“AÑO DE LA UNIDAD, LA PAZ Y EL DESARROLLO”

FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD

ESCUELA ACADEMICA PROFESIONAL DE MEDICINA HUMANA

TEMA

• Preparación medios de cultivo

• Siembra por estaría en placa

CURSO

Microbiología y parasitología

DOCENTE

Lucy Maribel Yovera Castro

INTEGRANTES

Adanaque Mendoza Grecia Nicolle

PIURA-PERÚ
INTRODUCCION:

Para permitir el crecimiento de microorganismos en el laboratorio, es necesario aportarles un

medio con nutrientes y condiciones fisicoquímicas adecuadas para su desarrollo.

El medio de cultivo es aquel que contiene agua y una serie de nutrientes, necesarios para su
metabolismo. Normalmente se utilizan placas de Petri con agar más nutrientes específicos (según
el microorganismo que se desea aislar), aunque también existen medios de cultivo en tubo.

En la placa, las zonas de crecimiento aisladas son masas de células que han crecido a partir de una
célula original y se denominan colonias.

No todos los microorganismos son cultivables en el laboratorio, pero sí una enorme cantidad de
ellos.

Podría hablarse de cultivos bacteriológicos porque en la mayoría de los casos lo que se cultiva en
el laboratorio clínico son bacterias, pero también lo pueden hacer otro tipo de microorganismos,
como es el caso de los hongos.

La gran diversidad metabólica que tiene este conjunto de organismos explica la amplia gama de
medios de cultivo que existen en el mercado.
MATERIALES (PREPARACIÓN MEDIOS DE CULTIVO):

Un cultivo es un sustrato o solución de nutrientes en los que crecen y se multiplican lo

microorganismos en el laboratorio, con el objetivo de aislar las diferentes especies bacterianas con
el fin de identificarlas y realizar estudios complementarios

Clasificación

Por la consistencia

• Líquidos: Contiene nutrientes a los cuales se les adiciona sustancias con la

capacidad de mantener estables el pH entre ellos podemos encontrar el
caldo nutritivo y caldo peptona

• Solidos:
Se obtiene debido a la presencia de agar una sustancia de tipo polisacárido
que se obtiene de algas marinas, ese se agrega a un medio liquido
determinado al tener un medio solido nos facilita tener colonias
bacterianas aisladas

• Semisólidas
Son similares a los medios solidos la única diferencia es que estos se les
disminuye la cantidad de agar, lo que permite la observación y registro
de bacterias móviles.

Por el origen

• Sintéticos:
Son medios compuestos por productos químicos conocidos y se utilizan
para realizar estudios metabólicos, por ejemplo:
- Agar blanco
- Agar eosina azul de metileno

• Naturales:
Son aquellos medios que se preparan a partir de sustancias naturales ya sean de origen
animal o vegetal, por ejemplo:
- Suero
- Leche
- Papa
- Zanahoria
Por la composición y utilización

• Medios simples:
Los cuales poseen los requisitos nutricionales que permiten el
desarrollo bacteriano general, por ejemplo
- Agar nutritivo
- Caldo nutritivo

• Medios enriquecidos:
Los cuales son medios simples o comunes, a los que se les añade ciertos elementos
como:
- Sangre
- Suero
- Huevo
- Glucosa
- Vitaminas

• Medios selectivos:
Se consiguen añadiendo compuestos químicos nocivos para
algunas bacterias cuyo crecimiento no es de interés o también
mediante una alteración en las condiciones físicas del medio entre
algunos ejemplos tenemos:
- El agar MacConkey

• Medios diferenciales:
A estos medios se les adiciona sustancias para que solo crezcan
ciertas bacterias y estas al actuar sobre algunas de las sustancias
adicionadas permitan observar macroscópicamente ciertas
propiedades de crecimiento que ayudan a diferenciar sus colonias
de otras especies entre algunos ejemplos encontramos:
- Agar eosina azul de metileno

Procedimiento práctico

Los medios de cultivo se almacenan en frascos de plásticos tienen una etiqueta donde esta toda la
información sobre el medio como la composición, fecha de vencimiento, pictogramas de peligro, y
la fórmula de preparación, las cuales crucial para el calculo del volumen deseado a preparar
Cálculos para la preparación de un medio de cultivo

Los cálculos se realizan con la formula de regla de 3,

CÁLCULOS
comenzaremos con

• Caldo Nutritivo: CALDO NUTRITIVO

La fórmula nos indica que para preparar 1000 ml se
Necesitan 13 gr del medio en este caso vamos a
preparar 100 ml y por regla de 3 nos da un total de
1.3 gramos es decir que se resolverán 1.3 gramos
de caldo Nutr itivo en 100 ml de agua destilada.

