USO Y APLICACIONES DE LA PCR
RESUMEN No hay duda de que la "reacción en
Las técnicas PCR son utilizadas para
estudiar secuencias de ADN, esta técnica
es muy útil para la biología, química y la
medicina, en este artículo se estudió la
historia que ha tenido esta técnica la cual
ha sido muy útil al pasar de los años ya
que evolucionó la medicina y la biología,
en la medicina con diferentes estudios se
logró determinar enfermedades genéticas
y un gran avance que fue el de poder
identificar la paternidad. Se estudió la
reacción en cadena la cual es la
tecnología en cuestión de PCR que
revolucionó esta técnica ya que están
sintetizando dos hebras de ADN a partir
de otras.
Antecedentes
La PCR fue uno de los descubrimientos
más relevantes , debido a que marcó el
inicio de una nueva era en el estudio de
los ácidos nucleicos.Este descubrimiento
se llevó a cabo por Kary Mullis en 1983,
trabajo que lo llevó a ser merecedor de un
premio Nobel en 1993 , este científico
miembro de la cetus corporation , concibió
la PCR como un método para copiar ADN
y sintetizar grandes cantidades de un
ADN en específico .[1]
A Partir de este descubrimiento se
comenzó a generar un gran interés en el
desarrollo de nuevos métodos que sean
sensibles , específicos y de fácil
reproducción para el estudio del ADN. A
raíz de esto se desarrollaron nuevas
tecnologías, como lo es la reacción en
cadena de la polimerasa , desarrollada
por Kary Mullis en 1985 .
Introducción.
cadena" es la tecnología revolucionaria
más importante. La PCR se basa en la
replicación celular, donde varias proteínas
juegan un papel. Sintetizar dos nuevas
hebras de ADN a partir de la otra, sus
funciones son las siguientes: molde. Se
han encontrado al menos 12 proteínas
involucradas en la replicación en
procariotas.
Estas proteínas tienen diferentes
actividades, por ejemplo: 1) Identificar el
origen de la replicación; 2) Expandir Doble
hélice; 3) Estabilidad de la estructura
desplegada; 4) Generación Cadena de
arranque complementaria con 3 extremos
libres El iniciador de la ADN polimerasa
inicia su actividad catalítica; 5) Desenrollar
hace que la horquilla del replicador se
mueva hacia adelante; 6) El paso final
Ensamblaje de dos hebras
complementarias; 7) Reconocimiento de
sitios de terminación y 8)
Superenrollamiento de dos nuevas
moléculas ADN
¿Qué es la PCR?
Al hablar de PCR nos referimos a la
reacción en cadena de la polimerasa, esta
es una técnica mayormente utilizada en
biología molecular con el fin de amplificar
el ADN , esta es llevada a cabo en un
proceso enzimático in vitro , la cual
amplifica millones de veces el material
genético durante varios ciclos repetidos
en los que la secuencia es copiada. Esta
reacción se encuentra basada en el
proceso natural de la replicación del
ADN, se aprovecha la actividad
enzimática del ADN polimerasa , la cual
tiene la capacidad de sintetizar el ADN
de las células.[2]
¿Qué elementos químicos se necesitan
para el procesamiento de una PCR?
El procesamiento de la reacción es
necesario un molde de ADN o ADNc (adn
Complementario), este último proviene del
ARNm (ácido ARN mensajero de rt-pcr
(transcripción inversa-pcr). Esta
conversión se logra mediante una enzima
llamada transcriptasa inversa, que puede
convertir ADNc a partir de ARNm .
Además, se sabe que se necesitan
enzimas para sintetizar el ADN,como ADN
polimerasa Taq, un conjunto de
oligonucleótidos conocido como cebador
que inicia una reacción de síntesis,
desoxirribonucleótido trifosfato Libre
(dntps: adenina, timina, citosina, guanina),
ion Mg + (magnesio) utilizado como
cofactor, generalmente sulfato de
magnesio, tampón o H2 O (agua). [4]
¿Cuáles son los pasos de la PCR?
La secuencia de PCR se puede mirar en
tres pasos principales (Figura 1):
Figura 1. Pasos de la PCR
➢ Desnaturalización: Este paso
implica la adición de calor
necesario (95°C) durante un
tiempo promedio (20 a 30
segundos) con el fin de separar las
dos hebras de la molécula de
ADN.
➢ Hibridación: Esto es cuando las
dos hebras de ADN que ahora han
sido separadas por ese calor se
enfriaran y se unirán mediante los
primers, la temperatura para este
paso debe permitir que los primers
se unan al segmento específico de
ADN que desea amplificar (50 - 60
°C), es decir, hacer copias. En
esta etapa los primers se alínean
al extremo 3’ de la cadena molde,
para lo cual se necesitan dos
secuencias diferentes, una
denominada forward (sentido) y
otra reverse (antisentido).
➢ Extensión: el ADN polimerasa
comenzará a trabajar en ambas
hebras y utilizará los nucleótidos
del ADN como material de
construcción para amplificar el
ADN. La enzima más usada es la
Taq ADN polimerasa, con
capacidad de soportar
temperaturas muy altas, la cual
proviene de una bacteria termófila
llamada Thermophilus aquaticus.
En esta etapa la Taq polimerasa
actúa sobre el complejo
templado-primers a una
temperatura óptima de 72 °C, y a
una velocidad muy rápida agrega
los desoxirribonucleótidos libres
complementarios creando así las
cadenas completas de ADN.
