UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL

FACULTAD PILOTO DE ODONTOLOGÍA

ASIGNATURA:
BIOLOGÍA CELULAR Y GENÉTICA

TEMA:
AMPLIFICACIÓN DEL ADN POR TÉCNICAS
DE REACCIÓN EN CADENA POLIMERASA
ESTUDIANTE:
EMILY SALAZAR LUCIO

DOCENTE:
DR. JESÚS LOOR ALBAN

GUAYAQUIL-ECUADOR 2020-2021
 AMPLIFICACIÓN DEL ADN POR TÉCNICAS DE REACCIÓN EN CADENA
POLIMERASA

La reacción en cadena de la polimerasa (PCR) es una técnica de laboratorio utilizada para

amplificar secuencias de ADN. El método utiliza secuencias cortas de ADN llamados cebadores
para seleccionar la parte del genoma a amplificar. La temperatura de la muestra se sube y se
baja repetidamente para ayudar a la enzima de replicación del ADN a duplicar la secuencia del
ADN que está siendo copiada. Con esta técnica se pueden producir un billón de copias de la
secuencia en estudio en sólo unas pocas horas.

PCR, o la reacción en cadena de la polimerasa, es una reacción química que los biólogos
moleculares utilizan para amplificar (crear copias) fragmentos de ADN. Esta reacción permite
que unos pocos fragmentos de ADN se repliquen en millones o miles de millones de copias. La
amplificación del ADN nos permite estudiar la molécula del ADN en detalle en el laboratorio.

 La reacción en cadena de la polimerasa, o PCR, es una técnica para hacer muchas

copias de una determinada región de ADN in vitro (en un tubo de ensayo en lugar de un
organismo).
 La PCR depende de una ADN polimerasa termoestable, la Taq polimerasa, y requiere
de cebadores de ADN diseñados específicamente para la región de ADN de interés.
 En la PCR, la reacción se somete repetidamente a un ciclo de cambios de temperatura
que permiten la producción de muchas copias de la región blanca.
 La PCR tiene muchas aplicaciones en la investigación y en la práctica. Se utiliza de
forma rutinaria en la clonación de ADN, el diagnóstico médico y el análisis forense de
ADN.
Por lo general, el objetivo de la PCR es producir suficiente ADN de la región blanco para que
pueda analizarse o usarse de alguna otra manera. Por ejemplo, el ADN amplificado por PCR se
puede secuenciar, visualizar por electroforesis en gel o clonar en un plásmido para otros
experimentos.
La PCR se utiliza en muchas áreas de la biología y la medicina, como la investigación en
biología molecular, el diagnóstico médico e incluso algunas ramas de la ecología.

La Taq polimerasa
Al igual que la replicación de ADN en un organismo, la PCR requiere de una enzima ADN
polimerasa que produzca nuevas cadenas de ADN mediante el uso de las cadenas existentes
como molde. La ADN polimerasa que normalmente se utiliza en la PCR se llama Taq
polimerasa, por la bacteria tolerante al calor de la que se aisló (Thermus aquaticus).

Cebadores para PCR

Al igual que otras ADN polimerasas, la Taq polimerasa solo puede hacer ADN si hay un
cebador, una corta secuencia de nucleótidos que proporciona un punto de partida para la síntesis
de ADN. En una reacción de PCR, la región de ADN que será copiada, o amplificada, se
determina por los cebadores que él o la investigadora elijan.
Los cebadores para PCR son pedazos cortos de ADN de cadena sencilla, generalmente de unos
202020 nucleótidos de longitud. En cada reacción de PCR se utilizan dos cebadores que están
diseñados para flanquear la región blanca (la región que debe ser copiada). Es decir, les agregan
secuencias que harán que se unan a cadenas opuestas del molde de ADN solo en los extremos
de la región a copiar. Los cebadores se unen al molde mediante complementariedad de bases.

Los pasos de la PCR

Los ingredientes clave para una reacción de PCR son Taq polimerasa, cebadores, ADN molde y
nucleótidos (los bloques básicos del ADN). Los ingredientes se colocan en un tubo, junto con
los cofactores que necesite la enzima, y se someten a ciclos repetidos de calentamiento y
enfriamiento que permiten la síntesis del ADN.
Los pasos básicos son:
1. Desnaturalización (96 °C): la reacción se calienta bastante para separar, o
desnaturalizar, las cadenas de ADN. Esto proporciona los moldes de cadena sencilla
para el siguiente paso.
2. Templado (55-65°C): la reacción se enfría para que los cebadores puedan unirse a sus
secuencias complementarias en el molde de ADN de cadena sencilla.
3. Extensión (72°C): la temperatura de la reacción se eleva para que la Taq polimerasa
extienda los cebadores y sintetice así nuevas cadenas de ADN.

