La PCR, siglas en inglés de 'La Reacción en cadena de la Polimerasa (PCR) fue

desarrollada por Kary Mullis entre 1983 y 1985, quien se desempeñaba trabajando
en la compañía Cetus y recibió el premio Nobel en Química por este logro en 1993
fue reconocida como uno de los avances científicos más importantes del siglo XX
la reacción en cadena de las polimerasas (PCR) es una manera rápida de crear
copias de ADN a partir de una sola hebra original en tan solo horas. El ADN
copiado puede usarse de manera fiable en un sin número de pruebas para
diagnosticar y monitorear enfermedades. Esta técnica tuvo un alto impacto en
todos los campos relacionados con la biología molecular.

El PCR se presentó por primera vez en 1985 en la reunión anual de la Sociedad

norteamericana de genética humana. Durante ese mismo año, Science, una
revista de la Asociación norteamericana para el avance de la ciencia, publicó los
resultados en la primera publicación del proceso.

Dos avances significativos han permitido que la PCR se convierta en la tecnología

que conocemos hoy en día:

 La polimerasa Taq
 El ciclador térmico.

En 1986, los científicos de Cetus aislaron la polimerasa Taq a partir de Thermus

aquaticus, una bacteria que se halla en las primaveras cálidas. Puesto que Taq
podía soportar altas temperaturas, se eliminó la necesidad de intervención
humana durante la reacción con la consiguiente facilitación y el acortamiento del
proceso. Sin una enzima resistente al calor como la polimerasa Taq, la PCR no
podría utilizarse a gran escala, ya que el proceso habría sido demasiado
complicado.

Antes de Taq, se utilizó la ADN-polimerasa de E. coli, una enzima que no podía

soportar un calentamiento y enfriamiento rápidos, en el segundo paso de la PCR.
Mediante E. coli, la polimerasa se reemplazaba manualmente en cada paso de la
reacción conforme se degradaba por el calor.

En 1987, Perkin Elmer, otra compañía biotecnológica de EE. UU., lanzó un

ciclador térmico, un instrumento programado para regular la temperatura de una
reacción, de modo que calienta o enfría las muestras según sea necesario. De
nuevo, este avance minimizó la interacción humana en la reacción, lo que da lugar
a un proceso elegante, eficaz y facilitado.

La reacción en cadena de la polimerasa es una reacción enzimática in vitro que

amplifica millones de veces una secuencia específica de ADN durante varios
ciclos repetidos en los que la secuencia blanca es copiada fielmente. Para ello, la
reacción aprovecha la actividad de la enzima ADN polimerasa que tiene la
capacidad de sintetizar naturalmente el ADN en las células.

El ADN es el elemento principal que se encuentra en la PCR, su naturaleza

química ofrece ventajas para su manipulación. Es importante recordar que el ADN
está formado por tres componentes los cuales son azúcar (desoxirribosa), un
grupo fosfato y una base nitrogenada (adenina, timina, guanina o citosina).

La complementariedad entre las bases está dada por puentes de hidrógeno e

interacciones hidrofóbicas, generando estabilidad a la doble hélice, la carga
eléctrica del ADN es negativa y está dada por los grupos fosfatos. En la PCR, el
templado son las cadenas de ADN que se separan y funcionan como molde para
que la enzima sintetice las nuevas cadenas que llevan la secuencia blanco de
interés. Por su parte, el ADN polimerasa se encarga de la catálisis de la reacción,
sintetizando las nuevas cadenas de ADN que llevan la secuencia blanca.

La enzima más usada con frecuencia se llama Taq ADN polimerasa, que proviene
de una bacteria termófila llamada Thermus aquaticus, la cual vive en condiciones
de temperatura muy altas y por eso su ADN polimerasa es capaz de soportar ese
tipo de temperaturas. El rasgo que distingue a esta enzima bacteriana de otros
ADN polimerasas de otros organismos es su capacidad para mantener su
funcionalidad a temperaturas altas, por lo que se le considera una enzima
termoestable. También hay otras enzimas que se utilizan como la Vent, obtenida
de la bacteria Thermococcuslitoralis.

