“Año de la unidad, la paz y el desarrollo”

UNIVERSIDAD NACIONAL DE MOQUEGUA

ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA AMBIENTAL

INFORME N°3:
“MANEJO DEL TERMOCICLADOR - T100 PCR Thermal Cycler -
BIORAD - Laboratorio de Biología Molecular y Biotecnología - UNAM /
ILO”

CURSO:

Biotecnología

ESTUDIANTE:

● Vela Yaicate, Sintya Marina- 2020205055

DOCENTE:

Dr. Soto Gonzáles, Hebert Hernán

Fecha:

22-09-2023

ILO - MOQUEGUA

2023
Tabla de contenido

I. INTRODUCCIÓN .................................................................................................. 3

II. OBJETIVOS ............................................................................................................. 3

1. Objetivo general .......................................................................................... 3

2. Objetivos específicos ................................................................................... 3

III. METODOLOGÍA ................................................................................................... 4

1. Materiales: ................................................................................................... 4

2. Fases: ........................................................................................................... 5

3. Programación del Termociclador T100 PCR: ............................................. 7

IV. CONCLUSIÓN ........................................................................................................ 7

V. BIBLIOGRAFÍA ..................................................................................................... 8
 I. INTRODUCCIÓN

El termociclador es un equipo, que permite replicar el segmento de ADN de manera

automática siguiendo el Proceso de Reacción en Cadena de la Polimerasa, también conocido

como PCR, por las siglas en inglés de Polymerase Chain Reaction. Este equipo es necesario

en todos los laboratorios de Biología Molecular e Ingeniería Genética.

La PCR (reacción en cadena de la polimerasa) consiste en la amplificación de

fragmentos de ADN mediante el uso de la enzima ADN polimerasa. Esta enzima tiene

capacidad para sintetizar nuevas cadenas de ADN mediante la incorporación de bases

nucleotídicas, a partir de una secuencia corta conocida (oligo, cebador o primer) que híbrida de

forma complementaria con uno de los extremos de la hebra.

Los actuales termocicladores son capaces de realizar rápidos cambios de temperatura

que permiten realizar los tres pasos de la reacción de PCR de forma cíclica: desnaturalización

del ADN, alineamiento o unión del cebador con la secuencia de ADN complementaria y

extensión de la cadena. Desde la creación de la técnica de PCR, sus aplicaciones se multiplican

día a día y su gran versatilidad promete más y nuevos usos en los más diversos campos de la

biología y la medicina.

II. OBJETIVOS

1. Objetivo general

○ Conocer y comprender el funcionamiento correcto del termociclador T100 PCR

Thermal Cycler - BIORAD y sus principales características.

2. Objetivos específicos
○ Aprender a manejar y preparar una PCR.
○ Identificar cómo los factores cambiantes, como la temperatura o la concentración
de uno de los componentes de la reacción, afectarán los resultados de la PCR.
III. METODOLOGÍA

1. Materiales:

Primer para PCR

Termociclador T100 PCR

Pipeta multicanal
Gradilla con tubos individualizados

Placa de tubo individualizado

 2. Fases:
La PCR depende de un proceso que ocurre de forma permanente en los sistemas vivos:

➢ LA DUPLICACIÓN DE ADN:

Por medio de ciclos de:

- Desnaturalización
- Copiado
- Reapareamiento

El método se basa en la repetición cíclica de tres reacciones sucesivas:

1. Desnaturalización: La solución se calienta para que las dos cadenas de ADN se

separen. La temperatura a la cual la doble hélice se desnaturaliza depende tanto del

largo del fragmento como del contenido de GC, mientras mayor sea el contenido de

GC, mayor debe ser la temperatura de desnaturalización, y mientras mayor sea el largo

del ADN molde, mayor debe ser el tiempo de desnaturalización. En general la

temperatura utilizada es 94° C, ya que a lo largo de 30| ciclos es la máxima temperatura

que las enzimas comúnmente usadas pueden soportar sin una pérdida sensible de

actividad temperatura que las enzimas comúnmente usadas pueden soportar sin una

pérdida sensible de actividad para una PCR estándar se recomiendan 30 a 45 segundos

a 94 grados.