• Medio SIM: CÁLCULOS

La fórmula nos indica que para preparar 1000 ml se
necesitan 36.23 gramos del medio en este caso vamos MEDIO SIM
a preparar 100 ml por regla de 3, nos da un total de
3.6 gramos, es decir que se disolverán 3.6 gramos de
medio SIM en 100ml de agua destilada

1. Con los datos calculados vamos a pesar cada medio.

2. Se coloca papel aluminio en la balanza y se pone a 0.

3. Destapamos el medio de cultivo, se quita el tampón

de seguro el cual evita la hidratación del medio.

4. Y agregamos el medio al contenedor de aluminio hasta

llegar al valor calculado.

5. Se debe tapar el medio muy bien para almacenarlo.

 6. Se agrega el medio a un Erlenmeyer, se pesa un poco más del valor
deseado debido a quedan restos en el papel aluminio, y se marca con
el nombre del medio.

7. A cada Erlenmeyer se le agrega el valor correspondiente de agua.

8. Posteriormente se lleva al calentamiento y agitamos continuamente con una varilla de

vidrio.
• Como se puede observar al inicio el medio es turbio
• Se continúa mezclando hasta que llegue al primer hervor
y se debe retirar del calor debido que estos medios pueden
rebotarse.
• Se realiza este mismo procedimiento 3 veces más.

9. Los medios que se servirán en cajas Petri se les tapa con papel aluminio y estarán listos
para la esterilización en autoclave.

10. Al final el medio se vuelve más cristalino.

11. Por el contrario, los medios que se van a servir en tubos, se miden

el volumen agregar que es de 12 ml con una probeta limpia y

estéril, y se agrega a cada tubo.

12. Los tubos no se tapan por completo, la tapa debe quedar floja.

13. Se colocan en un recipiente plástico que sea resistente al calor, y se lleva a esterilizar en
autoclave.

Esterilización de medios de cultivo

1. Se debe verificar que el nivel del agua toque la reja de metal, esto se
debe hacer antes y después de esterilizar, el nivel del agua no
debe de estar por debajo

2. Una vez conectada la autoclave a la corriente eléctrica se enciende

3. Se lleva la perilla del termostato hasta 9

4. Se colocan los medios en el recipiente interno del aluminio

5. Posteriormente se toma la tapa del mango superior, y se introduce

el tubo de escape del aire en la pestaña que se encuentra en él

recipiente interno de aluminio y se tapa la autoclave.

6. Se debe verificar que la distancia entre la tapa y la base sea igual en todos los lados, y se
colocan los seguros ajustando en parejas opuestas

7. Se verifica que estén bien ajustados, de lo contrario el aire se escapa, y no se lograra el

proceso de esterilización.

8. Y por último se cierra la válvula de control de aire, como se

observa la presión comienza a subir, cuando suba hasta

15 libras de presión y los 121° C, se baja la perilla del

termostato hasta 5 y se mantiene en estas condiciones

de presión y temperatura por 20 minutos.

9. Para ello giramos el cronómetro y cuando termine el tiempo sonara una campana.

10. Al terminar los 20 minutos se baja la perrilla del termostato hasta 0 y se apaga la
autoclave.

11. Se debe esperar hasta que la presión baje a 5 libras pasado este
tiempo se levanta la válvula de control de aire.

12. Posteriormente se habré los seguros en parejas opuestas, y

se quita la tapa.

13. Sacamos los Erlenmeyer con los medios y se llevaran a la cabina de flujo laminado

14. También sacamos el recipiente con los tubos y debemos

cerrarlos por completo y colocarlos en una gradilla para llevarlos

a refrigeración.
Esterilización de cajas

1. Envolvemos las bajas Petri con papel Graf

2. Y se llevaran al horno para esterilización a 20°C por 2 horas

3. Pasado este tiempo se sacan del horno

4. Se apaga el equipo

5. Se llevan a la cabina de flujo laminado

6. Una vez ubicados a la cabina de flujo laminado, se sacan las cajas

Petri con mucho cuidado del empaque, y se colocan sobre la mesa

7. Una vez que tengamos esterilizados los medios y las cajas Petri se procede a servir los
medios.

Servir medios de cultivo

1. Se toma la caja Petri sin abrirla, se flamea la boca del Erlenmeyer.

2. Se abre la caja Petri.

3. Y se sirve el medio, todo este procedimiento se debe realizar cerca del mechero.

4. Bajamos la caja Petri a la mesa y dejamos solidificar.

Se realiza el mismo procedimiento con el resto de medios de cultivo

5. Una vez solidificados se empaque con vinipel.

6. Y se marca con el nombre del medio.

7. Y se llevan a refrigeración.

8. Al final del proceso el medio solido se observa así:

9. El medio liquido se observará así:

10. Y el medio semisólido se observará así:

MATERIALES (SIEMBRA POR ESTRIA EN PLACA)

Los medios solidos contenidos en cajas de Petri se inoculan mediante la técnica de siembra por
estría, la que puede ser:

• Recta u
• ondulada

Estas técnicas generalmente se emplean para asilar a los microorganismos, observar cada
característica colonial y algunas características metabólicas.