Normalmente, casi todas las enzimas que se venden comercialmente son

eficientes y generalmente cuando fallan lo hacen por una manipulación incorrecta
del usuario. Para que la enzima funcione con alta especificidad y la reacción
transcurra exitosamente, también se necesita de los elementos ya mencionados
como primers, dNTPs, Mg +, buffer y H2O. Los primers son secuencias de
oligonucleótidos que flanquean y delimitan la secuencia blanca que se desea
amplificar y son complementarios a ésta. Generalmente su tamaño oscila entre 15-
25 pares de bases y la cantidad de G-C no debe ser más del 55% de la secuencia.
Si no se respetan estas reglas, existe la posibilidad de la formación de dímeros de
primers, es decir, de productos inespecíficos. Esto repercutiría en el rendimiento
de la reacción, así como en la especificidad del producto esperado. Son dos
secuencias diferentes de primers las que se utilizan en la PCR, una denominada
«forward» o sentido y otra «reward» o antisentido; ambas deben estar diseñadas
para que hibriden con el templado y las cadenas de ADN puedan ser extendidas
por la Taq polimerasa en dirección 5’-3 (como sucede endógenamente).

La PCR se lleva a cabo en tres etapas principales las cuales son

desnaturalización, hibridación y extensión.
La desnaturalización se da cuando las cadenas de ADN son calentadas y
separadas a una temperatura de 95 °C durante un intervalo de tiempo de 20-30
segundos, el tiempo está dado en relación a la secuencia del templado, esto
quiere decir cuando la cantidad de G-C es alta será necesario más tiempo para
romper las uniones esto debido a que el apareamiento de estas bases se
encuentra formado por 3 enlaces, uno más que en las bases A-T. al final de esta
etapa se podrán obtener cadenas separadas que servirán como templado de la
siguiente etapa.
La hibridación es la segunda etapa de la PCR en esta los primers se alinean a
extremo del templado que previamente se separó en la etapa anterior e hibridan
con su secuencia complementaria. Para que sea formado el complejo templado-
primers, es importante que la temperatura de hibridación sea optima, la cual oscila
entre 50-60 °C. si el diseño de los primers es el correcto y la temperatura es la
adecuada, la estabilidad y la especificidad del complejo será eficiente.
La extensión es la etapa, en la cual la Taq polimerasa actúa sobre el complejo
templado-primers y empieza su función catalítica a una velocidad muy rápida;
agrega dNTP’s complementarios para crear las cadenas completas de ADN. La
extensión de las cadenas es en dirección de la síntesis del ADN, es decir, de 5’ a
3’. La temperatura óptima para la reacción es de 72 °C, ya que a esa temperatura
la enzima es funcional. Al final del ciclo, se habrán formado los amplicones con un
tamaño dictado por el número total de pares de bases (pb) que deberá ser
conocido por el investigador.
Las PCR (siglas en inglés de “Reacción en Cadena de la Polimersa”), son un tipo
de pruebas de diagnóstico que se llevan utilizando durante años en diferentes
crisis de salud pública relacionadas con enfermedades infecciosas. Estas pruebas
se están usando desde los primeros días del estallido de la pandemia de
coronavirus en España. Sin embargo, los test rápidos se han incorporado
recientemente y, como su nombre indica, son más rápidos y sencillos. Ambos
sirven para comprobar si una persona está infectada o no por el Coronavirus
(covid-19).
Al realizar una prueba de diagnóstico mediante PCR, lo que permite detectar es
un fragmento del material genético de un patógeno o microorganismo. La PCR,
cuyo uso es común y rutinario en los laboratorios de Microbiología de hospitales,
centros de investigación y universidades, se basa en las características de
estabilidad al calor de una enzima polimerasa. 
Entre las diferencias más esenciales tenemos que los Test rápidos se pueden
realizar en domicilios y con cortos periodos de tiempo para saber si la persona
está infectada o no, son portátiles similares a pruebas de embarazo. Sin embargo,
el diagnostico por PCR es más complejo con amplios conocimientos en el ramo
del bioanalisis y la prueba puede tardar horas para saber si la persona está
infectada o no.