SEP TecNM

INSTITUTO TECNOLÓGICO DE TIJUANA

“PREPARACIÓN DE MEDIOS DE
CULTIVO”
Practica lI

INGENIERÍA BIOQUÍMICA

Elaborado por:
EQUIPO #5 – GRUPO A

20212664 – HERNÁNDEZ SALAZAR AXXEL

20211732 – MORALES MILLÁN OMAR ADRIÁN

20211734 – PACHECO PLASCENCIA ANGEL RAMÓN

MICROBIOLOGÍA – BQ6A

LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA Y BIOQUÍMICA

Docente:
M.C. MARTHA MARGARITA PORRAS LANZAGORTA

Tijuana B.C. 13 Febrero de 2023

 ÍNDICE

1. INTRODUCCIÓN________________________________________________________3
2. OBJETIVO_____________________________________________________________4
3. MARCO TEÓRICO_______________________________________________________4
3.1 Esterilización_____________________________________________________________4
3.2 Desarrollo histórico de la esterilización________________________________________4
3.3 Importancia de la esterilización______________________________________________5
3.4 Aplicaciones de la esterilización______________________________________________6
3.4.1.1 Alimentos__________________________________________________________________6
3.4.1.2 Medicina___________________________________________________________________6

4. MATERIAL Y EQUIPO____________________________________________________7
5. METODOLOGÍA________________________________________________________7
6. RESULTADOS__________________________________________________________8
7. DISCUSIÓN DE RESULTADOS______________________________________________9
8. CONCLUSIÓN_________________________________________________________10
9. ANEXO______________________________________________________________10
Cuestionario__________________________________________________________________10
10. REFERENCIAS_______________________________________________________14

2
 1. INTRODUCCIÓN

Un medio de cultivo es el substrato o la solución que contienen los

elementos químicos necesarios para las células que se van a cultivar, deben
contener en forma asimilable, nitrógeno y proteínas (peptonas), lípidos, hidrato de
carbono, sales minerales, agua, extractos de carne o levaduras, agentes
solidificantes como el agar y la gelatina (en caso de medios sólidos). Debe ser
estéril, isotónico y poseer propiedades buffer y una viscosidad óptima.

Los medios sirven para uno de dos propósitos principales:

 Fomentar el crecimiento microbiano en forma que puedan comprobarse las

características del cultivo.

 Facilitar algunas reacciones bioquímicas que puedan ser demostrable por

observación directa, o bien indirectamente por subsecuentes reacciones en
presencia de algunos reactivos adicionales.

Como es natural, todas estas reacciones de cultivo, así como las

bioquímicas, dependen de la composición del medio y de la naturaleza del cultivo
que se estudie.

2. OBJETIVO

Preparar y conocer algunos medios de cultivo para la siembra de

microorganismos.

3. MARCO TEÓRICO

3.1 Medios de cultivo

ykuk

3.2 Desarrollo histórico de los medios de cultivo

sadags

3
3.3 Sistema Durham

sdv

3.4 Tipos de medio de cultivo

fsv

3.5 Importancia de los medios de cultivo

ggadsfg

3.6 Composición de los medios de cultivo

dfgdgdf
3.6.1.1 Agar cuenta estándar (ACE)

sfbs
3.6.1.2 Caldo cerebro corazón (BHI)

dfb
3.6.1.3 Agar eosina y azul de metileno (agar EMB)

dfb
3.6.1.4 Caldo lactosado

dfb
3.6.1.5 Caldo lactosa bilis verde brillante

fbd
3.7 Aplicaciones de los medios de cultivo

3.7.1.1 Medicina / Aplicación clínica

dbfd

3.7.1.2 Alimentos

Bdfb

3.7.1.3 Industrial

4
fdg
4. MATERIAL Y EQUIPO

 25 tubos de ensayo.  Medios de cultivo.

 3 pipetas de 1 mL.
 Agar cuenta estándar.
 3 matraces Erlenmeyer de 300
 Caldo cerebro corazón (BHI).
mL.
 Agar eosina y azul de
 Tubos de 20x18.
metileno (agar EMB).
 Tubos de 16x150.
 Caldo lactosado.
 Campanas de Durham.
 Caldo lactosa bilis verde
 Autoclave. brillante.
 Mechero.

5. METODOLOGÍA

 Preparación para medios de cultivo sólidos.

Agar cuenta estándar (ACE)

1. Leer la etiqueta de preparación del medio de cultivo, pesar la cantidad a utilizar
para preparar 470 ml del medio.
2. Colocar en un matraz y agregar la cantidad de agua requerida.
3.Calentar hasta ebullición para obtener un líquido transparente, agitando
constantemente, con el fin de que no se pegue en el fondo del matraz.
4. Colocar 250 ml del medio en un matraz, después taparlo con algodón, gasa y
cubrirlo con papel.
5. Distribuir el medio en 11 tubos en porciones 15 mL y taparlos.
6. En otros 6 tubos adicionar 7 mL del medio y taparlos.
7. Colocar todos los tubos llenos dentro de una canastilla de metal o recipiente de
plástico, etiquetarlos y poner cinta indicadora.
8. Esterilizar.
9. Solidificar en forma inclinada los tubos que contienen 7 mL de medio.

5
Agar de eosina azul de metileno (EMB)
1. Leer la etiqueta de preparación del medio de cultivo, pesar la cantidad a utilizar
para preparar 130 ml del medio.
2. Colocar en un matraz y agregar la cantidad de agua requerida.
3. Calentar hasta ebullición, agitando constantemente, con el fin de que no se
pegue en el fondo del matraz.
4. Colocar en el matraz un tapón con algodón y gasa, cubrirlo con papel, etiquetar
y poner cinta indicadora .
5. Esterilizar en autoclave.

 Preparación para medios de cultivo líquidos.

Caldo cerebro corazón (BHI)
1. Leer la etiqueta de la preparación.
2. Pesar la cantidad a utilizar para preparar 35 ml del medio de cultivo.
3. Colocar en un matraz y agregar la cantidad de agua requerida.
4. Agitar para homogenizar el medio.
5. Si no se disuelve perfectamente, calentar un poco hasta obtener un líquido
transparente.
6. Distribuir 5 mL del medio en los tubos y tapar.
7. Colocarlos en una canastilla y etiquetar.
8. Esterilizar.

Caldo lactosado doble concentración y concentración normal.

1. Leer la etiqueta de la preparación del medio de cultivo.
2. Pesar la cantidad a utilizar para preparar 110 mL del medio de cultivo de
concentración normal y también pesar la cantidad necesaria para 110 mL del
medio de concentración doble.
3. Colocar en un matraz y agregar la cantidad de agua requerida.
4. Agitar para homogenizar el medio.
5. Si no se disuelve perfectamente, calentar un poco hasta obtener un líquido
transparente.

6
6. Colocar una campana de Durham en cada tubo, adicionar 20 mL a los tubos
grandes del medio de doble concentración, 10 mL en los de 16x150 del medio de
concentración normal y tapar.
7. Colocarlos en una canastilla y etiquetar.
8. Esterilizar.

Caldo lactosa bilis verde brillante

1. Leer la etiqueta de la preparación del medio de cultivo.
2. Pesar la cantidad a utilizar para preparar 110 ml del medio de cultivo.
3. Colocar en un matraz y agregar la cantidad de agua requerida.
4. Agitar para homogenizar el medio.
5. Si no se disuelve perfectamente, calentar un poco hasta obtener un líquido
transparente.
6. Colocar una campana de Durham en cada tubo, adicionar 10 mL del medio en
los tubos de 16x150 tapar.
7. Colocarlos en una canastilla y etiquetar.

7
 6. RESULTADOS
El objetivo propuesto de la practica se cumplió, ya que se pudieron preparar
los medios de cultivo propuestos para esta patica de laboratorio, además, con la
elaboración de este reporte e investigando en diversas fuentes se logró
comprender la clasificación de medios de cultivo y las características mas
importantes de cada uno de ellos.
Los medios de cultivo que se prepararon se presentarán a continuación
junto con los cálculos pertinentes que se indicaba en el contenedor de cada uno
de ellos:
Agar cuenta estándar (ACE)
Para una concentración normal se requieren 23.5 g para 1000 mL de agua
destilada. Para preparar 470 mL:
23.5 g 1000 mL x= (470 mL)(23.5 g) x=11.045 g
x 470 mL 1000mL
Agar eosina azul de metileno (EMB)
Para una concentración normal se requieren 36 g para 1000 mL de agua
destilada. Para preparar 130 mL:
36 g 1000 mL x = (130 mL)(36 g) x=4.68 g
x 130 mL 1000 mL
Caldo infusión cerebro corazón (BHI)
Para una concentración normal se requieren 37 g para 1000 mL de agua
destilada. Para preparar 35 mL:
37 g 1000 mL x = (35 mL)(37 g) x=1.295 g
x 35 mL 1000 mL
Caldo lactosado
Para una concentración normal se requieren 13 g para 1000 mL de agua
destilada. Para preparar 110 mL:
13 g 1000 mL x= (110 mL )(13 g) x=1.43 g
x 110 mL 1000 mL
Caldo lactosado doble concentración
Para una concentración normal se requieren 13 g para 1000 mL de agua
destilada, si queremos concentración doble, entonces debemos aumentar el doble