2. Hibridación o Annealing (Ta): En la que la temperatura se reduce para permitir que

los primers se apareen por complementariedad de bases con el ADN molde, la

temperatura de hibridación es crítica, dado que una alta temperatura de Annealing

 impedirá que el primer aparee con el ADN molde, mientras que una baja temperatura

favorecerá el apareamiento consecuencias que no son 100% complementarias dando

como resultado amplificaciones inespecíficas. Este parámetro debe ser determinado

experimentalmente y depende del contenido de GC y AT de los primers y de su

longitud. En general suele rondar los 55 a 60 grados centígrados.

3. Polimerización: La ADN polimerasa cataliza la síntesis simultánea de las dos cadenas

a partir de cada fragmento que actúa como primer. La polimerización o extensión se

realiza de 68 a 72 grados, dependiendo de la enzima utilizada y se calcula un minuto

por cada 1000 pares de bases a amplificar. Al cabo del primer ciclo de tres reacciones,

el fragmento de ADN elegido se ha duplicado y por lo tanto se ha duplicado la cantidad

de ADN molde disponible para el segundo ciclo, lo mismo ocurre después de cada ciclo

de replicación y así se produce una amplificación exponencial de moléculas.

Debido a la amplificación exponencial, la PCR es una técnica muy sensible que permite

detectar secuencias que se encuentran mínimamente representadas en una muestra. Por

ejemplo, se pueden amplificar segmentos de ADN humanos a partir de las pocas células

foliculares que rodean a un solo pelo.

 3. Programación del Termociclador T100 PCR:

o Como primer paso, conectamos el termociclador de manera adecuada y esperamos unos

cuantos segundos a que encienda.

o Seguidamente, verificamos que la tapa del termociclador esté asegurada correctamente.

o Configuramos el termociclador haciendo uso de un nuevo protocolo y establecemos

nuevos termo ciclos con los que se manejará la muestra, para lo cual nos guiamos de

un artículo científico.

o Cerramos de manera adecuada y con mucho cuidado la tapa. Posteriormente, se

presiona el botón para iniciar el ciclo de amplificación. De esta manera el

Termociclador inicia con el proceso de PCR. Manteniendo los parámetros y ciclos

anteriormente configurados.

o Una vez completado el proceso, el termociclador muestra una señal de finalización con

los datos en la pantalla.

o Para la verificación, abrimos la tapa del termociclador y retiramos las muestras

contenidas en la placa de PCR. Dichas muestras pueden ser analizadas utilizando ciertas

técnicas que vayan de acuerdo al experimento buscan realizar.

o Finalmente, apagamos el termociclador y lo desconectamos.

IV. CONCLUSIÓN

Se concluye que, el termociclador T100 PCR, es muy útil en el diagnóstico de

ADN, es decir, detectando la presencia de mutaciones en genes y la existencia de genes,

o a nivel de preparación en la amplificación de secciones específicas.

Además, el Termociclador T100 permite un control preciso de la temperatura en cada

ciclo de PCR, lo que es fundamental para la amplificación específica y eficiente de

 fragmentos de ADN. La precisión en la temperatura es esencial para garantizar

resultados reproducibles y fiables.

V. BIBLIOGRAFÍA

- J&B Lab. S.A.C. (2011). T100™ Termociclador Touch Screen con módulo de reacción de 96

pozos Bio-Rad. Obtenido de: https://jblabsac.blogspot.com/2011/08/t100-termociclador-touch

screencon.html#:~:text=El%20termociclador%20T100%20es%20un%20instrumento%20com

pacto%2C%20f%C3%A1cil%20de%20usar,PCR%20en%20una%20sola%20corrida.

- Tamay de Dios L y cols. (2013). Fundamentos de la reacción en cadena de la polimerasa (PCR)

y de la PCR en tiempo real. Tecnología en salud. Obtenido de:

https://www.medigraphic.com/pdfs/invdis/ir-2013/ir132d.pdf

- Palma, J. (2010). REDISEÑO DE UN TERMOCICLADOR PARA LA REPLICACIÓN DEL

ACIDO DESOXIRRIBONUCLEICO (ADN). PONTIFICIA UNIVERSIDAD CATÓLICA.

file:///C:/Users/sinti/Downloads/PALMA_JORGE_TERMOCICLADOR_ACIDO.pdf