UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL

FACULTA DE CIENCIAS QUÍMICAS

BIOQUÍMICA Y FARMACIA SEMESTRE III CII

ESTUDIANTE: Rodríguez Coronel Jaroll Lennyn GRUPO: 3

ASIGNATURA: Biología molecular y genética
TEMA: Fundamentos de la PCR y de la PCR en tiempo real
DOCENTE: Ing. Villegas Villegas Milton Fernando FECHA: 16/3/2022

PCR
La Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR por sus siglas en inglés) es una reacción
enzimática in vitro que amplifica millones de veces una secuencia específica de ADN a
lo largo de diversos ciclos repetidos en los cuales la secuencia blanca es copiada
fielmente. Para eso, la actitud aprovecha la actividad de la enzima ADN polimerasa que
tiene la función de sintetizar naturalmente el ADN en las células.
Los elementos empleados en la reacción son:
• La enzima, los oligonucleótidos o primers
• Los desoxirribonucleótidos trifosfatados (dNTPs: adenina, timina, citosina y
guanina)
• El ión magnesio (Mg+)
• Una solución amortiguadora o buffer
• Agua destilada.
• El templado o molde (ADN o ADNc)

Todos los elementos antes mencionados interactúan en tres etapas principales de las que
se compone la PCR:
1. Desnaturalización: En este periodo, las cadenas de ADN son calentadas y
separadas a una temperatura de 95 °C a lo largo de 20-30 segundos; la era es
dependiente de la sucesión del templado, o sea, si la proporción de G-C es alta, va
a ser primordial más tiempo para romper sus uniones ya que el apareamiento de
estas bases se conforma por 3 enlaces, uno más que las bases de A-T.
2. Hibridación: En esta etapa, los primers se alinean al extremo 3’ del templado
previamente separado e hibridan con su secuencia complementaria.
3. Extensión: En este periodo, la Taq polimerasa actúa sobre el complejo templado-
primers y comienza su funcionalidad catalítica a una rapidez bastante instantánea;
añade dNTP’s complementarios para generar las cadenas enteras de ADN.
PRUEBAS PCR EN TIEMPO REAL
Los primeros que sentaron las bases para desarrollar la PCR en tiempo real fueron
Higuchi y ayudantes, en 1992, al videograbar en tiempo real la unión de bromuro de etidio
al ADN a lo largo de cada periodo de la PCR elaborada bajo luz UV. A partir de entonces,
la finalidad de la PCR en tiempo real fue identificar y cuantificar las secuencias concretas
de ácidos nucleicos por medio de la utilización de reporteros fluorescentes en la actitud.
El concepto en tiempo real tiene relación con que la detección de los productos
amplificados ocurre en cada periodo de la actitud. Por su lado, el concepto cuantitativo
se refiere a que es viable cuantificar la proporción de ADN en la muestra.
En la actualidad, la PCR en tiempo real es el procedimiento más sensible para identificar
y cuantificar los ácidos nucleicos. Aun teniendo una porción bastante pequeña de
templado, el sistema asegura una alta sensibilidad y eficiencia.
Los componentes químicos en la PCR en tiempo real son los mismos usados en la PCR
punto final, solamente que la enzima, dNTP’s, Miligramo +, el buffer y el sistema
reportero de fluorescencia se venden unidos en una solución famosa como «Máster mix»,
el agua es facilitada por separado y además es independiente de nucleasas. Los primers
tienen que ser diseñados en especial para asegurar una alta especificidad.