8
de caldo lactosado (26 g) y mantener los 1000 mL de agua destilada. Para
preparar 35 mL:
26 g 1000 mL (110 mL)(26 g)
x= x=2.86 g
x 110 mL 1000 mL
Caldo lactosado bilis verde brillante
Para una concentración normal se requieren 40 g para 1000 mL de agua
destilada. Para preparar 110 mL:
40 g 1000 mL (110 mL)(40 g)
x= x=4.4 g
x 110 mL 1000 mL
Para una distinción visual de cada medio de cultivo se decidió realizar un
cuadro comparativo, donde se expresan las características de los medios de
cultivo preparados y clasificación en cuanto a su estado de agregación final:

Tabla 1. Comparación de características de medios de cultivo preparados.

Cada medio de cultivo se guardó de la siguiente manera: ACE, 250 mL en

un matraz Erlenmeyer, 11 tubos con 15 mL, 6 tubos con 7 mL (inclinado); de agar
eosina azul de metileno se colocaron 130 mL en un matraz Erlenmeyer; de caldo
infusión cerebro corazón se colocaron 5 mL en 6 tubos; de caldo lactosado a
concentración normal se colocaron 10 mL en 10 tubos; del caldo lactosado a
concentración doble se colocaron 20 mL en 5 tubos y finalmente se colocaron 10
mL de caldo lactosado bilis verde brillante en 10 tubos. Todos los tubos están en
sistema Durham, el cual nos permite visualizar gas contenido, generado de lo que
se cultiva. Por último, se esterilizaron todos los medios de cultivo en la autoclave

9
(calor húmedo) a 121 °C y 15 Lb/in 2 de presión por 15 minutos, después se
refrigeró y guardo para su uso posterior.

7. DISCUSIÓN DE RESULTADOS

Gracias a la preparación de medios de cultivo podremos realizar prácticas

posteriores para nuestro curso de microbiología, pero lo más importante de esto
es que se lograron realizar algunos de los diferentes tipos de medios de cultivo
que existen, así como sus características individuales.

Se prepararon 6 medios de cultivo: agar cuenta estándar, agar de eosina

azul de metileno, caldo cerebro corazón, caldo lactosado en concentración normal,
caldo lactosado en concentración doble y caldo lactosa bilis verde brillante. Los
medios de cultivo sólidos, que son agar cuenta estándar y agar de eosina azul de
metileno, se calentaron hasta ebullición en agitación constante; esto es necesario
porque contienen componentes que necesitan la temperatura de ebullición para
solidificar el medio al enfriarse gradualmente. En contra parte, los medios de
cultivo líquidos no deben llegar a ebullición

El agar cuenta estándar se clasifica como un medio de cultivo no selectivo,

debido a que en este se puede presentar el crecimiento de cualquier tipo de
microorganismo si se presentan condiciones adecuadas. En cuanto al agar eosina
azul de metileno se le clasifica como selectivo ya que en este se da el crecimiento
de microorganismos gran negativo, además es diferencial ya que los colorantes
que presenta son indicadores de proliferación de microorganismos fermentadores
de lactosa, como lo es la E. coli.

Caldo lactosado y caldo bilis verde brillante están dentro de la clasificación

de medios de cultivo selectivos que son muy común mente usados para análisis y
prueba de coliformes fecales. Sin embargo, el caldo bilis verde brillante es
altamente selectivo debido a que su composición química inhibe la proliferación de
microorganismos que no son coliformes fecales, mientras que en el caldo
lactosado pueden crecer cualquier tipo de coliformes. Para cada medio de cultivo

10
se deben dar condiciones especificas dependiendo de lo que se quiera inocular
(sembrar).

8. CONCLUSIÓN

sff

9. ANEXO

Cuestionario

dgnrn

11
10. REFERENCIAS

12