la PCR se lleva a cabo in vitro, necesitamos recurrir a la temperatura como
herramienta para poder separar las dos cadenas de ADN, a diferencia la enzima Helicasa en el caso de una
célula (NIH, s.f.). En este caso, se conoce que para la desnaturalización necesitamos someter nuestra solución
a condiciones de temperatura de 80º a 10ºC durante un periodo de tiempo de 23 minutos. Por lo tanto,
aplicaremos una temperatura de 80ºC y un periodo de tiempo de 23 minutos.
-En esta fase annealing necesitamos determinar ciertas condiciones para favorecer el apareamiento de los
primers con la secuencia blanco. En este caso, se conoce que para la hibridación o alineamiento necesitamos
someter nuestra solución a condiciones de temperatura de 68ºC durante un periodo de entre 23 minutos, es
decir, tenemos que “enfriar” la solución (Khan Academy, s.f.). Por lo tanto, aplicaremos una temperatura de
68ºC y el mismo periodo de tiempo anterior.
En esta parte del proceso de PCR a utilizar comienza con la extensión nucleótidos correspondientes que
fueron agregados al inicio, puesto que forman parte de los componentes químicos de esta técnica. Al final de
este paso obtendremos la hebra complementaria de ADN la cual denominan AMPLICÓN. En este caso, se
conoce que para la elongación o extensión necesitamos someter a nuestra solución a condiciones de
temperatura de 54ºC, ya que conocemos que la Taq polimerasa que utilizaremos tiene su mayor actividad
cuando la temperatura es cercana a los 70ºC (Khan Academy, s.f.). Por lo tanto, aplicaremos una temperatura
de 54º centígrados durante otros 23 minutos.
dNTPs: Este corresponde a los deoxinucleótidos trifosfato, los cuales son los ladrillos o bloques de
construcción usados para formar una nueva hebra de DNA. Se utilizó 1.5µL.
Primer: Este corresponde al cebador que delimitará la región de interés en el paso de hibridación. Se utilizó
2µL.
Plasmid: Esto corresponde al DNA blanco de interés. Utilizamos 50ng.
Polymerase: Esta es la enzima encargada de extender los cebadores o primers en la etapa de elongación, de
forma específica, utilizamos la Taq polimerasa. La cantidad fue 1U.
2µL.
2µL.
2µL.
3µL.
Descripción y tabulación de resultados
La reacción en cadena de la polimerasa (PCR) es una técnica de laboratorio que permite amplificar pequeños
fragmentos de ADN para identificar gérmenes microscópicos que causan enfermedades. Habitualmente el
resultado de la PCR se puede resumir en positiva o negativa. Es decir, se ha encontrado el ADN que
esperábamos, o no. Eso es esencial para poder identificar gérmenes concretos y proporcionar un antibiótico
específico, o poder diagnosticar una enfermedad genética y medir la cantidad de ADN mutado.
Análisis de datos
El elemento principal en la PCR es el ADN, cuya naturaleza química ofrece ventajas para su manipulación.
Para entrar en contexto, es importante recordar que la molécula de ADN está formada por tres componentes:
un azúcar (desoxirribosa), un grupo fosfato y una base nitrogenada (adenina, timina, guanina o citosina) que es
complementaria con la base de otra cadena de tal forma, que el ADN se estructura en una doble hélice. La
complementariedad entre las bases está por puentes de hidrógeno e interacciones hidrofóbicas, generando
estabilidad a la doble hélice, la carga eléctrica del ADN es negativa y está dada por los grupos fosfatos. En la
PCR, el templado son las cadenas de ADN que se separan y funcionan como molde para que la enzima
sintetice las nuevas cadenas que llevan la secuencia blanco de interés. Por su parte, la ADN polimerasa se
encarga de la catálisis de la reacción, sintetizando las nuevas cadenas de ADN que llevan la secuencia blanco.
La combinación adecuada de todos los elementos químicos mencionados en este laboratorio hacen posible la
síntesis in vitro del ADN utilizando la PCR. Los cambios que ha sufrido la PCR como plataforma tecnológica
han sido muy notables; conforme los paradigmas de estudio de los ácidos nucleicos han ido cambiando, la
necesidad de ir mejorando la técnica se convirtió en una prioridad para los científicos; es por ello que la PCR
ha sufrido modificaciones para ofrecer una tecnología más innovadora apegada a los retos inherentes que
implica el estudio del ADN.
Conclusiones
Se observó y analizo la utilización de la PCR en tiempo real, así como también sus fundamentos v
características, utilizada para amplificar y simultáneamente cuantificar de forma absoluta el producto de la
amplificación de ácido desoxirribonucleico, para esto se emplea un molde de ADN y un par de cebadores
específicos, La PCR cuantitativa o PCR en tiempo real junta con los chip de ADN, representan una moderna
metodología para el estudio de la expresión genética.
La reacción en cadena de la polimerasa o PCR es una técnica de laboratorio común que sirve para hacer
muchas copias de una determinada región de DNA in vitro, esta región puede ser un gen cuya función es muy
variada, par ejemplo para ser comprendida por investigadores o como un marcador genético para científicos
forenses.
Etapa tres:
La nota del informe de laboratorio dependerá de la entrega del mismo en el formato asignado para tal
fin y de la entrega del pre informe; ambos en formato Word o PDF. El informe debe incluir lo siguiente:
 Portada
 Introducción
 Objetivos
 Materiales (imágenes)
 Marco teórico (resumiendo la temática abordada)
 Metodología
 Descripción y tabulación de resultados
 Análisis de datos
 Conclusiones
 Bibliografía
Materiales Cantidad
Aplicación de laboratorios virtuales (es un software libre), diseñados por
pcr.ico2 Link: http://virtual-pcr.ico2s.org/pcr/
MATERIALES Y EQUIPOS A UTILIZAR (Indicar las cantidades)
PRECAUCIONES Y MANEJO DE MATERIALES Y EQUIPOS. CONSULTA DE EQUIPO ESPECIALIZADO.
PROCEDIMIENTO A UTILIZAR
1. Ingrese al siguiente enlace: http://virtual-pcr.ico2s.org/pcr/ en donde podrá realizar una
PCR (reacción en cadena de la polimerasa) de manera virtual.

