UNIVERSIDAD NACIONAL FEDERICO VILLARREAL

FACULTAD DE MEDICINA “HIPÓLITO UNANUE”

DEPARTAMENTO DE CIENCIAS FISIOLOGICAS
ESCUELA PROFESIONAL: MEDICINA
ASIGNATURA:BIOQUÍMICA APLICADA AL MEDICINA

Técnicas
modernas del
ADN
recombinante y
sus aplicaciones
Mg. Paredes Pescorán
María Gabriela
ADN recombinante(r ADN)

El ADN recombinante (r ADN) es una tecnología que utiliza

enzimas para cortar y unir secuencias de ADN de interés. Las
secuencias de ADN recombinado se pueden colocar en unos
vehículos llamados vectores que transportan el ADN hacia el
lugar adecuado de la célula huésped donde puede ser
copiado o expresado.
ADN recombinante (rADN)

Trozos de ADN, como ADN humano, pueden ser diseñados

sintéticamente de manera que puedan ser copiados, o
replicados en bacterias o levaduras. Este proceso implica
incorporar los elementos adecuados en una secuencia de ADN,
y luego trasladarlos a una célula bacteriana o a una levadura,
con los elementos que dan las instrucciones a la célula
bacteriana o de levadura para copiar este ADN al mismo tiempo
que copian la suya propia. Este proceso se conoce como
clonación de ADN y resulta en ADN clonado que a menudo se
llama ADN recombinante. Eric D. Green, M.D., Ph.D.
ADN RECOMBINANTE

Creación de
nuevas
combinaciones
de segmentos o
de moléculas de
ADN que no se
encuentran
juntas de
manera natural.
ADN recombinante

Una molécula de ADN híbrida formada por la unión de dos

secuencias de ADN provenientes de dos organismos distintos.

Molécula de ADN recombinante. Tomado de

Creación ADN recombinante

1.Aislamiento de la secuencia de
ADN de interés (ADN genómico,
ADNc o ADN copia o bien un ADN
obtenido mediante PCR).

2.Unión de la secuencia de ADN de

interés a un vector de clonación.

3.Introducción de la molécula de
ADN recombinante en una célula
huésped que puede ser procariota
(bacterias) o eucariota (levaduras).
Creación ADN recombinante

4.Identificación y purificación de
los clones que poseen la molécula
de ADN recombinante de interés.

5.Crecimiento y amplificación de
las células huésped que
incorporaron el ADN recombinante
de interés
 Creación ADN recombinante

Pasos básicos en la creación de una molécula de ADN recombinante.

Tomado de
Enzimas de restricción

La Clonación depende de las endonucleasas de restricción.

✓ Enzimas que cortan la molécula de ADN en sitios
específicos denominados: sitios de restricción (secuencias
de 4 – 8 pares de bases).
✓ Mecanismo de defensa de las bacterias contra la infección
por fagos. • Bacterias metilan su propio ADN.
Enzimas de restricción
Reconocen secuencias de ADN palindrómicas
Una secuencia palindrómica, o palíndromo, es una
secuencia de ácido nucleíco (ADN o ARN) que es lo mismo si
se lee de 5' (5-prima) a 3' (3-prima) en un filamento o de 5' a
3' en el filamento complementario, con el cual forma
una doble hélice.
✓ Producen cortes en las dos cadenas.
✓ Enzimas de restricción:
✓ Extremos cohesivos o pegajosos (EcoRI)
✓ Extremos romos (Hind II)
Enzimas de restricción
Enzimas de restricción
 Vector de clonación

Molécula de ADN que vehiculizará al fragmento de interés

y permitirá su multiplicación.
Componentes:
• Un origen de replicación.
• Un gen marcador.
• Sitio de clonación múltiple o sitio de restricción múltiple:
segmento corto de ADN con muchos sitios de restricción
distintos.
modificado de
Plásmidos

Moléculas de ADN circular, doble banda,

extracromosómicos
Ventajas como vector de clonación:
• Tamaño pequeño.
• Circulares.
• Replicación independiente del ADN cromosómico.
• Presencia múltiples copias en la células bacteriana.
• Presencia de genes de resistencia a antibióticos.
Transferencia a la célula hospedera por transformación
utilizando choque de calor o electroporación.
Vector de expresión

✓ Estos vectores se caracterizan por poseer las secuencias

regulatorias (promotor, terminador, secuencias de unión al
ARNr) que permitan la adecuada expresión del gen de
interés.
✓ Asimismo, poseen un sitio de replicación, un sitio de
clonación múltiple (MCS) y un gen marcador que permita la
selección de las células que incorporaron el vector.
Vectores de Clonación
Paso 1: restricción y ligación del ADN
Paso 2: Introducción del ADN en una
célula hospedera
Paso 3: Selección de las células
transformadas
5 Pasos de la tecnología del ADN
recombinante
Paso 4: Identificación de las células
transformadas
Reacción en cadena de la polimerasa (PCR)

▪ La técnica de la PCR consiste en la amplificación de una

región específica de ADN utilizando unos primers o
cebadores (secuencias de ADN que delimitan la zona de
amplificación, que tienen una longitud de 15-30
nucleótidos y son complementarios a la región del ADN que
se quiere amplificar).

▪ Se basa en la acción de diferentes enzimas, entre ellas la

ADN polimerasa, que incorpora los nucleótidos en la
síntesis de nuevas cadenas de ADN (amplificación).
Reacción en cadena de la polimerasa (PCR)

▪ En esta técnica se reproduce lo que tiene lugar en el

interior de la célula.
▪ La muestra de ADN se añade en un tubo eppendorf junto
con los primers, los desoxinucleótidos (dATP, dCTP, dGTP y
dTTP), una ADN polimerasa termoestable y un cofactor de
esta enzima (normalmente magnesio).
▪ Una vez introducidos todos los reactivos necesarios para el
desarrollo de la técnica, se someterán a una serie de ciclos
(25-40 ciclos), con cambios de temperatura característicos y
que permitirán amplificar la región concreta del ADN de la
muestra.
PCR, o la reacción en cadena de la polimerasa, es una
reacción química que los biólogos moleculares utilizan para
amplificar (crear copias) fragmentos de ADN. Esta reacción
permite que unos pocos fragmentos de ADN se repliquen en
millones o miles de millones de copias.
¿Para qué sirve una PCR?

▪ La PCR es una técnica imprescindible en múltiples ámbitos.

Por ejemplo, en investigación bioquímica y médica, la PCR
permite preparar fragmentos de ADN para su clonación en
plásmidos bacterianos o virus para utilizarlos como
vectores, paso imprescindible en el desarrollo de terapias
génicas.
▪ Además, en Medicina, esta técnica es utilizada para
diagnosticar enfermedades hereditarias. También se utiliza
para identificar patógenos.

▪ Por si fuera poco, la PCR es una técnica importantísima en

las pruebas de paternidad y en los análisis forenses de la
policía científica.
 PCR

https://www.isciii.es/InformacionCiudadanos/Divulgacio
nCulturaCientifica/DivulgacionISCIII/Paginas/Divulgacion/
COVID19_PCR_test.aspx
¿Qué es y para qué sirve la electroforesis?

▪ Técnica de laboratorio en la que se usa corriente eléctrica

para separar sustancias, como las proteínas y los ácidos
nucleicos. El tamaño y la carga eléctrica (positiva o
negativa) de una sustancia determina cuán lejos se
desplaza con la corriente.
▪ La electroforesis de proteínas es solicitada por el médico
para determinar la cantidad de proteínas en el organismo
y, de esta forma, investigar posibles alteraciones y
enfermedades, pudiendo iniciar el tratamiento de forma
precoz, en caso de que sea necesario.
¿Qué es y para qué sirve la electroforesis?
Algunas de las situaciones en que el médico puede indicar la
electroforesis de proteínas es cuando existen signos y
síntomas sugestivos de:
Deshidratación;
Mieloma múltiple;
Inflamaciones;
Cirrosis;
Lupus Eritematoso Sistémico;
Hipertensión;
Ascitis;
Glomerulonefritis;
Síndrome de Cushing;
Enfisema;
Enfermedades hepáticas;
Anemia;
Pancreatitis.
Electroforesis
La hibridación, en relación con la genómica, es el proceso en
el que dos moléculas complementarias de una sola hebra de
ADN y/o ARN se unen y forman una molécula de doble
cadena. La unión depende del apareamiento apropiado de las
bases entre las dos moléculas de una sola hebra. La
hibridación es un proceso importante en diversas técnicas de
investigación y de laboratorio clínico.
Hibridación
El ADN suele encontrarse en forma de una molécula de
doble cadena. Sus dos hebras se unen entre sí de forma
complementaria en un proceso llamado hibridación. De
forma natural, cuando el ADN se replica, la nueva hebra
hibrida con la hebra que es copiada. En el laboratorio
hacemos uso de la hibridación generando sondas de ácidos
nucleicos que podemos utilizar para detectar la presencia o
ausencia de ciertas moléculas de ADN o de ARN en la
célula.
Southern blot

El análisis Southern blot es un método de laboratorio que se

utiliza para estudiar el ADN. Específicamente, el ADN
purificado proveniente de una muestra biológica (como
sangre o tejido) se digiere mediante una enzima de
restricción, y los fragmentos de ADN resultantes se separan
mediante corriente eléctrica para hacerlos desplazar a
través de un gel o matriz similar a un tamiz, que permite
que los fragmentos más pequeños se desplacen más rápido
que los fragmentos más grandes.
Southern blot
▪ Los fragmentos de ADN se transfieren fuera del gel o de
la matriz a una membrana sólida, que luego se expone a
una sonda de ADN marcada con una sustancia
radioactiva, fluorescente o química. La marcación permite
que los fragmentos de ADN que contienen secuencias
complementarias a la secuencia de ADN utilizada como
sonda sean visualizados en el Southern blot.
▪ El método recibió su nombre debido a su creador, el
biólogo molecular británico Edwin Southern.
Southern blot
▪ En primer lugar se separan los distintos fragmentos de ADN
de acuerdo al tamaño en un gel a lo largo de un campo
eléctrico .Los fragmentos más grandes, migran a la parte
superior y los fragmentos más pequeños se van a encontrar
en la parte inferior.
▪ Cuando se termina de correr el gel, se realiza la
transferencia a una membrana. Es como hacer un sandwich:
gel, membrana en la parte superior y muchas toallas de
papel. Lo que se busca es permitir que una solución haga
que el ADN que se encuentra en el gel pase a la membrana.
Southern blot
Southern blot
▪ La prueba de Northern blot es un método de análisis de
laboratorio que se utiliza para estudiar el ARN.
Específicamente, los fragmentos de ARN purificados
provenientes de una muestra biológica (como sangre o
tejido) se separan mediante corriente eléctrica para
hacerlos desplazar a través de un gel o matriz similar a un
tamiz, que permite que los fragmentos más pequeños se
desplacen más rápido que los fragmentos más grandes.
▪ Los fragmentos de ARN se transfieren fuera del gel o de la
matriz a una membrana sólida, que luego se expone a una
sonda de ADN marcada con una sustancia radioactiva,
fluorescente o química.
▪ La marcación permite que los fragmentos de ARN que
contienen secuencias complementarias a la secuencia de
ADN utilizada como sonda sean visualizados en el Northern
blot.
▪ Northern blot se utiliza para analizar moléculas de ARN.
Normalmente se aísla el conjunto de moléculas de ARN de
una muestra de células o de tejido, y después se facilita la
migración del ARN en un gel por electroforesis.
▪ De esta manera se colocan los fragmentos más pequeños
en la parte inferior y los fragmentos más grandes en la
parte superior.
▪ Una vez que hemos terminado con lo que llamamos correr
el gel, se aplica una membrana sobre el gel y se
transfieren, bien por un gradiente salino o por
transferencia electroforética, las moléculas de ARN, del gel
a la membrana, la cual normalmente es de nitrocelulosa.
▪ Este producto transferido a nitrocelulosa se va a ver como
un pedazo de papel blanco.
▪ Pero va a hacer que seamos capaces de estudiar a
continuación las diferencias en las muestras de ARN.
▪ Podemos preguntar si una molécula de ARN está o no
presente, marcando dicho ARN y buscando el que es similar
en la membrana, o podemos preguntar ¿cambia de
tamaño? Se podría esperar un cambio de tamaño si tiene
lugar una alteración en el procesamiento del ARN.
▪ El término Northern blot es realmente un juego de
palabras de cómo las personas inicialmente analizaban el
ADN.
▪ Un hombre llamado Edward Southern desarrolló el
protocolo para hacer un análisis similar, pero permitiendo
que fueran las moléculas de ADN las que migraban en un
gel y después se transferían a una membrana.
▪ Y ese protocolo recibió su nombre, Southern que significa
del sur.

▪ Así que pareció un juego de palabras divertido que cuando

se analiza una molécula de ARN de una manera similar, la
técnica reciba el nombre de Northern o del norte.

▪ El término "blot" o mancha, se refiere al protocolo en si

donde se tiene un gel y luego se coloca como si fuera un
sándwich, con la membrana que desea transferir en la
parte superior, y finalmente se agrega una pila de material
absorbente, -usamos toallas de papel - y es como si estás
emborronando, transfiriendo, el ADN a la parte superior de
la membrana para su posterior análisis.
Southern blot
Northern blot
Western blot
Secuenciación química de ADN
Secuenciación de ADN
ADN RECOMBINANTE
Manipulación de células humanas
Aplicaciones
Utilidad de la Biotecnología
HISTORIA

❑ Hasta 1983 toda la insulina utilizada para el tratamiento de

la diabetes era extraída de páncreas de porcino y bovino,
sin embargo, el uso prolongado de este tipo de insulina
provoca, en algunos individuos, una respuesta inmune.

❑ Además, la disponibilidad de páncreas de los animales

mencionados es limitada, por lo que es deseable la
obtención y uso de insulina humana.
HISTORIA
❑ El objetivo sería conseguir
que los genes humanos,
responsables de la
producción de la hormona
insulina se expresará en la
bacteria.
❑ De este modo, las
bacterias producirían
insulina a grandes
velocidades, pudiéndose
escalar el modelo en
tanques de fermentación
para la obtención de
grandes cantidades.
Especificidad: de especie, de individuo dentro
de la especie. De función
Existen dos rutas para la obtención de insulina humana
utilizando microorganismos modificados por ingeniería
genética:
❑ Una de ellas, consiste en producir por separado ambas
cadenas para, posteriormente, asociarlas químicamente.
❑ La otra se basa en la producción de proinsulina que es
procesada hasta insulina madura mediante métodos
enzimáticos.
Aplicación en medicina
❖ La biotecnología tiene diversas
aplicaciones: en la alimentación, la
prevención de enfermedades
hereditarias, la terapía génica y la
producción de sustancias terapéuticas y
la elaboración de vacunas.
❖ A partir del cultivo de microorganismos,
se obtienen importantes sustancias
como la penicilina (extraída de un
hongo), la insulina (extraída de
bacterias-1982).
Aplicación en medicina

❖ Se han obtenido a través de plantas y animales

transgénicos, el factor VIII, que interviene en la coagulación
de la sangre.
❖ Producción de hormonas humanas para tratar
enfermedades carenciales como el enanismo por déficit de
hormona del crecimiento.
❖ Las vacunas se obtienen cultivando virus en células vivas en
el laboratorio, los cuales se matan o se debilitan para
preparar vacunas contra la hepatitis B, contra el Sida y el
paludismo.
BIOTECNOLOGÌA

El desarrollo de la biotecnología ha permitido numerosos

avances en diferentes áreas como la medicina o la
agricultura. Se han desarrollado numerosas técnicas que nos
permiten cambiar parte del genoma de un ser vivo (bacteria,
planta, animal, etc.) con el fin de mejorar, inhibir o modificar
algunas de sus características, obteniendo así en función de
las técnicas utilizadas un transgénico o un organismo editado
genéticamente.
BIOTECNOLOGÌA

Es importante conocer la diferencia entre ambos conceptos

ya que no significan lo mismo. Un organismo transgénico es
aquel al que le hemos añadido un gen externo, por el
contrario, un organismo editado genéticamente es aquel que
ha sufrido un cambio en la secuencia genética, ya sea
eliminando un gen o modificándolo, con el fin de que pueda
inhibirse, aumentar su función o cambiar la función, pero en
ningún momento añadimos genes externos.
BIOTECNOLOGÌA

Actualmente existen una gran variedad de técnicas de edición

genética, pero las principales y más utilizadas son:
✓ CRISPR-Cas9,
✓ TALEN y
✓ ZFN.
Se trata de técnicas que editan genes pero que no añaden
genes externos, por lo que no obtendríamos un organismo
transgénico.
BIOTECNOLOGÌA

El funcionamiento general de las siguientes técnicas de

edición genética se basa en la ruptura de las dos hebras de
ADN con su posterior reparación, momento en el cual se
produce la edición genética deseada. El mecanismo y
aplicación de cada una de ellas es el siguiente.
 Cómo CRISPR, las "tijeras genéticas" que
prometen revolucionar la medicina, fueron
halladas por pura casualidad
El siguiente gran paso se dio en
2012, cuando se descubrió una
forma de alterar esa secuencia de
ADN, modificando las
instrucciones genéticas de la vida.
Se logró a través de una técnica
de edición genética conocida
como CRISPR/Cas9.
La forma más sencilla de
entender CRISPR es imaginar una
tijera genética que permite
recortar una sección de ADN.
 Cómo CRISPR, las "tijeras genéticas" que
prometen revolucionar la medicina, fueron
halladas por pura casualidad
Muchos lo llaman la técnica de "corte y pega" porque permite
alterar una cadena de ADN: al eliminar una parte la cadena se
reconstituye formando una nueva secuencia.

Este procedimiento está revolucionando la ciencia porque

permite reescribir nuestros genes y podría llevar al tratamiento
de enfermedades hereditarias hasta ahora intratables.

Sin embargo, este enorme hito científico surgió de pura

casualidad.
 Cómo CRISPR, las "tijeras genéticas" que
prometen revolucionar la medicina, fueron
halladas por pura casualidad
 Cómo CRISPR, las "tijeras genéticas" que
prometen revolucionar la medicina, fueron
halladas por pura casualidad

https://www.bbc.com/mundo/media-42779518

La tecnología de edición
genética que utiliza "tijeras
moleculares" para alterar una
cadena de ADN.
CRISPR
Las CRISPR, acrónimo en inglés de Clustered
Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats,
o
Repeticiones Palindrómicas Cortas Agrupadas y
Regularmente Espaciadas, se producen en el genoma
de ciertas bacterias, de las que el sistema fue
descubierto.
Cas9 es una endonucleasa asociada a CRISPR (una
enzima), conocida por actuar como “tijeras
moleculares”, que corta y edita, o corrige, en una célula,
el ADN asociado a una enfermedad.
.
 Aplicación de CRISPR en la biomedicina
La buena noticia es que esta novedosa tecnología ha
comenzado a aplicarse en biomedicina y en la investigación
del cáncer para el desarrollo de terapias.
Un ejemplo de ello lo tenemos en el tratamiento de
leucemias en niños y jóvenes.
De esta forma, se puede ‘enseñar’ cómo atacar a las células
tumorales y acabar con la enfermedad. Hasta ahora, se han
conseguido resultados muy esperanzadores.
CRISPR
En concreto, el CRISPR es una región del ADN de algunas
bacterias que actúa como un mecanismo inmunitario frente a
los virus, es decir, las bacterias que sobreviven al ataque
guardan la información de este agresor. Cuando el virus
vuelve a atacar, la bacteria identifica los genes indeseables
gracias a la información ya almacenada y esta memoria le
permite destruir el virus.
 ¿En qué consiste la tecnología CRISPR-Cas9?
https://blog.contraelcancer.es/tecnologia-crispr-cancer/

❑ Conocer cómo surge el descubrimiento de CRISPR también

nos ayuda a entender su función en la naturaleza.
❑ Esta misma técnica es utilizada por los microbios para
protegerse de los virus que puedan atacarlos. Así,
modifican los genes de sus ‘invasores’ para acabar con
ellos.
❑ El estudio del comportamiento de estas bacterias ha
permitido a la ciencia aplicar esta técnica también para
modificar nuestro material genético.
CRISPR

Según el científico José Miguel Mulet,“la tecnología CRISPR

nos permite un paso más adelante ya que nos permite editar
el ADN del propio organismo”.
Esto puede suponer una gran ventaja en el caso de
enfermedades genéticas, ya que “muchas veces son debidas
a cambios mínimos en la secuencia y esta técnica permite
corregirlos”.
 ¿QUÉ ES LA TECNOLOGÍA CRISPR Y CÓMO
ESTÁ AYUDANDO EN LA LUCHA CONTRA EL
CÁNCER?
En los últimos años, la técnica de
edición genética CRISPR-Cas9 se ha
convertido en uno de los avances
contra el cáncer más prometedores. Se
trata de una herramienta molecular
empleada para editar los genes. Es
decir, permite seleccionar un gen
concreto y modificarlo. Gracias a esta
técnica, también conocida como el
‘corta y pega’ genético, se puede
editar el ADN de los humanos para,
entre otras posibilidades, mejorar los
tratamientos en cáncer.
CRISPR

“Hay 230 enfermedades que son consecuencia de una

anomalía genética, y gracias a los maravillosos y
revolucionarios avances en la comprensión del genoma
humano sabemos qué parte de su estructura genética es la
responsable”, explica en esta entrevista el jefe mundial de
innovación de Bayer, Kemal Malik. ”Lo que podemos hacer
con la tecnología CRISPR es reemplazar el ADN erróneo por
ADN bueno”, añade.
CRISPR-Cas9

▪ Es una herramienta que permite la edición genómica de un

sitio específico del ADN de células individuales u organismos
complejos.

▪ En el ADN bacteriano encontramos zonas concretas con

secuencias repetidas denominadas “CRISPR”, entre las
cuales hay ADN vírico. Este ADN vírico procede de
infecciones pasadas en las cuales la bacteria guardó un
fragmento de ADN del virus para poder reconocerlo en las
próximas infecciones y poder defenderse contra el mismo.
CRISPR-Cas9

Estas regiones de ADN se encuentran asociadas a unas

proteínas denominadas “Cas”[1]. Por tanto, CRISPR-Cas9
consta de dos componentes básicos:

1. El “Cas9”: es un enzima que actúa como “tijeras

moleculares”, corta y pega desde bases de nucleótidos
hasta fragmentos de ADN con absoluta precisión.
2. El “CRISPR”: molécula de ARN que ejerce de guía del Cas9
conduciéndole exactamente hasta la base de nucleótidos
que tiene que cortar.
CRISPR-Cas9
Una vez la enzima se sitúa frente a la secuencia de ADN,
puede cortar y pegar nucleótidos con una gran precisión. De
esta forma podemos silenciar un gen que no nos interese o
modificar otros. Por tanto, cuando la bacteria es infectada
por un virus, la forma de actuar es la siguiente:

▪ La bacteria hace una copia del ADN vírico en ARN (1

cadena), este ARN producido lo arma junto a una proteína
(Cas9), ese ARN va a guiar a Cas 9 para buscar una
secuencia complementaria al ARN.
▪ Cuando el virus vuelva a entrar, su ADN será
complementario al fragmento guardado por la bacteria ya
que proviene del mismo virus, de esta forma podrán unirse
y una vez producida la unión, Cas9 se activa y corta el ADN
del virus evitando que infecte la célula.
¿Cómo aplicamos este mecanismo de defensa
en la edición genética?
En primer lugar debemos saber que queremos editar y
conocer la secuencia exacta. Una vez tengamos esta
información realizamos los siguientes pasos:

▪ Construir una secuencia de ARN complementaria a esa

secuencia de interés.
▪ Esta secuencia de ARN guiará a la proteína cas 9 hacia la
secuencia complementaria (secuencia de interés donde
queremos realizar la edición genética), uniéndose a ella y
cas9 la cortará
¿Cómo aplicamos este mecanismo de
defensa en la edición genética?
Una vez cortada la secuencia podemos contemplar
dos escenarios:

▪ La célula puede intentar reparar ese error pero es

propenso a errores produciendo una mutación en ese gen
que lo deshabilita permitiendo eliminar genes específicos.
▪ Se puede modificar CRISPR para que nos permita editar el
código, no solo cortando la cadena sino modificándola
introduciendo la secuencia correcta del gen y sustituirla
por aquella que estaba mal.
¿Cómo se edita un gene utilizando la técnica de
CRISPR/Cas9?
TALEN
▪ Sistemas originalmente
caracterizados por Xantomonas en
donde las proteínas TALE se
secretan cuando infectan una planta
activando en ellas genes que ayudan
a la patogénesis.

▪ Se pueden generar secuencias

personalizadas de TALEs para
reconocer secuencias genómicas
únicas. A estas secuencias les
fusionamos la nucleasa Fokl para
general el dímero funcional de corte
[2]
TALEN
DEDOS DE ZINC (Zinc Fingers, ZFN)

▪ Esta técnica es similar a las dos anteriores, tenemos un

complejo denominado “dedos de zinc” capaces de
reconocer secciones del ADN y cortar la cadena con el fin de
que esa cadena al repararse pueda silenciar el gen de
interés o modificarlo.
▪ Las nucleasas de dedos de zinc se componen de dos partes:
DEDOS DE ZINC (Zinc Fingers, ZFN)

Las nucleasas de dedos de zinc se componen de dos partes:

▪ Los dedos de zinc: Proteínas capaces de reconocer

trinucleotidos de una secuencia especifica del ADN. Cada
una de estas proteínas se unirá a una secuencia formada
por tres nucleótidos. Se pueden manipular para dirigir su
unión a una secuencia en particular.

▪ La nucleasa de Fokl: nucleasa procedente de una bacteria

(Flavobacterium okeanokites) que ha sido modificada para
generar un corte en la secuencia de ADN.
DEDOS DE ZINC
(Zinc Fingers, ZFN)

▪ Los dedos de zinc, fusionados con la nucleasa Folk, trabajan

juntos para cortar secuencias específicas (4).

▪ Posteriormente, se puede producir una delección del ADN

al repararlo o un ADN de donante puede servir como
plantilla para formar ADN homologo a partir del mismo
APLICACIONES

▪ Las aplicaciones de estas técnicas de edición genética son

numerosas.
▪ De forma general, su función es la de silenciar genes que
no sean de interés o modificarlos.
▪ Entre las aplicaciones posibles, se encuentra la corrección
de mutaciones genéticas, eliminar secuencias patógenas de
ADN, insertar genes terapéuticos y activar o desactivar
genes.
APLICACIONES

▪ El ámbito de aplicación se extiende a numerosos sectores

como el de la medicina, la agricultura, la industria
alimentaria o ganadera, etc.
▪ CRISPR-Cas9 es la técnica más utilizada a día de hoy.
▪ Entre sus posibles aplicaciones encontramos la posible
detección del coronavirus SARS-CoV-2, lo cual puede ser de
gran utilidad en el momento en que vivimos.
APLICACIONES
▪ Además, CRISPR puede resultar una herramienta
fundamental en el campo de la industria alimentaria puesto
que uno de los retos a los que se enfrenta la industria es
poder dotar de alimento seguro y suficiente a toda la
población que está en continuo crecimiento.

▪ Con esta herramienta conseguimos evitar pérdidas de

cosechas por numerosas plagas haciendo a las plantas más
resistentes a las mismas, así como conseguir un mayor
volumen de alimentos en cada cosecha, lo cual reduciría el
impacto ambiental de la agricultura debido a que en una
misma superficie obtenemos mayor cantidad de alimentos
necesitando, por tanto, menor extensiones de terreno
destinadas al cultivo.
APLICACIONES
▪ El medio ambiente es otro campo de interés hoy en día, y
CRISPR también puede suponer una herramienta útil en
este aspecto puesto que editando genéticamente algunas
plantas podemos conseguir que sean capaces de crecer en
terrenos más áridos o con menor cantidad de agua.
No obstante, CRISPR cuenta con varias
limitaciones.

▪ En el tratamiento de enfermedades en seres humanos,

Mora y van Wely subrayan que el propio cuerpo es un
obstáculo, pues “actúa de barrera adicional contra la
introducción de proteínas y ADN ajenos”.

▪ Hay además dificultades técnicas como la pérdida de

eficacia de CRISPR cuando aumenta la distancia entre dos
sitios diana, lo que sucede en el caso de los mamíferos
debido a la longitud de sus genes
No obstante, CRISPR cuenta con varias
limitaciones

▪ Otro problema es que la manipulación prolongada de

células en una incubadora puede “causar cambios
genómicos imprevistos”, lo que conlleva el riesgo de
desarrollar cáncer en las células trasplantadas.

▪ Así, “los debates sobre el alcance de las mutaciones

secundarias durante la edición genética probablemente
ocuparán a varias generaciones de investigadores”.
Bibliografía

▪ [1] Concepción-Hernández, M. (2018). CRISPR/Cas:

aplicaciones y perspectivas para el mejoramiento genético
de plantas. Biotecnología Vegetal, 18(3).

▪ [2] Dr. Yuri Jorge Peña Ramírez. (2018). EDICIÓN DE

GENOMAS CON NUCLEASAS SITIO-DIRIGIDAS. conacyt.gob

▪ Cole, K. D., & Tellez, C. M. (2002). Separation of large

circular DNA by electrophoresis in agarose gels.
Biotechnology progress, 18(1), 82-87
https://www.youtube.com/watch?v=s0afsd37G_U

¡Gracias por su atención !