Este ciclo se repite 25-35 veces en una reacción de PCR típica, que generalmente tarda 2 - 4
horas, según la longitud de la región de ADN que se copia. Si la reacción es eficiente (funciona
bien), puede producir miles de millones de copias a partir de una o unas cuantas copias de la
región blanco.
Eso es porque no solo se usa el ADN original como molde en cada ciclo. En realidad, el nuevo
ADN que se produce en una ronda puede servir como molde en la siguiente ronda de síntesis de
ADN. Hay muchas copias de los cebadores y muchas moléculas de Taq polimerasa flotando en
la reacción, por lo que el número de moléculas de ADN casi puede duplicarse en cada ciclo. La
siguiente imagen muestra este patrón de crecimiento exponencial.
 Uso de la electroforesis en gel para visualizar los resultados de una PCR
Habitualmente, los resultados de una reacción de PCR se visualizan (se hacen visibles) al usar
electroforesis en gel. La electroforesis en gel es una técnica en la que una corriente eléctrica
impulsa fragmentos de ADN a través de una matriz de gel y los fragmentos de ADN se separan
según su tamaño. Típicamente se incluye un estándar, o marcador de peso molecular, para que
pueda determinarse el tamaño de los fragmentos en la muestra de PCR.
Los fragmentos de ADN de la misma longitud forman
una "banda" en el gel que se puede identificar a
simple vista si el gel se tiñe con un pigmento que se
una al ADN. Por ejemplo, una reacción de PCR que
produce un fragmento de 400400400 pares de bases
(pb) se vería así en un gel
Una banda de ADN contiene muchas, muchas copias
de la región blanco de ADN, no solo una o unas
cuantas copias. Dado que el ADN es microscópico,
deben existir muchas copias de este para poder verlo
a simple vista. Esto es una parte importante de por
qué la PCR es una herramienta importante: produce
suficientes copias de una secuencia de ADN para
poder ver o manipular esa región de ADN.

Aplicaciones de la PCR
Mediante el uso de la PCR, una secuencia de ADN se puede amplificar millones o miles de
millones de veces y producirá suficientes copias de ADN para que se analicen mediante otras
técnicas. Por ejemplo, el ADN se puede visualizar por electroforesis en gel, enviar a secuenciar
o digerir con enzimas de restricción y clonar en un plásmido.
La PCR se utiliza en muchos laboratorios de investigación, y también tiene aplicaciones
prácticas en medicina forense, pruebas genéticas y diagnósticas. Por ejemplo, la PCR se utiliza
para amplificar genes asociados con trastornos genéticos a partir del ADN de los pacientes (o de
ADN fetal, en el caso de pruebas prenatales). La PCR también puede utilizarse para detectar el
ADN de una bacteria o un virus en el cuerpo de un paciente: si el patógeno está presente, es
posible amplificar regiones de su ADN de una muestra de sangre o tejido.
 Otros tipos de PCR
PCR anidada: se trata de una variante de la PCR básica que utiliza dos pares de cebadores. En
un primer paso, se realiza la amplificación de una región del genoma, para después concretar
más la región mediante una segunda amplificación más específica. Esta PCR se utiliza para
amplificar fragmentos muy específicos del genoma.
RT-PCR: Esta técnica convierte el ARN de una muestra en ADN. Para ello utiliza la
transcriptasa inversa, una enzima utilizada por los retrovirus Se utiliza para múltiples objetivos.
Por ejemplo se puede utilizar para saber si un gen se está expresando en una muestra biológica.
También se utiliza para genotipar diferentes virus de ARN, como el SARS-Co-V o el VIH.
PCR cuantitativa: es una PCR que permite medir en tiempo real la cantidad de fragmentos que
se van produciendo. Se utiliza a menudo para analizar la expresión de los genes.
PCR múltiple: en este tipo de PCR se realizan amplificaciones simultáneas de más de un
fragmento de ADN. Para ello, se utilizan varios cebadores diferentes en una misma reacción.
PCR in situ: esta PCR se realiza en células o tejidos. Se utiliza para poder detectar secuencias
de ADN en el interior de las células que no son detectables mediante otras técnicas.
PCR digital: es una de las últimas generaciones en técnicas de amplificación de ADN. Está
basada en la separación de cada muestra en múltiples particiones (microgotas), de forma que la
reacción de amplificación se produce de forma independiente cada una de ellas.
Estos solo son algunos de los tipos más conocidos de PCR, aunque también existen muchas
otras variaciones de la PCR, como la PCR asimétrica, o la PCR específica de alelo, que
consiguen diferentes resultados a partir de las muestras de ADN obtenidas.

BIBLIOGRAFÍA

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