2. Elabore un informe de laboratorio siguiendo el formato adjunto
CRITERIOS DE EVALUACIÓN
Valor
No presentó Bajo Básico Alto Superior de
criterio Nota
0
Ponderada
0 2 3 4 5 100%
Redacta un
Redacta dos
objetivo donde
objetivos donde
se puede
Plantea se puede
Redacta dos identificar con
No plantea objetivos de identificar con
objetivos sin claridad el
ningún objetivo laboratorio claridad el
tener en cuenta verbo en
Planteamiento para el desligados de los verbo en tiempo
en su estructura tiempo 5% 0
de objetivos desarrollo del conceptos infinitivo, el
el propósito y el infinitivo, el
laboratorio. desarrollados en propósito del
cómo lograrlo. propósito del
el laboratorios. objetivo y el
objetivo y el
cómo lograr el
cómo lograr el
objetivo.
objetivo.
Presenta hasta Presenta el Presenta la

Presenta en una
el 50% de los 80% de los totalidad de los
lista sin
No presento los materiales materiales materiales
esquemas o
materiales usados en el usados en el usados en el
Presentación de gráficos los
usados en la laboratorio a laboratorio a laboratorio a 5% 0
materiales materiales
practica través de través de través de
usados en el
esquemas o esquemas o esquemas o
laboratorio.
gráficos. gráficos. gráficos.
Derivado de los
ejemplos
presentados y
En algunas
las palabras
partes del marco
El marco mencionadas se
teórico se
A lo largo del teórico es evidencia la
presentan
marco teórico no construido sin reflexión del
argumentos
se realizan citas reflexión estudioso en
tomados por
ni referencias alguna, se función de los
otros autores sin
No realizó la desde las evidencia que lo conceptos
realizar la cita o
Construcción entrega del normas APA. por expuesto se abordados
del marco referencia 10% 0
marco teórico tanto no será tomó con el uso desde el
teórico respectiva desde
válido ninguna correcto de las laboratorio,
normas APA. Por
parte del normas APA en además
tanto, no será
informe de citas y profundiza lo
válido ninguna
laboratorio. parafraseos de hecho con los
parte del
otros autores. postulados por
informe del
otros autores
laboratorio.
desde un
correcto uso de
las normas APA.
Presento la
Presento la toma
toma de datos y
de datos y en el Presento la
en el desarrollo
desarrollo de la toma de datos y
de la misma
misma no en el desarrollo
justifico
mostro los de la misma
parcialmente
procesos que justifico los
No presento Presento los procesos
sustentan los procesos que
evidencia de la evidencia de la que sustentan
resultados sustentan los
toma de datos o toma de datos, los resultados
obtenidos, o resultados
no presentó pero no obtenidos, o
presento las obtenidos, o
Toma de datos y ninguna de las presento las presento
análisis de datos respuestas a las presento las 35% 0
preguntas preguntas parcialmente
preguntas sin respuestas
planteadas para planteadas para las respuestas
tomar en cuenta justificándolas
el análisis. el análisis. justificándolas
la realidad del desde los
desde los
concepto postulados
postulados
abordado y teóricos
teóricos
desarrollo de la abordados
abordados
práctica de desde el módulo
desde el
laboratorio.
módulo
Las
Presenta una Presenta dos
Presenta extrapolaciones
extrapolación extrapolaciones
extrapolaciones presentadas son
del concepto del concepto
que no están coherentes a la
Extrapolaciones No muestra abordado desde abordado desde
relacionadas con realidad del
o aplicaciones ninguna la práctica de la práctica de
el tema tema pero no se
de los conceptos extrapolación. laboratorio laboratorio 10% 0
abordados en el abordado en el derivan del
derivado de su derivado de su
laboratorio. desarrollo del análisis de su
aplicabilidad en aplicabilidad en
laboratorio. aplicabilidad en
su carrera. su carrera.
su carrera
La conclusión
La conclusión
La conclusión menciona
responde a los
retoma parcialmente
La conclusión no objetivos
parcialmente los elementos
responde a los planteados al
objetivos asociados a los
objetivos inicio del
No realizo las planteados al objetivos
planteados al laboratorio, así
conclusiones inicio del trazados al
inicio del como
derivadas del laboratorio, sin inicio del
laboratorio, resultados
Conclusión trabajo de la embargo no laboratorio, 35% 0
además no obtenidos y las
práctica de utiliza resultados y
presenta su extrapolaciones
laboratorio. argumentos análisis de los
postura en torno propuestas,
para reafirmar datos así mismo
al tema además muestra
su postura en hace explicita
abordado. una postura
torno al tema su postura
sobre el tema
abordado. sobre el tema
trabajado.
abordado.
GLOSARIO
ADN: abreviatura para el ácido desoxirribonucleico. Es un ácido nucleico encargado de almacenar

información genética.
Nucleótido: Un nucleótido es una molécula conformada por la unión de: un azúcar, pentosa (puede ser
ribosa o desoxirribosa), una base nitrogenada, purina (de dos anillos) o pirimidina (de un anillo); y un
grupo fosfato (que dan lugar a la formación de enlaces fosfodiéster).
Oligonucleótido/cebador o primer: fragmentos de ADN, que se ubican durante el proceso de replicación
en las cadenas para permitir la síntesis de nuevo ADN.
Fragmentos de Okazaki: fragmentos de ADN, producto de la replicación que se lleva a cabo en la hebra
retrasada
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS RECOMENDADAS – Normas APA
En las bases de datos de la UMB: Audesirk, T., Audesirk, G., & Byers, B. E. (2013). Biología: La vida la Tierra
Tierra. Pearson educación.
En las bases de datos de la UMB:Karp, G. (2014). Biología celular y molecular. McGraw-Hill Interamericana (7a.
ed.). México. Recuperado de: http://www.ebooks7-24.com
En las bases de datos de la UMB: Corvalán, R. (2009). Biología molecular: fundamentos y aplicaciones
diagnósticas. Rev. Méd. Clín. Condes, 8(1), 4-9.
https://es.khanacademy.org/science/ap-biology/gene-expression-and-
regulation/biotechnology/a/polymerase-chain-reaction-pcr
https://goldbio.com/articles/article/Como-Interpretar-Resultados-Electroforesis-Gel-ADN
ELABORÓ REVISÓ
APROBÓ
(Personas que elaboraron la (Director de Programa o
(Laboratorios)
guía) Área)
Firma Firma Firma
Nombre: Daiwin Sibaja Correa Nombre: Nombre:

Fecha:
Fecha: 04 de marzo de 2023 Fecha:

Guía de Laboratorio 3

Cargado por

Información del documento

Título original

Derechos de autor

Formatos disponibles

Compartir este documento

Compartir o incrustar documentos

Opciones para compartir

¿Le pareció útil este documento?

¿Este contenido es inapropiado?

Copyright:

Formatos disponibles

Guía de Laboratorio 3

Cargado por

Copyright:

Formatos disponibles

Aplicación de la Biología molecular ¿Qué es un PCR y para que sirve

Daiwin Ramiro Sibaja Correa

Universidad Manuela Beltrán

Jorge Alberto Briceño Vanegas

NOMBRE DE LA PRÁCTICA PRÁCTICA No: 3

Replicación del ADN

LABORATORIO Y/O HERRAMIENTA TECNOLÓGICA A UTILIZAR

Laboratorios virtuales (software libre), diseñados por pcr.ico2s

Esta práctica va dirigida a estudiantes que estén cursando la asignatura Biología

Replicación del ADN

Enzima y/o proteína Función

Topoisomerasa Evita el plegamiento de la doble hélice luego de la ruptura

¿Qué es la PCR (Reacción en cadena de la Polimerasa)

Kary Mullis, es un bioquímico, ganador de un premio Nobel, por contribuir al perfeccionamiento de la

Replicación del ADN

La replicación del ADN es el La replicación depende Es decir el principio que se

Adenina (A) siempre se aparea

Cada hebra sirve como

La ADN polimerasa además ADN polimerasa que une los

3. Consulte acerca de los reactivos necesarios para realizar una PCR.

Buffer de Reacción Taq 10X

Polimerasa: es una proteína sirve para duplicar el ADN molde.

4. Elabore una lista de las aplicaciones que tiene la técnica de PCR

Detección de Enfermedades Hereditarias

El diagnóstico de las enfermedades hereditarias consiste en la detección de las alteraciones o variaciones de la

Detección de la Expresión Genética

La PCR en tiempo real o cuantitativo es ampliamente utilizada en identificar mutaciones o polimorfismos

Por genotipado, o genotipificación o caracterización genética, se entiende el proceso de determinación del

Análisis del DNA Antiguo:

Diagnóstico Del Cáncer

El diagnóstico por imágenes

Los rayos X ( si hablamos de la mamografía de mama)

TIEMPOS PARA EL DESARROLLO DE LA PRÁCTICA

Reconocer las aplicaciones de la biología molecular en el campo de la biotecnología a través del

Etapa uno (Pre informe):

Los pasos de la PCR

Los pasos básicos son:

Volúmen de los componentes químicos

Imágenes Parámetros y ciclos utilizados:

En este procedimiento digitaremos 20 en “No. Of cycles”.

Plasmid: Esto corresponde al DNA blanco de interés. Utilizamos 50ng.

En este procedimiento digitaremos 21 en “No. Of cycles”.

Plasmid: Esto corresponde al DNA blanco de interés. Utilizamos 50ng.

En este procedimiento digitaremos 22 en “No. Of cycles”.

de 54º centígrados durante otros 24 minutos.

Plasmid: Esto corresponde al DNA blanco de interés. Utilizamos 50ng.

En este procedimiento digitaremos 23 en “No. Of cycles”.

aplicaremos una temperatura de 80ºC y un periodo de tiempo de 25 minutos.

Plasmid: Esto corresponde al DNA blanco de interés. Utilizamos 50ng.

En este procedimiento digitaremos 30 en “No. Of cycles”.

Plasmid: Esto corresponde al DNA blanco de interés. Utilizamos 52ng.

Descripción y tabulación de resultados

PRECAUCIONES Y MANEJO DE MATERIALES Y EQUIPOS. CONSULTA DE EQUIPO ESPECIALIZADO.

PCR (reacción en cadena de la polimerasa) de manera virtual.

Presenta hasta Presenta el Presenta la

ADN: abreviatura para el ácido desoxirribonucleico. Es un ácido nucleico encargado de almacenar

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS RECOMENDADAS – Normas APA

Firma Firma Firma

Nombre: Daiwin Sibaja Correa Nombre: Nombre:

También podría gustarte