Finalmente al finalizar cada ciclo se
habrán duplicado dos cadenas de ADN a
partir de una, y de esta forma la
replicación de una cadena blanco por
cada ciclo se realiza de manera
exponencial y logarítmica. Todo esto, por
supuesto, se realiza de forma
automatizada. [6]
Al final del proceso de la PCR, es
importante realizar la correspondiente
interpretación del producto obtenido. La
manera más común de hacerlo es con
ayuda de Electroforesis, ya que con
ayuda de esta es posible visualizar las
bandas en un campo electromagnético
que en este caso serán los ácidos
nucleicos y cuando estos están sobre el
gel se irán hacia el polo positivo. Además
se agrega bromuro de etidio, esta última
molécula se intercala en las cadenas de
ADN, y cuando éste es estimulado por la
luz UV emite una señal, lo cual permite
visualizarlo. Después de todo esto, se
termina el proceso con una foto digital del
gel de agarosa expuesto a la luz UV y un
procesador de imagen se encargará de
analizar las bandas.
PCR en tiempo real
Para mejorar la tecnología PCR, los
investigadores modificaron la tecnología
original para proporcionar una tecnología
más innovadora. Pcr en tiempo real,
porque utiliza un sistema cuantitativo en
lugar del análisis cualitativo de datos
como las técnicas habituales.
En 1992, Higuchi et al. fueron los primeros
en realizar PCR en tiempo real, donde lo
que hicieron fue videograbar en tiempo
real la incorporación de bromuro de etidio
al ADN durante cada ciclo de PCR bajo el
estímulo de la luz UV. Actualmente el
objetivo de la PCR en tiempo real es
detectar y cuantificar secuencias
específicas de ADN mediante el uso de
reporteros fluorescentes.
El reportero de fluorescencia no
específico más usado es Syber Green,
que tiene afinidad por el ADN de doble
hebra, por lo que se inserta en ella.
Cuando se oxida con una longitud de
onda de 480 nm, produce fluorescencia,
que se captura y se extiende a cada ciclo.
Los métodos específicos siguen el
principio conocido como “transferencia de
energía de resonancia fluorescente”
(FRET). Este método transfiere energía a
un receptor, o “quencher”, y se puede
llevar a cabo por hidrólisis o hibridación.
El último paso es capturar la señal de
emisión de fluorescencia, lo cual se
realiza mediante un filtro que permite que
la longitud de onda de la luz pase a través
del filtro, y esta información se captura en
el software, que generará una imagen
ampliada para observar el número de
ciclos y fluorescencia.
Algunas aplicaciones de la PCR
● La PCR es una técnica que es
utilizada en la biología la cual tiene
la función de conseguir una gran
cantidad de copias de ADN en un
fragmento determinado
● También la PCR se utiliza para la
clonación del ADN en plásmidos
bacterianos o virus que se usan
como vectores esto ayuda para el
desarrollo de las terapias
genéticas.
● La técnica de PCR también es
utilizada para identificar
enfermedades hereditarias y así
poder tratar dichas enfermedades
o prevenirlas, también es utilizado
para identificar patógenos.
● Las técnicas PCR son importantes
en la ciencia ya que son las que
ayudan a realizar las pruebas de
paternidad y es muy útil para los
estudios forenses para lograr
identificar diferentes objetos de
estudio
 Conclusiones tica/dcm-2015/dcm153e.pdf> [Accessed 17
Se identificaron los beneficios que tienen May 2021].
las técnicas de PCR las cuales han sido [6] Maria Buono, 2012, Pasos para PCR.
de gran ayuda al pasar de los años por el Available at:
gran aporte que han tenido en diferentes https://es.slideshare.net/mpbu3n0/pasos-pa
ciencias, por otro lado se concluyeron los
ra-pcr
pasos que se tienen al realizar esta
técnica los cuales son desnaturalización,
hibridación y extensión, estos pasos son
indispensables para poder seguir con la
duplicación del ADN y analizar los
resultados por el método de electroforesis
con el fin de analizar las bandas
obtenidas.

Referencias
[1] Diagnostics. 2021. La historia de la PCR.
[online] Available at:
<https://diagnostics.roche.com/es/es/article-
listing/history-of-pcr.html#:~:text=En%20198
3%2C%20Kary%20Mullis%2C%20PhD,de%20
un%20ADN%20objetivo%20espec%C3%ADfi
co.&text=En%201986%2C%20los%20cient%
C3%ADficos%20de,halla%20en%20las%20pr
imaveras%20c%C3%A1lidas.> [Accessed 17
May 2021].
[2] Principal, P., 2021. Prueba de proteína C
reactiva (PCR): Prueba de laboratorio de
MedlinePlus. [online] Medlineplus.gov.
Available at:
<https://medlineplus.gov/spanish/pruebas-d
e-laboratorio/prueba-de-proteina-c-reactiva-
pcr/> [Accessed 17 May 2021].
[3]Diagnostics. 2021. ¿Qué es la PCR?.
[online] Available at:
<https://diagnostics.roche.com/es/es/article-
listing/what-is-pcr.html> [Accessed 17 May
2021].
[4]Www2.inecc.gob.mx. 2021. [online]
Available at:
<http://www2.inecc.gob.mx/publicaciones2/l
ibros/710/pcr.pdf> [Accessed 17 May 2021].
[5]Medigraphic.com. 2021. [online] Available
at:
<https://www.medigraphic.com/pdfs/cosme