Material

Para realizar esta siembra empleamos una:

❖ Asa bacteriológica
❖ Mechero
❖ Cajas de Petri con medio de cultivo

A continuación, procederemos a efectuar la siembra, para lo cual podemos utilizar algunas de las
siguientes técnicas

Estría recta

Esta se emplea para observar alguna característica metabólica o algún efecto antagónico

Procedimiento:

1. Trabajando siempre en condiciones asépticas, tomamos el

inóculo.

2. Abrimos la caja y trazamos una o varias líneas rectas en la

superficie del medio

3. Cerramos la caja y la colocamos en posición invertida.

4. Finalmente esterilizamos el asa comenzando de la base hacia

la punta
Estría continua

Para realizarla colocamos el asa que contiene el inóculo en una posición

ligeramente inclinada en un punto de la periferia de la placa distribuimos el

inoculo con estrías cerradas, hasta cubrir una tercera parte de la superficie

del medio y sin separar el asa la colocamos en posición vertical y continuamos trazando las estrías

más separadas hasta cubrir toda la superficie.

Estría en cuadrantes

1. Otra forma en que podemos inocular la placa es realizando el estriado en

cuadrantes, para ello marcamos los cuadrantes en la base de la caja.

2. Después tomamos el inóculo con el asa, y lo colocamos en un punto de

la periferia del primer cuadrante.

3. Trazamos estrías cerradas hasta llegar casi al centro de la

placa procurando no tocar las líneas divisorias

4. Tapamos la caja y la giramos a la posición del 2 cuadrante.

5. Esterilizamos el asa desde la base a la punta.

6. Enfriamos, tomamos inóculo de la última estría del primer cuadrante y estriamos el

segundo cuadrante.

Este procedimiento se repite con el tercer y cuarto cuadrante, tomando para ello el inóculo del
cuadrante anterior.

Una vez que hemos terminado de inocular, cerramos la placa y la colocamos en posición invertida
sobre la mesa y esterilizamos el asa

Estría en cuadrante radial:

1. En este caso distribuimos el inóculo hasta aproximadamente la

tercera parte de la caja mediante estrías cerradas.

2. Tapamos la caja y la giramos aproximadamente 90° con respecto a

la zona estriada.
 3. Procedemos a estriar la segunda sección hasta una tercera parte del
4. área teniendo cuidado de no tocar las estrías previas.

5. Cerramos la caja y la giramos nuevamente 90°.

Y realizamos la misma operación 2 veces mas

Estría cruzada

1. En esta después de estriar el primer sector se esteriliza el asa.

2. Se deja enfriar y se cruza la parte final de las ultimas estrías y se

procede a estriar la segunda sección, esto se repite en las siguientes secciones.

Interpretación:

Independientemente de la técnica que se emplee la finalidad de la siembra

por estría ondulada en caja, es la obtención de colonias aisladas

Punto crítico:

Es importante abrir la caja lo suficiente para realizar la manipulación, recuerda que mientras
trabajemos en una zona de asepsia nuestro cultivo no se contaminara, en la estría cruzada es
importante que el asa se encuentre estéril y fría antes de inocular cada cuadrante.

En resumen:

Como hemos visto con la estría recta podemos observar alguna característica metabólica o efecto
antagónico, en tanto con la ondulada en cualquiera de sus modalidades se asegura la dilución
progresiva de la muestra en la superficie del agar, lo que nos permitirá obtener colonias aisladas
CONCLUSIÓN:

• De acuerdo con lo realizado en la presente práctica se concluye que es de gran

importancia preparar adecuadamente los medios de cultivo, añadir la cantidad de solución
exacta y disolverla correctamente para obtener los resultados esperados.

• Se puede elaborar medios de cultivo de manera sencilla, siendo muy útil para el estudio de
microorganismos debido a que en este tipo de medios se los puede reproducir con
facilidad.

• Elaborar medios de cultivo resulta eficiente para la reproducción y el posterior aislamiento

de alguna cepa de microorganismo que nos interese estudiar.

• Mediante el desarrollo de esta práctica definimos, estudiamos y aplicamos los

procedimientos que se deben realizar para la elaboración de un medio de cultivo, es claro
que esto es referido para con la unidad que estamos estudiando, microbiología, por otro
lado, conocimos y utilizamos algunos antibióticos naturales que existen, por lo tanto,
creemos firmemente que la práctica fue muy amena y fructífera.
REFERENCIAS

https://www.youtube.com/watch?v=VcqvgUsbZiY

https://www.youtube.com/watch?v=ioZv-PIAC_8

https://www.youtube.com/watch?v=W6xpPJZIb1E
ANEXOS: